鸡p15INK4B蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

用制备并纯化的鸡p15^INK4B蛋白免疫BALB／c小鼠,制备了p15^INK4B蛋白的单克隆抗体,并进行了鉴定。结果表明：2株分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株105和3F5分别属于IgG1和IgM抗体亚类;培养上清的效价分别为1：820和1：680,腹水的效价分别为1：4×10^6和1：7×10^5;2株单克隆抗体亲和力常数分别为3．13×10^9L/mol（1C6）和1．24×10^8L／mol（3F5）,相对亲和力1C6〉3F5,且具有不同的抗原识别位点;Westem-blot鉴定表明,1C6和3F5这2株单克隆抗体均能与原核表达纯化的和杆状病毒表达的p15^INK4B蛋白结合,而不与其他蛋白结合,说明本研究成功制备了鸡p15^INK4B的单克隆抗体,可作为深入研究鸡p15^INK4B蛋白的功能提供特异的抗体材料。     

几种糖业有机物料对蔗田土壤微生物数量的影响

采用尼龙网袋法研究了几种糖业有机物料（蔗叶、蔗根、宿根蔗头、糖厂滤泥和酒精废液）对蔗田土壤微生物数量的影响,探讨不同有机物料对蔗田土壤微生物的作用效应。结果表明：8次采样蔗叶、蔗根、宿根蔗头、糖厂滤泥、酒精废液、对照（不加物料）处理的细菌数量平均值分别为5．75×10^6、8．01×10^6、11．99×10^6、59．55×10^6、14．3×10^6、1．09×10^6个／g干土,放线茵数量平均值分别为0．436×10^6、1．138×10^6、1．096×10^6、6．349×10^6、3．433×10^6、0．185×10^6个／g干土,真菌数量平均值分别为0．433×10^6、2．312×10^6、2．015×10^6、1．973×10^6、0．487×10^6、0．069×10^6个／g干土。说明糖业有机物料能增加土壤微生物数量,与蔗叶、蔗根、宿根蔗头相比,施用糖厂有机废料（滤泥或酒精废液）能使土壤细菌及放线菌数量明显增多,而对真菌的影响则以蔗根和宿根蔗头更有效。     

地衣芽孢杆菌和荚膜红假单胞菌对异育银鲫鱼种非特异性免疫机能的影响

本试验主要研究芽孢杆菌和光合细菌对异育银鲫鱼种血液白细胞数量、白细胞吞噬活性及血清溶菌酶活性的影响。600尾异育银鲫鱼种,随机分成9个试验组,一个对照组,每组设一平行。试验组在水中添加不同浓度（5×10^8、5×10^9、5×10^10 CFU／m^3）的芽孢杆菌和光合细菌及两种菌1：1的混合制剂,饲养49d后,测定异育银鲫血液白细胞数目、白细胞的吞噬活性、血清溶菌酶活性等各项免疫指标。试验结果表明：光合细菌、芽孢杆菌及其1：1的混合制剂均能提高异育银鲫鱼种血液中白细胞的免疫机能,其中混合制剂作用效果最佳,其次芽孢杆菌,效果最差的是光合细菌,且在5×10^8、5×10^9、5×10^10 CFU／m^3。浓度范围内,微生态制剂的作用效果随着添加量的增加而增加。     

地衣芽孢杆菌和荚膜红假单胞菌对异育银鲫鱼种非特异性免疫机能的影响

本试验主要研究芽孢杆菌和光合细菌对异育银鲫鱼种血液白细胞数量、白细胞吞噬活性及血清溶菌酶活性的影响。600尾异育银鲫鱼种,随机分成9个试验组,一个对照组,每组设一平行。试验组在水中添加不同浓度（5×10^8、5×10^9、5×10^10 CFU／m^3）的芽孢杆菌和光合细菌及两种菌1：1的混合制剂,饲养49d后,测定异育银鲫血液白细胞数目、白细胞的吞噬活性、血清溶菌酶活性等各项免疫指标。试验结果表明：光合细菌、芽孢杆菌及其1：1的混合制剂均能提高异育银鲫鱼种血液中白细胞的免疫机能,其中混合制剂作用效果最佳,其次芽孢杆菌,效果最差的是光合细菌,且在5×10^8、5×10^9、5×10^10 CFU／m^3。浓度范围内,微生态制剂的作用效果随着添加量的增加而增加。     

Ghrelin对大鼠胃蛋白酶和H+-K+-ATP酶活性的体外作用

从断奶大鼠中获得新鲜的胃粘膜,分离培养胃粘膜上皮细胞,培养30 h后,试验组换为分别含有1×10^-4、1×10^-3、1×10^-2和1×10^-1μmol/L生长素（Ghrelin）的新鲜培养液,对照组换为不含Ghrelin的正常新鲜培养液。继续培养4 h,收集培养液和细胞,分别测定培养液中胃蛋白酶活性和细胞中H^＋-K^＋-ATPase活性。试验结果表明：1×10^-3μmol/L的Ghrelin可显著提高胃蛋白酶的活性（P〈0.05）,1×10^-4、1×10^-3和1×10^-2μmol/L的Ghrelin显著提高胃黏膜上皮细胞中H^＋-K^＋-ATPase的活性（P〈0.05）。表明Ghrelin体外作用于胃粘膜上皮细胞可刺激胃蛋白酶和胃酸的分泌。     

