子宫内膜炎病牛用药前后肿瘤坏死因子-α含量变化的研究

应用ELISA方法,研究了患子宫内膜炎奶牛用药前后血液及子宫粘液肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量变化.结果表明,无论是血液还是子宫粘液,患病奶牛的TNF-α含量均高于正常健康奶牛;患病奶牛经新宫得康混悬液治疗后子宫粘液和血液TNF-α含量均显著低于用药前,并且用药2次后TNF-α浓度降到了健康牛水平.说明应用新宫得康混悬液治疗奶牛子宫内膜炎能够净化子宫环境,达到治疗效果.     

犬隐睾症中双氢睾酮水平及其合成酶的表达

【目的】探明单侧犬隐睾症中阴囊睾丸与腹腔睾丸组织内5α-还原酶1型(5α-reductase 1, 5α-red1)、5α-还原酶2型(5α-reductase 2, 5α-red2)与雄激素受体(Androgen receptor, AR)的表达模式。【方法】应用HE染色观察阴囊睾丸和腹腔睾丸的组织形态变化,利用免疫组织化学技术分析5α-red1、5α-red2和AR在阴囊睾丸和腹腔睾丸中的表达定位。利用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定双氢睾酮(Dihydrotestosterone, DHT)浓度在单侧犬隐睾症中阴囊睾丸与腹腔睾丸中的水平变化。同时,实时荧光定量PCR(qPCR)和蛋白质免疫印迹(Western blot)分析5α-red1、5α-red2和AR的转录和翻译水平。【结果】结果显示腹腔睾丸组织中胶原纤维增多,曲精小管内精原细胞和成熟精子消失,同时5α-red1、5α-red2和AR在腹腔睾丸和阴囊睾丸中的间质细胞、支持细胞中均有表达。腹腔睾丸中DHT水平显著降低,5α-red1、5α-red2及AR转录水平和翻译水平在阴囊睾丸中的表达均显著高于腹腔睾丸。【结论】单侧...     

Ca2+参与异三聚体G蛋白调控的拟南芥侧根生长发育过程

以拟南芥的野生型(ws)、异三聚体G蛋白α亚基基因GPA1缺失突变体(gpα1-1、gpα1-2)和超表达突变体(wGα、cGα)为材料,在舍有不同质量浓度(0～0.2mg/L)NAA的培养基内,添加常用的钙通道抑制剂,对拟南芥侧根生长发育的形态进行了观测.结果表明:1)在不含Ca2 的培养基内,5种基因型侧根生长发育的差异显著性明显降低.2)在含有电压依赖型钙通道有机抑制剂(异搏定和地而流卓)的培养基内,5种基因型侧根的生长发育与未施加抑制剂的差异显著性一致.3)在舍有不同浓度的3价无机离子的培养基内,5种基因型侧根的生长发育与未施加抑制剂的差异显著性不一致.初步表明了在NAA诱导的拟南芥侧根生长发育过程中Ca2 可能是G蛋白的下游信号.     

猪干扰素α1与胸腺肽α1融合蛋白原核表达系统的建立

依据GenBank已发表的猪干扰素α1(poIFN-α1)成熟肽基因序列,胸腺肽α1(THY-α1)蛋白序列及Escherichia coliB密码子使用频率表,优化并人工合成poIFN-α1和THY-α1基因,利用SOE-PCR法在poIFN-α1和THY-α1之间设计1个13肽Linker。将融合基因克隆至pRSFDue-t 1表达载体,转化BL21(DE3)感受态,37℃培养至菌液OD600为0.6~0.8,IPTG(0.5 mmol/L)诱导,20℃培养12h,SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果表明:目的蛋白为菌体内可溶性表达,经强阴离子交换层析和疏水层析纯化获得高纯度poIFNα1-THYα1融合蛋白。     

