牵牛子种子提取物对朱砂叶螨触杀活性的测定

 【目的】研究牵牛子石油醚提取物中流分8对朱砂叶螨生物活性的作用机理。【方法】采用玻片浸渍法和叶片残毒法测定了流分8对朱砂叶螨成螨和卵的室内毒力,并采用生化方法测定了谷胱甘肽-S-转移酶、乙酰胆碱酯酶、单胺氧化酶、Ca2+-ATP酶活性的影响,通过透射电镜观察流分8对螨体内亚显微结构的破坏。【结果】流分8对朱砂叶螨成螨和卵均有很强的生物活性,对成螨和卵的LC50分别是0.4686 mg?ml-1和1.2212 mg?ml-1,LC90分别是2.5935 mg?ml-1和3.1234 mg?ml-1。牵牛子流分8处理朱砂叶螨后,螨体内解毒酶谷胱甘肽-S-转移酶被激活,这说明流分8中存在对朱砂叶螨有毒的物质;而乙酰胆碱酯酶、单胺氧化酶、Ca2+-ATP酶均受到不同程度的抑制,这可能引起神经传递的阻断,从而导致螨体的死亡。透射电镜下可见,流分8对螨体内表皮结构、肌纤维、细胞核膜、线粒体、内质网等均有不同程度的破坏。【结论】牵牛子可以有效杀死朱砂叶螨,作为新型植物源农药具有一定的开发价值。     

东莨菪素对朱砂叶螨的毒力及杀螨机理初探

采用玻片浸渍法测定东莨菪素对朱砂叶螨的触杀毒力,观察东莨菪素对朱砂叶螨的致毒症状,并测定其对朱砂叶螨神经系统靶标酶(乙酰胆碱酯酶、单胺氧化酶、Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶)活性的影响。结果表明,东莨菪素对朱砂叶螨24 h的触杀LC50值为1.24 mg/mL;中毒试螨表现出神经毒剂的致毒症状,如兴奋、痉挛等。在活体和离体试验中,东莨菪素均显著抑制试螨乙酰胆碱酯酶、单胺氧化酶、Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶的活性。研究还发现东莨菪素会引起试螨乙酰胆碱含量增加,可能是东莨菪素显著抑制试螨乙酰胆碱酯酶活性引起。据此推测东莨菪素对朱砂叶螨可能有神经毒性。     

双去甲氧基姜黄素及其N-甲基吡唑衍生物对朱砂叶螨 生物活性和多种酶活性的影响

【目的】明确双去甲氧基姜黄素（bisdemethoxycurcumin,BDMC）及其N-甲基吡唑衍生物（N-methylpyrazolebisdemethoxycurcumin,N-MPBDMC）对朱砂叶螨（Tetranychus cinnabarinus Boisduval）的生物活性及其体内多种酶活性的影响,为进一步证实其作用机理提供依据。【方法】采用玻片浸渍法测定BDMC及N-MPBDMC对朱砂叶螨雌成螨的触杀毒力,观察两者对朱砂叶螨的致毒症状,并测定其对朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶（AchE）、Ca2+-ATP酶（Ca2+-ATPase）、单胺氧化酶（MAO）、谷胱甘肽S-转移酶（GSTs）和羧酸酯酶（CarE）活性的影响。【结果】N-MPBDMC对朱砂叶螨雌成螨的触杀活性优于先导化合物BDMC,其中处理72 h后,N-MPBDMC对朱砂叶螨的LC50为21.77 mg•L-1,其毒力是BDMC的10.03倍,与95%哒螨灵原药的毒力相当。BDMC和N-MPBDMC分别处理朱砂叶螨雌成螨后,中毒试螨表现出类似神经毒剂的致毒症状,螨体内GSTs和CarE活性均有不同程度上升,AchE、Ca2+-ATPase和MAO活性均有不同程度下降,其中AchE活性平均分别下降了16.77%和36.57%,Ca2+-ATPase活性平均分别下降了17.55%和17.45%,MAO活性平均分别下降了8.04%和14.19%,GSTs活性平均分别上升了17.13%和18.93%,CarE活性平均分别上升了26.78%和25.98%。【结论】BDMC和N-MPBDMC对朱砂叶螨的致死作用可能与其显著降低螨体内神经系统相关酶活性有关,具体的作用靶标还有待进一步确证。     

