隐孢子虫病两种诊断方法的应用比较

目的对目前常用的两种检测隐孢子虫感染方法进行估价。方法取上海某牧场随机采集的20头奶牛粪便用改良抗酸染色法和巢式PCR(Nested PCR)法检测。结果两种方法均能检测出粪便中的隐孢子虫卵囊,改良抗酸染色法阳性检测率55%,Nested PCR法阳性检测率70%。结论:两种方法均能从感染隐孢子虫的奶牛粪便中捡出隐孢子虫卵囊,可根据需要选择。     

牛新孢子虫病PCR检测方法的建立和应用

犬新孢子虫感染是导致妊娠母牛流产的主要原因之一，准确快速地诊断是有目的治疗该病的前提。本研究根据已知的犬新孢子虫种属特异性基因片段Nc-5基因序列，设计了一对特异性引物，建立了检测犬新孢子虫的PCR技术。利用本方法可以从感染牛胎儿的脑脊液及实质脏器中扩增出1条大小为350bp的特异性核酸片段。在吉林省延边龙井地区的应用检测结果表明，流产牛胎儿中新孢子虫感染率为17％（15／90）。本方法在实际应用中快速、灵敏、特异性高，可以用于牛和其它动物新孢子虫病的快速诊断和流行病学调查。     

家蚕微孢子虫原位杂交诊断技术研究

根据家蚕微孢子虫rRNA基因高度保守的特点,设计合成了1对PCR引物,从家蚕微孢子虫基因组DNA上扩增出1个12kb片段,用同位素标记后作为检测家蚕微孢子虫的特异性探针。采用原位杂交的方法,对家蚕卵及感染家蚕微孢子虫4、6、10d的幼虫进行原位杂交检测。实验结果表明,该方法可以从家蚕单粒卵内检测到296粒孢子,对感染家蚕微孢子虫4、6、10d的幼虫均有阳性杂交信号出现。     

基于微小隐孢子虫重组CP15/60蛋白的间接ELISA检测方法的建立及上海市猪隐孢子虫感染情况调查

为建立敏感、特异的猪隐孢子虫感染血清学检测方法,了解上海市猪隐孢子虫感染情况,以纯化的重组CP15/60(r CP15/60)为诊断抗原,建立了检测隐孢子虫感染的间接ELISA方法,并对上海市猪隐孢子虫感染情况进行血清学调查。结果显示,与Nested PCR方法检测结果相比,本研究建立的r CP15/60-ELISA方法的阴阳性符合率为83.3%,敏感性为100%,特异性为80%;重复性试验的变异系数在12.5%之内;对341份猪田间血清进行检测,阳性为194份,占56.89%,表明该方法可用于实验室初步诊断和现场猪隐孢子虫病的流行病学调查。     

实时荧光定量PCR检测柞蚕微孢子虫的方法

提高柞蚕微孢子虫检测技术的准确性和灵敏度,对控制柞蚕微孢子虫的胚种传染至关重要。以柞蚕微孢子虫小亚单位核糖体RNA(SSU rRNA)基因为靶基因,建立柞蚕微孢子虫的实时荧光定量PCR检测方法。结果显示:该方法能够特异性检测柞蚕微孢子虫基因组DNA,而对柞蚕基因组DNA无扩增产物。依据标准曲线确定荧光定量PCR的Ct值≤35作为检测的敏感度区间,对柞蚕微孢子虫基因组DNA的最低检出限为0.004 6 ng。应用该方法对100粒柞蚕蛹样本进行检测,共检出54个样本呈柞蚕微孢子虫感染阳性,而采用普通显微镜镜检与采用常规PCR方法检测呈阳性的样本数量分别为2个和34个。应用该方法对生产中的柞蚕种茧和雌蛾进行抽样检测,柞蚕微孢子虫感染阳性检出率显著高于用普通显微镜镜检的阳性检出率(P0.05)。建立的柞蚕微孢子虫实时荧光定量PCR检测方法提高了检测的灵敏度。     

隐孢子虫检测方法研究进展

隐孢子虫是一种能引起人、畜和野生动物共同感染的原虫.由于隐孢子虫卵囊很小,在光镜下观察缺乏明显的特征,检测比较困难,为寻找高效的检测方法,国内外学者在隐孢子虫检测方面进行了大量的研究.文章综述了近年来用于检测隐孢子虫的主要方法,并初步分析了各种方法的 优、缺点.     

隐孢子虫病雏新城疫免疫后血清蛋白电泳值的变化

以隐孢子虫感染阴性的雏难７０只分３组供试。第１组感染隐孢子虫后进行新城疫免疫，第２组不感染隐孢子虫但进行新城疫免疫，第３组作正常对照，对全部参试难抽血分离血清，进行醋酸纤维薄膜电泳和蛋白质定量检测，统计同体液免疫关系较密切的ｒ球蛋白百分率及总球蛋白百分率。     

我国部分地区羊肠道隐孢子虫、毕氏肠微孢子虫和芽囊原虫的分子流行病学

为了解我国部分地区羊肠道隐孢子虫、毕氏肠微孢子虫和芽囊原虫的感染情况,采集自河南、贵州、陕西等6省区共935份羊粪便样品,基于隐孢子虫、芽囊原虫小亚基核糖体RNA基因(SSU r RNA),毕氏肠微孢子虫转录间隔序列(ITS),使用PCR方法扩增从粪便中提取DNA样本,检测隐孢子虫、毕氏肠微孢子虫和芽囊原虫的感染情况,...     