黑曲霉内切β-木聚糖酶三维结构模建及分子进化分析

内切β-木聚糖酶是一类木聚糖降解酶,对黑曲霉来源的内切β-木聚糖酶核酸序列进行序列比对,构建进化树;采用同源模建方法模建内切β-木聚糖酶的三级结构,并预测内切β-木聚糖酶的二级结构。进化树将内切β-木聚糖酶分成3个组：第1组和第2组的3-D结构相似,而第3组的3-D结构和前2者差别较大。第1组合有1个α-螺旋和13个β-折叠二级结构,二硫键位于Cysf119和Cysm之间;第2组合有1个α-螺旋和13个β-折叠二级结构;第3组合有13个α-螺旋、3个3,10-螺旋和9个β-折叠二级结构,二硫键位于Cys281和cys287之间,而且第3组还含有一个复杂的β-α-β结构域。该研究为黑曲霉内切β-木聚糖酶的结构,功能和蛋白质工程研究提供了一定的理论基础。     

推广的Libera积分算子对于某一类解析函数的运算

用T_k表示在单位圆E={z:∣z∣<1}内解析,形如f(z)=z-α_2z~2-α_3z~3-……-α_nz~n-……(α_n≥0,n≥2)的函数之全体。对于T_k的子类L_k(α,β,γ),将证明如果f∈L_k(α,β,γ),那么函数F_c(f)=(c+1)/z~c integral from 0 to Z t~(c-1)f(t)dt也属于L_k(α,β,γ)。     

甘加型藏羊发情周期血浆雌激素测定及HPO轴ERα的表达

为研究甘加型藏羊(Ovis arise)发情周期内血浆雌激素的分泌规律及其受体α(Estrogen receptor α,ERα)在下丘脑-垂体-卵巢(Hypothalamic-pituitary-ovarian axis,HPO)组织中的表达及分布,选取发情周期内健康且未孕甘加型藏羊32只,运用酶联免疫分析法(ELI...     

重组鸡α-干扰素对鸡外周血T淋巴细胞亚类的影响

重组鸡α-干扰素(rChIFN-α)静脉注射4~6周龄SPF鸡,24 h后采血分离淋巴细胞,通过流式细胞术测定不同时间外周血中CD4+和CD8+T淋巴细胞的百分率。结果显示,rChIFN-α可以在48~72 h内明显提高CD4+T淋巴细胞的百分率,并下调CD8+T淋巴细胞的百分率,证明rChIFN-α具有显著的免疫调节作用。     

关于亚纯函数正规族的一点注记

假设F是区域D包含于C的一亚纯函数族,其所有零点的重级均不小于κ．如果α（z）是D内的不等于零的全纯函数,且对每个f∈F,^-EfL（f）（α（z））=^-Ef（α（z））,则F在D内正规,其中L（f）是关于f的线性微分多项式,其中κ是正整数．同时获得了关于正规函数的相应结果．     

盐度对青鳉鱼肠内Na+-K+-ATPase基因表达的影响

用实时定量RT-PCR(Q-RT-PCR)检测不同盐度对青鳉鱼肠内Na -K -ATPaseα和Na -K -ATPaseβ基因表达的影响。结果表明,青鳉鱼肠内Na -K -ATPaseα基因表达量在5 g/L1、5 g/L和25 g/L的盐水中不变,Na -K -ATPaseβ基因表达在15 g/L2、5 g/L的盐水中被显著抑制(P<0.05)。盐度升高抑制青鳉鱼肠内Na -K -ATPaseβ基因表达。     