β-谷甾醇对朱砂叶螨的触杀活性及杀螨机理初探

本研究旨在探究β-谷甾醇对朱砂叶螨的触杀活性及其对叶螨体态、内部结构的破坏。通过玻片浸渍法和叶片药膜法确定β-谷甾醇对朱砂叶螨杀螨的毒力,通过扫描电镜和透射电镜观察β-谷甾醇对螨亚显微结构的破坏,通过酶活检测方法,检测β-谷甾醇对乙酰胆碱酯酶和羧酸酯酶酶活的作用,通过荧光定量PCR方法测定β-谷甾醇对乙酰胆碱酯酶基因和羧酸酯酶基因相对表达量的影响。测定β-谷甾醇对朱砂叶螨雌成螨的LC30为1.0mg/mL。由扫描电镜和透射电镜观察可见,β-谷甾醇处理后朱砂叶螨表皮、肌纤维、线粒体、内质网、高尔基体等均受到不同程度的破坏。β-谷甾醇对朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶基因表达量和酶活都没有影响。β-谷甾醇对解毒酶羧酸酯酶酶活没有直接影响,但诱导羧酸酯酶基因的表达。研究结果表明了β-谷甾醇可以有效杀死朱砂叶螨,并且对螨体造成不同程度的破坏,作为新型植物源农药具有一定的开发价值。证实乙酰胆碱酯酶不是β-谷甾醇的作用靶标,但β-谷甾醇处理会诱导螨体内解毒酶的表达。     

花椒提取物对山楂叶螨的生物活性及作用机理的研究

试验研究了不同溶剂对花椒果实活性成分的提取及其对山楂叶螨的杀螨作用,结果表明:在4种不同溶剂的提取物中,花椒氯仿提取物(ZFCE)对卵和雌成螨都有较高的生物活性,当提取物浓度为2mg/ml时,处理山楂叶螨的卵、雌成螨24h后的校正死亡率分别达到了55.57%、64.14%,LC50值分别达到了2.09mg提取物/ml、1.13mg提取物/ml;ZFCE处理山楂叶螨雌成螨后,体内的乙酰胆碱酯酶、单胺氧化酶和谷胱甘肽-S-转移酶活性均受到不同程度的影响,其中乙酰胆碱酯酶被抑制,可以初步判断乙酰胆碱酯酶是ZFCE在山楂叶螨体内的重要靶标之一。     

棕榈油酸甲酯对朱砂叶螨生物活性的影响

为了研究棕榈油酸甲酯对朱砂叶螨生物活性的影响,采用玻片浸渍法和叶片残毒法测定棕榈油酸甲酯对害螨的生物活性,并采用生化方法对其体内几种酶的生物活性进行测定。结果表明,棕榈油酸甲酯具有较强的触杀和产卵抑制作用,质量浓度为5mg／mL时,对朱砂叶螨的雌成螨和卵24h后的校正死亡率分别达到79．82％,76．34％,LC50分别为1．8534mg／mL和2．2136mg／mL;雌成螨24h后产卵抑制率为79．45％,驱避率为95．85％。棕榈油酸甲酯处理朱砂叶螨后,螨体内解毒酶谷胱甘肽-S-转移酶被激活,说明棕榈油酸甲酯存在对朱砂叶螨有毒的物质;而乙酰胆碱酯酶、Na＋,K＋-ATPase均受到不同程度的抑制,可能引起神经传递的阻断,从而导致螨体的死亡。研究表明棕榈油酸甲酯可以有效杀死朱砂叶螨,作为新型农药具有良好的开发前景。     

朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶的表达纯化及其酶活测定条件优化

乙酰胆碱酯酶(Acetylcholinesterase,AChE)是生物体内保证神经信号正常传递的关键酶,是有机磷和氨基甲酸酯类农药的作用靶标。现研究拟采用发酵罐培养含pET-30a/ace的表达菌株E.coli BL21(DE3),大量表达纯化螨AChE,利用单因素试验和正交试验优化AChE活性的测定条件。结果表明:发酵培养的重组菌株大量表达约为68kD的朱砂叶螨AChE蛋白。底物浓度、温度、pH和酶浓度等各测定因素对朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶活性存在显著影响。确定朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶活性测定的最佳反应条件为:底物浓度1mmol/L,pH值7,温度35℃,酶浓度0.5mg/mL。通过体外发酵培养纯化获得了大量的朱砂叶螨AChE重组蛋白,确定了螨AChE活性测定的最佳条件,为进一步研究其酶学性质以及AChE抑制剂的体外筛选奠定基础。     

高温对木薯单爪螨保护酶活性的影响初步研究(英文)

[目的]木薯单爪螨是08年新入侵我国的重要害螨,在非洲、南美等木薯种植国家曾导致严重损失甚至绝收,目前我国相关研究几乎空白。温度是影响木薯单爪螨生长发育与繁殖的重要生态因子之一。为了解木薯单爪螨入侵中国后的适生性分布,解析其入侵、扩散及生态适应性机制,本文研究了极端高温对木薯单爪螨几种保护酶活性的影响,以为其监测预警与有效防控奠定基础。[方法]分别将木薯单爪螨幼螨、前若螨、后若螨和成螨置于42℃高温人工气候箱中处理不同时间(0.5,1,2,4,8,16and24h)后取存活个体,采用分光光度计终点测定法测定了42℃极端高温处理各龄期螨不同时间后其体内几种保护酶(多酚氧化酶PPO、过氧化物酶POD、抗坏血酸氧化酶AsA-POD、过氧化氢酶CAT、超氧化物歧化酶SOD和酯酶EST)活性的变化。[结果]结果表明,经42℃极端高温胁迫,木薯单爪螨幼螨和雌成螨的PPO、POD、AsA-POD、CAT活性显著增加、前若螨和后若螨CAT活性显著下降及其PPO、POD、AsA-POD活性的稳定性可能与木薯单爪螨耐热性相关。[结论]木薯单爪螨各龄螨经42℃极端高温胁迫后体内保护酶PPO、POD、AsA-POD以及CAT活性的变化可能与木薯单爪螨对高温的耐受性存在显著相关性。木薯单爪螨为新入侵我国热区的害螨,长期高温条件胁迫可能会导致其耐热性个体逐渐增多,种群耐热性增强,进而导致种群迅速扩张     

9种中药材粗提物对朱砂叶螨的触杀活性研究

[目的]筛选具有杀螨活性的中药材。[方法]采用玻片浸渍法室内测定了9种中药材不同溶剂的粗提物对朱砂叶螨雌成螨的触杀活性。[结果]粗提物浓度为2mg／ml时,木鳖子石油醚和氯仿粗提物、川楝子丙酮粗提物、马钱子甲醇、石油醚粗提物对朱砂叶螨成螨均有较高的杀螨活性,校正死亡率均大于70％,其中马钱子石油醚粗提物为最高（75．31％）。毒力测定表明,马钱子石油醚粗提物对朱砂叶螨成螨的杀螨毒力最高,其LJC。为0．70mg／ml。[结论]马钱子具有较好的杀螨活性。     

朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶真核表达载体构建及在293T细胞中表达条件

乙酰胆碱酯酶(AChE;EC 3.1.1.7)是神经传导中调节神经递质乙酰胆碱水平的一种关键酶,是有机磷和氨基甲酸酯类农药的主要作用靶标。目前关于朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶的真核表达还未见报道。本研究拟构建朱砂叶螨AChE的真核表达载体,进行在293T细胞中表达条件摸索。将朱砂叶螨野生型ace完整读框和去掉3’疏水区的ace基因分别插入到真核表达载体pcDNA3.1/V5-His-TOPO中,经PCR和双酶切鉴定及测序验证后,成功构建了真核表达载体pcDNA3.1/ace。采用GFP报告基因确定在293T细胞中表达条件摸索,结果表明293T细胞的最适转染时间为48h和LipofectamineTM2000转染试剂的最适加样量为20μL。本试验成功构建了朱砂叶螨AChE的真核表达载体,确定了在293T细胞中的表达条件,为后续筛选新型选择性AChE抑制剂奠定了基础。     