转人抑癌基因p53鸡的研究

【目的】探索MAR调控序列对外源人抑癌基因p53在转基因鸡体内整合稳定性的影响,为转基因禽类输卵管生物反应器的建立奠定基础。【方法】利用脂质体包埋法,将pEGFP-N1-p53/MAR重组真核表达载体转染人肝癌细胞(Hep3B),荧光显微镜和透射电镜检测转染含人野生型p53基因的Hep3B细胞形态及超微观结构的变化情况;显微注射法将脂质体介导的重组载体注入鸡X期胚盘的明区和暗区,制备G0代转基因鸡。以EGFP为报告基因,人工授精法制备G1代转基因鸡,对G0代和G1代鸡体外源基因p53进行PCR检测,并对G1代转基因鸡进行小动物活体成像检测。【结果】转染含人p53基因重组载体的Hep3B细胞明显皱缩变圆;微观结构层面,粗面内质网不明显,线粒体肿胀,细胞核中异染色质边集明显,并出现凋亡小体。G0代转基因鸡暗区组孵化率(45%)显著高于明区组孵化率(0)(P0.05),但均显著低于对照组孵化率(82.5%)(P0.05);获得4只基因组中含有外源p53基因的G0代转基因鸡,外源基因转染率为22.2%(4/18);获得2只G1代转基因鸡,转基因世代遗传率为3.08%(2/65)。【结论】重组真核表达载体pEGFP-N1-p53/MAR可以促进人肝癌细胞Hep3B的凋亡;脂质体介导的含MAR序列调控元件的pEGFP-N1-p53/MAR质粒,可以提高p53在转基因鸡基因组中的整合稳定性,并可遗传给后代。     

大黄鱼溶藻弧菌外膜蛋白ISCOMs的免疫效果初步研究

以溶藻弧菌外膜蛋白为模式抗原,制备其ISCOMs,免疫大黄鱼,进行安全和免疫力试验测定,结果显示溶藻弧菌外膜蛋白ISCOMs安全、纯净;免疫组菌体凝集效价比对照组高,但免疫组个体间有差异,而免疫组的血清ELISA抗体水平明显高于对照组;攻毒试验组（O．3×10^7个·尾^-1）存活率可达100％,对照组（0．3×10^7个·尾^-1）存活率为20％;试验表明溶藻弧菌外膜蛋白ISCOMs安全,免疫大黄鱼后可产生免疫保护力。     

动物源性人兽共患细菌病防控生物新制剂的研究Ⅰ．分泌抗大肠杆菌O157：H7单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

将E．coli O157：H7（EHEC—O157：H7）用甲醛灭活、超声破碎,免疫BALB／c小鼠,制备免疫脾细胞;与SP2／0骨髓瘤细胞融合后,获得7株分泌抗E．coli O157：H7单克隆抗体（mAbs）的杂交瘤细胞株,分别命名为F5、B8、E7、G9、G11、F1和C3,Ig亚类分别是IgG2ak、IgG2aK、IgG1K、IgMK、IgMh、IgMK和IgG2aK。用间接ELISA检测,E7和F1细胞培养上清液的效价为1．6×10^3,腹水效价均为1×10^11;C3、F5、B8、G9和G11细胞培养上清液的效价为1×10～2×10^2,腹水效价均为1×10^3。相加ELISA结果显示,F1、G9和G113株mAbs对应相同的抗原表位,而其它4株对应不同的抗原表位。用间接ELISA分析特异性,7株mAbs与某些其他血清型的大肠杆菌有交叉反应。Westernblotting表明,c3、E7和F13株mAbs在蛋白分子量28×10^3处有特异性条带,而其它4株mAbs则未显示蛋白带。     

山羊精子介导转染外源DNA的研究

目的：建立山羊精子介导转染外源DNA的方法,并探索精液离心与否与添加异种精清对转染效率的影响.方法：将采集的山羊精液经过离心处理与标记的线形化pEGFP-N1质粒共育转染,分别用免疫组化的方法检测转染效率、PCR和Southern blotting检测转染外源DNA在精子的结合部位和结合率;同时将实验分为3组,分别为鲜精直接转染、离心后转染和离心山羊精液添加猪精清转染,用免疫组化方法检测转染外源DNA效率.结果：精子核后帽区是结合转染外源DNA的主要部位;3种处理的阳性转染率分别为（26.19±3.25）%、（62.04±7.87）%和（17.04±9.34）%;DNaseⅠ消化后的阳性转染率分别为（11.50±5.05）%、（34.00±5.87）%和（10.00±4.24）%.离心组与未离心组和添加猪精清组差异极显著（p〈0.01）.结论：山羊精子具有自发性结合外源DNA的能力;羊精清和异种精清明显降低精子结合外源基因的效率.     

表达MDVgB基因重组痘苗病毒的构建及保护性研究

以脂质体转染技术构建了表达鸡马立克氏病毒(MDV)gB基因的重组痘苗病毒(RVV-gB), 表明该病毒在CV-1(猴肾细胞)细胞系内能稳定传代,经腹腔1×106 PFU·羽 -1 将重组病毒、HVT冻干苗及痘苗病毒分别按试验程序,免疫1日龄SPF鸡,并于15日龄以3×10 2PFU·羽-1MDV强毒株GA株攻毒,重组病毒和HVT冻干苗匀获得较高的保护, 结果证明了gB是MDV的宿主保护性抗原.此研究为CTL应答检测奠定了基础.