不同处理小鼠卵巢组织中HIF1α基因的表达分析及其真核表达载体构建

为研究低氧诱导因子1α(HIF1α)及其下游基因胰岛素样生长因子2(IGF-2)和血管内皮生长因子(VEGF)在注射孕马血清促性腺激素(PMSG)(促排组)的促排卵巢与注射生理盐水(对照组)的普通卵巢组织中的mRNA转录水平,构建小鼠HIF1α基因真核表达载体,观察其转染的小鼠颗粒细胞中HIF1α基因的表达情况,以探讨HIF1α与小鼠卵泡发育的关系。用荧光定量PCR检测不同处理组织中HIF1α、VEGF及IGF-2 mRNA转录水平,免疫组化技术定位HIF1α在卵泡中的表达,基因重组技术构建HIF1α-pcDNA3.1真核表达载体并将其转染小鼠颗粒细胞,荧光定量PCR与Western blot技术检测转染细胞中HIF1α表达情况。结果表明:HIF1α在促排小鼠卵巢中的mRNA转录水平极显著高于普通小鼠卵巢组织(P0.01),在促排组和对照组的其他组织内HIF1αmRNA转录水平并无显著差异;HIF1下游基因VEGF和IGF-2在促排小鼠卵巢组织中的转录水平分别显著(P0.05)与极显著(P0.01)高于普通小鼠卵巢组织中的转录水平;卵泡发育至有腔卵泡后,HIF1α才开始在卵泡中表达;HIF1α-pcDNA3.1真核表达载体能够在颗粒细胞中转录HIF1αmRNA并翻译成蛋白。结论:HIF1α只在有腔卵泡内表达,其转录水平与卵巢内有腔卵泡数量成正相关,HIF1α通过上调VEGF和IGF-2参与卵泡的发育及成熟。     

酵母α-半乳糖苷酶组成型表达基因的重组构建及转化

用PCR方法从酿酒酵母AH109中扩增出α-半乳糖苷酶MEL1基因片段，与乙醇脱氢酶组成型启动子重组后构建成表达重组质粒pGAD-GAL,将重组质粒pGAD-GAL转化不带α-半乳糖苷酶基因的酿酒酵母后，在预先涂布有X-α-Gal的亮氨酸缺陷培养基(SD／-Leu)平板上选择到蓝色菌落，实现了α-半乳糖苷酶在酵母内的组成型表达。     

鸡α-干扰素成熟肽的原核表达及其多价血清的制备

以PCR方法从活化的鸡外周血淋巴细胞中扩增鸡α-干扰素的成熟肽基因序列,构建原核表达质粒pET32a-α和pGEX6p-α;SDS-PAGE及Western blotting法检测两载体特异性表达成熟肽;将纯化的pET32a-α诱导表达产物免疫小鼠,收获小鼠血清并以pGEX6p-α诱导表达产物检测其中特异性抗体滴度。结果表明:扩增的鸡α-干扰素成熟肽基因成功表达,原核表达产物免疫小鼠可产生特异性抗体,抗体效价为1∶12 000。其结果为制备安全、高效的重组干扰素奠定了基础,为定量检测机体内产生的α干扰素进而了解机体免疫状态提供较为可靠的技术手段。     

猪α干扰素在毕赤酵母中的高效表达和纯化

为了研制新型的猪用抗病毒制剂,开展了猪α干扰素（PoIFNα）在毕赤酵母中的表达和产物纯化研究。将PCR扩增的PoIFNα基因插入pPIC9k的SnaBⅠ和EcoRⅠ位点,构建了表达转移载体pPIC9k/PoIFNα;经酶切和测序鉴定,转移载体构建正确。pPIC9k/PoIFNα以限制性内切酶SalⅠ线性化后电转化毕赤酵母GS115菌株,经抗性筛选获得4拷贝PoIFNα基因的重组菌株GS115/PoIFNα;重组菌株经BMMY培养基诱导后上清中有目的蛋白,表达量达136 mg/L。表达产物经过SP-Sepharose 阳离子交换层析,可以得到纯度较高的rPoIFNα,纯化产物在MDBK细胞上抑制VSV的活性高达2.27×108 U/mg。     

望星空之——双子座

冬季猎户座非常显眼,先找到猎户座β星和α星,然后向东北方向延长,可看到两颗星,较亮的是双子座β星,较暗的是双子座α星。双子座内只有这两颗星比较亮。从α星开始的一串小星和从β星开始的一串星几乎平行,他们是友爱的两兄弟——卡斯托和普尔尤克斯。     

啤酒花α-酸异构化及测定

研究了煮沸时间、煮沸压力、啤酒花添加量及酸度等因素对啤酒花中α-酸异构化的影响.结果显示:在pH=9.5,加热时间60~100 min内,提高压力有利于α-酸异构化.     