Biochemical Evidences for Scopoletin Inhibits Ca~(2+)-ATPase Activity in the Carmine Spider Mite,Tetranychus cinnabarinus(Boisduval)

[Objective] This study aimed to investigate the acaricidal effect of scopoletin, and provide the biochemical evidences of scopoletin influences Ca2 +-ATPase activity and gene expressions in the Carmine Spider Mite, Tetranychus cinnabarinus.[Method] The acaricidal effects of scopoletin were investigated by slip-dip method.Exposeed to different concentrations of scopoletin(0.16-2.5 mg/ml), Ca2+-ATPase activity in vivo and protein contents were investigated. For assessing the in vitro effect, Ca2+-ATPase enzyme(200 μl) prepared from normal mites were incubated with different concentrations of scopoletin reagents. [Result] Scopoletin exhibited significant inhibitory effect on Ca2+-ATPase activity both in vivo and in vitro, and resulted in increased protein contents; kinetic analysis showed that the catalytic capability of Ca2+-ATPase was significantly reduced by scopoletin. [Conclusion] Scopoletin exhibits a significant inhibitory effect on Ca2 +- ATPase, and its acaricidal effect against T. cinnabarinus might be due to the direct inhibition of Ca2+-ATPase.     

藏乌头乙酸乙酯部位的杀螨活性研究

[目的]研究藏乌头乙酸乙酯部位的杀螨活性。[方法]利用从青海采集的藏头乌(Aconitum L.)进行层析分离提取其乙酸乙酯部位,测定该部位对植食性害虫朱砂叶螨(Tetranychus cinnabarinus)和二斑叶螨(Tetranychus urticae Koch)的杀虫活性。[结果]藏乌头的乙酸乙酯部位具有较强的杀螨活性,当提取物浓度达到250 ug/ml时,对朱砂叶螨和二斑叶螨的触杀活性分别达40%和30%以上,与市场使用的0.3%的苦参碱效果相当;以LC50进行比较,乌头乙酸乙酯提取物和对照药剂0.3%苦参碱对朱砂叶螨及二斑叶螨的LC50值的95%置信限均存在重叠,判断两者的毒力差异不显著。[结论]乌头乙酸乙酯提取物作为杀螨剂具有一定的应用价值。     

植物粗提物对朱砂叶螨触杀活性的研究

为了筛选出新型的植物源杀螨剂,采用玻片浸渍法测定10种植物30种粗提物对朱砂叶螨(Tetranychus cinnabarinus)成螨的触杀活性。当粗提物浓度为2 mg/mL时,蒲公英的氯仿粗提物和生栀子的甲醇粗提物,关黄柏、吴茱萸和甘草的石油醚粗提物,对朱砂叶螨均有较好的触杀活性,其中生栀子的甲醇粗提物致死率最高,为83.67%。经初步试验筛选,选取这5种触杀活性较高的中草药提取物做进一步的毒力测定,结果为关黄柏、吴茱萸的石油醚粗提物(24 h)的LC50值为分别为1.6332 mg/mL和1.6530 mg/mL;蒲公英的氯仿粗提物LC50值为(24 h)为1.6818 mg/mL;生栀子的甲醇粗提物(48 h)LC50值为1.4623 mg/mL;甘草石油醚粗提物(48 h)LC50值为1.5131 mg/mL。这5种中草药的提取物均具有比较好的杀螨活性。     

青蒿粗提物对朱砂叶螨生物活性的初步研究

用青蒿Artem isia annuaL.的石油醚、苯、乙醚、丙酮和水的平行提取物和顺序提取物对朱砂叶螨进行了系统的触杀活性研究。结果表明青蒿石油醚、苯、乙醚、丙酮和水提取物有一定的杀螨活性,其中10 g/L丙酮顺序粗提物活性最强,对朱砂叶螨48,72 h的校正死亡率分别为90.64%和100%,对该螨的致死中浓度为0.206 6 g/L。     

Joint Acaricidal Action of Diafenthiuron and Fenbutatin-oxide Against Tetranychus cinnabarinus(Boisduval)(Acari: Tetranychidae)