川西北牦牛新孢子虫感染血清流行病学调查

目的 了解川西北牦牛新孢子虫的感染情况.方法 采用间接ELISA方法对川西北阿坝州8个县1 070份待屠宰牦牛血清中新孢子虫抗体进行检测.结果 被检1 070份血清样品中65份血清新孢子虫抗体呈阳性,样品来源的8个县都检测到了新孢子虫抗体,被检牦牛的血清抗体平均阳性率为6.1％,其中理县(12.2％)的抗体阳性率显著高于平均水平(p＜0.01),马尔康的最低为2.7％.结论 川西北阿坝州各县广泛存在牦牛新孢子虫感染.     

甘肃、宁夏奶牛新孢子虫血清流行病学调查及风险因素分析

本研究旨在查明甘肃省与宁夏回族自治区奶牛新孢子虫的感染情况并分析影响其感染的风险因素。采用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法检测了甘肃省榆中县、宁夏青铜峡市和宁夏吴忠市3个地方总计1657份奶牛血清样品,并应用流行病学调查及统计学方法对影响奶牛新孢子虫感染的因素进行了分析。流行病学调查结果显示,奶牛新孢子虫抗体总阳性率为8.93%;应用Logistic回归分析评估奶牛新孢子虫感染的风险因素,结果显示奶牛所处地区是影响新孢子虫感染的风险因素(P0.05)。调查分析表明,甘肃和宁夏地区奶牛新孢子虫普遍流行。应当提高对调查地区奶牛新孢子虫感染的重视,采取适当的综合控制方法和有效的管理措施以防控奶牛新孢子虫病,以保证奶牛养殖业的经济效益。     

新疆和静县巴音布鲁克羊新孢子虫感染状况横断面研究

为估计新疆和静县巴音布鲁克羊新孢子虫流行率，了解其在羊群中的感染情况，通过横断面研究方法，采用两阶段抽样策略，在和静县下辖的12个乡镇中抽取67个养殖场点，采集1 340份血清样品，使用间接ELISA方法检测新孢子虫抗体；通过问卷调查，分析群间传播相关风险因素。抗体检测结果显示，和静县巴音布鲁克羊新孢子虫感染的群表观流行率为32.84%（95%CI：21.85%~45.40%），真实流行率为 36.05%（95%CI：24.93%~49.93%）；12个乡镇中，有8个检出阳性场群。对问卷调查结果，进行卡方检验和Logistic回归分析发现，“饲养方式为舍饲”“建厂时间在6年以上”和“圈舍没有消毒”等因素具有统计学意义（P＜0.05），为养殖场感染新孢子虫的主要风险因素。结果表明：新孢子虫在和静县巴音布鲁克羊群中流行普遍，流行范围较广；长时间舍内饲养、建厂时间久、卫生消毒管理差是导致新孢子虫流行的主要风险因素。因此，提高养殖场户饲养管理水平，定期对圈舍进行消毒并保证一定的空圈时间，可降低新孢子虫的感染风险。     

江苏部分集约化养殖场肉羊隐孢子虫分子流行病学调查及其虫种鉴定

研究旨在了解江苏部分集约化养殖场肉羊隐孢子虫的流行情况,采集江苏省8个集约化养殖场的446份肉羊粪便样品。根据隐孢子虫的基因序列,运用巢式PCR方法,检测肉羊粪便样品的隐孢子虫感染情况,再通过测序等方法鉴定其虫种类型。结果显示：被检样品中肉羊隐孢子虫的总感染率为4.48%(20/446),经鉴定有2种虫株,分别为泛在隐孢子虫和微小隐孢子虫。研究表明,养殖场内肉羊存在隐孢子虫的感染,可能诱发其他传染病和人畜共患病等问题。     

兔脑炎微孢子虫病的免疫学研究进展

兔脑炎微孢子虫病是由兔脑炎微孢子虫引起的一种隐性、慢性感染或临床经过的人畜共患的原虫病。近十余年来 ,出现大量有关兔脑炎微孢子虫引起艾滋病患者致死性临床感染的报道 ,此病日益引起医学界的广泛关注和重视。就兔脑炎微孢子虫病的免疫学检测方法、细胞免疫应答、感染兔脑炎微孢子虫后人及动物的免疫学比较的研究状况进行了综述。     

脑炎微孢子虫属3种微孢子虫的虫株未能感染食用动物

研究了脑炎微孢子虫属最常见的3种微孢子虫的虫株对于食用动物包括猪,牛,鸡,和火鸡的感染力.动物经口接种孢子后用2种方法来检测是否被感染,一种方法是在每日粪样中检测孢子,另一种方法是在动物接种21d后的器官组织学检查.尽管每种虫种的接种量高迭2×10~6至2×10~7个孢子,但是在每种动物都没有检测到感染.结果表明,本试验中所用的脑炎微孢子虫属的3种微孢子虫虫株缺乏对猪,牛,鸠和火鸡的感染力.     