不同药剂浸种对燕麦种子α-淀粉酶活力的影响

以牧民自留燕麦种子为材料,研究不同药剂浸种对其萌发时α-淀粉酶活力的影响。试验采用不同浓度赤霉素、抗坏血酸、水杨酸、硫酸铜对燕麦种子进行24 h浸种处理。测定燕麦种子发芽的第1、3、5、7天α-淀粉酶活力。结果表明:0.1 mmol/L水杨酸处理对燕麦α-淀粉酶活力的提高效果最佳,高浓度水杨酸(>0.2 mmol/L)对燕麦α-淀粉酶活力有抑制作用;0.3 mmol/L赤霉素对燕麦α-淀粉酶活力提高效果次之;抗坏血酸溶液对燕麦α-淀粉酶活力提高作用不明显;在一定浓度范围内Cu SO4对燕麦α-淀粉酶活性提高作用随浓度增大而增强。     

重组鸡α干扰素对雏鸡试验性贝氏隐孢子虫病的治疗效果

为探讨重组鸡α干扰素(IFN-α)对雏鸡贝氏隐孢子虫病的治疗作用,选用3日龄罗曼公雏,每只经口1次接种1×105个贝氏隐孢子虫卵囊,同时对不同组别雏鸡分别肌内注射500,1 000,2 000,4 000 IU·只-1的重组鸡IFN-α进行防治.结果表明,不同剂量重组鸡IFN-α均可减轻雏鸡贝氏隐孢子虫病的临床症状,减...     

猪STAT-1α基因的原核表达及其多克隆抗体制备

[目的]通过制备STAT-1α多克隆抗体,为进一步研究STAT-1α蛋白的功能特性及探索STAT-1α与猪瘟病毒间的相互作用机制奠定基础.[方法]利用RT-PCR从猪肾PK-15细胞中克隆出STAT-1α基因保守片段,与pET-32a（＋）构建原核表达重组质粒,转化原核宿主菌（Rosetta）,进行IPTG诱导表达,表达的重组蛋白经纯化和复性浓缩后,免疫小鼠制备STAT-1α多克隆抗体.[结果]STAT-1α基因能与原核表达载体pET-32a（＋）构建原核表达重组质粒pET-STAT-1o,转化大肠杆菌Rosetta后的最佳体外诱导条件是IPTG 0.5 mmol/L、诱导时间6h,其重组蛋白主要以包涵体的形式表达.STAT-1α多克隆抗体具有高效特异性,与真核细胞PK-15细胞作用后,在PK-15细胞内能检测到STAT-1α蛋白表达,可观察到大部分细胞胞浆内有绿色荧光,但胞核内几乎无荧光,即STAT-1α主要定位在正常PK-15细胞的细胞浆内表达.[结论]制备获得的猪STAT-1 α多克隆抗体特异性好,既能与原核细胞大肠杆菌（Rosetta）表达的STAT-1α反应,又能与真核细胞PK-15的STAT-1α发生反应.     

重组人胸腺肽α原在单一蛋白生产系统中的高效表达

利用冷休克表达载体构建含有人胸腺肽α原(proTα)编码基因的质粒并在大肠杆菌单一蛋白生产(SPP)系统中表达单一的可溶性蛋白。以proTαmRNA基因序列为模板敲出ACA序列,设计并合成proTα-lessACA目的基因片段后,直接克隆到原核冷休克表达载体pColdⅡ(sp-4)上,将pColdⅡ(sp-4)-proTα-lessACA质粒转化到Escherichia coli BL21感受态细胞中,筛选阳性克隆后采用NdeⅠ和HindⅢ限制性内切酶双酶切鉴定。共转pMaz F质粒后,采用冷休克方法表达proTα并采用SDS-PAGE检测鉴定。结果成功构建重组表达质粒pColdⅡ(sp-4)-proTα-lessACA,经冷休克表达后在E.coli BL21(DE3)菌中获得大量单一的proTα。原核表达质粒pColdⅡ(sp-4)-proTα-lessACA构建和单一proTα在SPP系统中表达的成功,为进一步研究proTα结构和生理功能提供帮助。