[Objective]This study was conducted to obtain a new high-efficiency acaricide mixture.[Method]The synergism acaricidal of diafenthiuron and fenbutatin-oxide against carmine spider mite was investigated,and the optimal ratio of both acaricides were determined by means of co-toxicity factors and co-toxicity coefficients(CTC).[Result]At 24 h post-treatment,the LC50values of diafenthiuron and fenbutatin-oxide against T.cinnabarinus female adults were 154.67 and 93.26 mg/L,respectively,and the synergistic mass ratios of diafenthiuron and fenbutatin-oxide ranged from 1:0.06 to 1:0.87,and the optimal diafenthiuron-to-fenbutatin-oxide ratio was 1:0.39 with the LC50and CTC of 67.87 mg/L and 188.93(CTC significantly above 100 strongly indicated synergism),respectively,and the toxicity relative to diafenthiuron and fenbutatin-oxide was 2.28 and 1.37 times,respectively.[Conclusion]The joint acaricidal action of diafenthiuron and fenbutatin-oxide strongly indicates synergism.These findings proved scientific theoretical basis for mixing diafenthiuron and fenbutatin-oxide to control spider mites and developing a new synergisic acaricide.     

黄花蒿提取物对朱砂叶螨生物活性的研究

 【目的】明确黄花蒿杀螨活性物质的最佳提取工艺;选择合适的溶剂和最佳的植株部位,明确黄花蒿杀螨活性物质的时间和空间分布状态,为综合开发利用黄花蒿提供科学依据。【方法】采集4、5、6、7和9月5个月份的黄花蒿植株,分成根、茎、叶3个部分,采用石油醚（30～60℃）、石油醚（60～90℃）、乙醇、丙酮和水溶剂的平行和顺序提取方法,共计获得135种提取物,用玻片毛细管法测定其对朱砂叶螨的杀螨活性。【结果】在杀螨活性方面,黄花蒿的杀螨活性随植株的生长呈增加的趋势,总体表现为7月份＞6月份＞5月份＞4月份,但9月份的杀螨活性与7月份相比有所下降。5个月份的黄花蒿叶丙酮平行提取物的活性都比其它提取物强,处理朱砂叶螨48 h的校正死亡率介于74%～100%之间。从对朱砂叶螨的致死时间动态上看,9月份、7月份、6月份、5月份、4月份黄花蒿叶的丙酮平行提取物对朱砂叶螨处理48 h,LC50分别为0.5986,0.4341,0.8376,0.9443和1.3817 mg•ml-1。对活性较高的7月份叶的丙酮提取物进行柱层析分离,得到13个组分,其中组份11和12的LC50分别为0.3683和0.1586 mg•ml-1,组分12的活性相对于七月份叶丙酮提取物而言提高了约5倍。【结论】黄花蒿7月份叶的丙酮提取物的毒力最好,5 mg•ml-1对朱砂叶螨处理48 h,校正死亡率为100%。7月份叶丙酮平行提取物柱层析组分11和12是活性组分,是进一步研究的重点。     

Acaricidal Activity of Boenninghausenia sessilicarpa Against Panonychus citri

Acaricidal activity of Boenninghausenia sessilicarpa against Panonychus cirri was tested in the laboratory. Four solvents were used to prepare crude extracts, petroleum ether, chloroform, ethyl acetate, and ethanol, among which ethanol was the most effective one. The results suggested that ethanol extracts of B. sessilicarpa had eminent acaricidal and ovicidal activities. Concentrated extracts were prepared using petroleum ether, chloroform, ethyl acetate, or distilled water as solvent. Mite mortality rates in the concentrated extracts by petroleum ether, chloroform, or distilled water were significantly lower than those by ethyl acetate. The LC50 values of eggs and female mites were 0.7639 and 1.1033 mg mL^-1, respectively. After liquid chromatography and thin layer chromatography, the concentrated extracts were separated into 14 groups of fractions and further tests for their acaricidal and ovicidal activities were conducted. Fraction 2 was found to possess higher acaricidal and ovicidal activities. The mortality of eggs and adult mites were 85.83 and 63.07%, respectively. Moreover, fraction 2 showed moderate oviposition inhibition effect （0.8795） against P. citri when the used dose was higher than 2.5 mg mL^-1