北京地区家养犬隐孢子虫感染情况的调查

为探索适用于宠物临床检测隐孢子虫的方法,并了解北京地区宠物犬隐孢子虫感染情况,于2015年1月-2015年12月,在中国农业大学教学动物医院收集来自北京各个地区的家养犬粪便共104例,分别采用改良抗酸染色法、饱和蔗糖漂浮法以及套式PCR扩增隐孢子虫SSU rRNA基因进行隐孢子虫检测。结果显示,PCR方法适用于临床犬粪便中隐孢子虫的检测,而形态学方法仅能检测出纯化后卵囊。北京地区家养犬隐孢子虫感染率为3.85%(4/104),虫种均为犬隐孢子虫(C.canis)。对不同年龄段的犬隐孢子虫感染率进行统计分析后发现,不同年龄段的家养犬隐孢子虫感染率差异显著(P0.05),6月龄以下幼犬易感,不同性别、居住地区的家养犬隐孢子虫阳性率无显著差异(P0.05)。     

隐孢子虫卵囊形态学观察及动物交叉感染试验

作者观察了从湖南６种动物分离出的隐孢子虫卵囊的光镜下形态，并以鸡源、牛源和猪源隐孢子虫卵囊人工感染实验动物作交叉感染性研究。结果鉴定出隐孢子虫３个种，即贝氏隐孢子虫（Ｃ．ｂａｉｌｅｙｉ），寄生于鸡、鸭；微小隐孢子虫（Ｃ．Ｐａｒｖｕｍ），寄生于牛、山羊、猪、家兔和小鼠；鼠隐孢子虫（Ｃ．ｍｕｒｉｓ），寄生于牛。交叉感染结果表明，来自鸡的隐孢子虫可以感染雏鸡和雏鸭，而不能感染小鼠和家兔；来自牛的隐孢子虫可以感染小鼠和家兔而不能感染雏鸡，来自猪的隐孢子虫可以感染小鼠而对雏鸡无感染性。作者认为，哺乳类和鸟类的隐孢子虫可能在宿主纲的水平上具有宿主持异性。     

水源中隐孢子虫种类和基因型鉴定技术研究进展

目前，隐孢子虫有效种有20个。隐孢子虫的分子流行病学研究表明，隐孢子虫具有宿主特异性。目前，感染人的隐孢子虫种和基因型有C．horninis、C.parvum、C．meleagridis、C.felis、C.canis、C.nuris、C．suis genotype和C．cervine genotype等。水源性隐孢子虫暴发，具有重要的公共卫生意义。分子鉴定技术已广泛应用于检测水中隐孢子虫，水中检测到的隐孢子虫有9个。通过分析其分子组成特性表明，成年牛可能是水污染的主要根源，除了居民用水和农业污染外，鹿、麝鼠、田鼠、鸟和其它野生动物可能也与水污染有关。隐孢子虫分子基因型鉴定工具可能为水源保护性研究提供一个更有力的溯源追踪工具。     

新孢子虫IFAT方法的建立及吉林省部分地区羊新孢子虫病的血清学调查

本实验建立了羊新孢子虫间接荧光抗体试验方法 (IFAT),并采用该方法检测了310份来自吉林省部分地区的成年羊血清。结果检出羊新孢子虫抗体阳性血清30份,阳性率为9.68%。结果表明吉林省某些地区存在羊新孢子虫的感染。     

隐孢子虫病研究进展

隐孢子虫病是一种全球性的人兽共患寄生虫病，有着重要的公共卫生意义。虽然其病原隐孢子虫发现较早，但直到1976年才有人隐孢子虫感染的报道。由于免疫缺陷患者特别易感，并常可导致感染机体死亡，因而随着艾滋病导致机体免疫缺陷的发现，对隐孢子虫感染研究起了推动作用。现已证明，隐孢子虫感染广泛存在，是人类和幼畜腹泻的重要病原。     

应用PCR技术快速鉴定熊蜂微孢子虫Nosema bombi

基于熊蜂微孢子虫16SrRNA基因序列设计了1对引物,并对引物退火温度和引物浓度等反应条件进行了优化。对所建立方法的敏感性、特异性和稳定性进行了验证后,使用该方法对40份样品进行检测。结果显示,本研究建立了一种能够特异、敏感鉴定熊蜂微孢子虫的PCR方法,对熊蜂微孢子虫总DNA的敏感性达到2.86×10-5 mg/L,可以将熊蜂微孢子虫从西方蜜蜂微孢子虫和东方蜜蜂微孢子等其他可以感染熊蜂的寄生虫中区分出来,具有良好的特异性和稳定性。通过对40份熊蜂样品进行检测结果表明,整个检测过程可以在4h内完成并具有良好的适用性。本研究建立的熊蜂微孢子虫检测方法可用于进境熊蜂的检验检疫。