鸭肝炎病毒在鸭胚成纤维细胞上的适应性研究

将鸭肝炎病毒(DHV)E53鸡胚致弱株适应鸭胚成纤维细胞(DEF),连续传代至第16代时出现细胞病变(CPE),第21代时CPE呈现规律性,接毒后72 h CPE达80％,其病变特征是细胞间隙增宽、细胞崩解死亡、脱落.经病毒细胞培养物滴度测定、RT-PCR检测和间接免疫荧光法鉴定,证明DHVE53株能够在DEF上增殖.     

鸡胚成纤维细胞培养鸭瘟病毒的试验

将鸭瘟病毒强毒（DPV34）经12日龄鸭胚连续传2代，收获的尿囊液DPV34F2作为细胞培养的病毒接种于鸡胚成纤维细胞，连续传代5次。结果，从第2代开始，接种DPV的鸡胚成纤维细胞出现细胞病变，随首代次的增加，细胞病变愈加明显。经电镜观察，第5代细胞培养物中有典型的DPV病毒粒子；将第5代培养物接种鸭胚，出现典型鸭瘟病变；用PCR方法检测培养物，也出现DPV的特征DNA带。     

鸭病毒性肠炎病毒CH强毒株适应在鸭胚成纤维细胞上生长的研究

对分离自鸭体的鸭病毒性肠炎病毒CH强毒株(DEV-CHv)进行了适应在鸭胚成纤维细胞(DEF)上生长的研究。结果表明,DEV-CHv病死鸭肝脏悬液以绒毛尿囊腔途径经10日龄鸭胚连续传代2次,取尿囊液接种细胞的方法可获得适应DEF生长的DEV-CHv,而肝组织内病毒直接接种在DEF上则不生长。DEV-CHv刚适应DEF时以细胞变圆、折光度增强为病变特征,而适应DEF后以细胞脱落和形成圆形蚀斑为特征。适应DEF的DEV-CHv通常30h左右使细胞脱落,36h左右在细胞单层上形成蚀斑,48h时细胞病变可达80%以上。     

鸡源REV对HBK-SPF雏鸭的感染试验

为研究鸡源网状内皮组织增殖病病毒(REV)对HBK无特定病原体(SPF)鸭的致病性,利用鸡源REV现地分离株REV-HN,分别接种鸭胚成纤维细胞(DEF)、鸭胚(尿囊腔和卵黄囊腔接种)和雏鸭(口腔接种),试验设空白对照组,雏鸭还设有同居感染组.接种REV后不同时间收获DEF和胚体,及雏鸭的外周血淋巴细胞(PBL)和免疫器官,提取基因组DNA,通过RT-PCR和PCR方法检测REV前病毒env基因.结果在DEF中未检测到特异性的env基因片段,而在卵黄囊接种后72 h鸭胚胚体和试验感染的雏鸭PBL中检测到.接种后30 d,在1羽感染REV的雏鸭肾、胸腺和法氏囊中检测到REV前病毒.本研究为利用SPF鸭研究REV提供了依据.     

抗鸭坦布苏病毒感染的中草药筛选及其作用效果的初步研究

为筛选抗鸭坦布苏病毒(DTMUV)的中草药并探究其抗病毒作用效果，本研究通过检测12种中草药对DTMUV感染鸭胚成纤维细胞细胞(DEF)形态学与病毒抑制率的影响，以及对DTMUV病毒滴度与病毒载量的影响，筛选在DEF中抗DTMUV效果较明显的中草药；采用鸭胚接种法测定筛选出的3种药物(板蓝根、醋五味子、酒黄芩)对DTMUV感染鸭胚死亡率的影响；并选择效果最好的酒黄芩验证其对DTMUV感染雏鸭死亡率、临床症状、体重及组织(心脏、脾脏)中病毒载量的影响。结果显示：鱼腥草、淫羊藿、金银花、板蓝根、绵马贯众、黄芪、酒黄芩、茵陈、甘草、连翘、醋五味子、白芍水提物在最佳作用浓度时均能减轻DTMUV感染DEF的CPE，并对DTMUV具有不同的抑制率，其中酒黄芩效果最佳；淫羊藿、白芍、板蓝根、黄芪、酒黄芩、茵陈、甘草、醋五味子、连翘能显著降低DEF中DTMUV的病毒滴度(P<0.05)；板蓝根、醋五味子、酒黄芩能显著降低DEF中DTMUV的病毒载量(P<0.05)；板蓝根、酒黄芩能起到治疗效果，且显著降低鸭胚死亡率(P<0.05)，而酒黄芩、醋五味子还能预防病毒感染，且显著降低鸭胚死...     

3种消毒剂对鸭肝炎病毒的杀灭效果试验

以 1 0日龄鸭胚为试验载体 ,检验 3种消毒剂对鸭肝炎病毒 (DHV Ⅰ )野毒株的杀灭效果。将一定剂量的DHV Ⅰ感染鸭胚尿囊液分别与四烷铵络合碘、二氯异氰脲酸钠、百毒杀(双链季铵盐类消毒剂 ) 3种消毒剂的不同浓度混合作用后 ,接种鸭胚继续孵化 ;计算鸭胚死亡比例 ,测定各种消毒剂对DHV Ⅰ的杀灭效力。结果显示 :0 .0 4%的二氯异氰脲酸钠能有效灭活DHV Ⅰ ,显著降低试验鸭胚的死亡率 ;显示了较好的消毒效果 ,是可推广的消毒药     

鸭病毒性肠炎病毒致鸭胚成纤维细胞发生凋亡作用的研究

研究通过HE染色镜检发现,鸭病毒性肠炎病毒CH强毒株(DEV-CHv)可致鸭胚成纤维细胞(DEF)出现染色质颗粒化、细胞核变形等显著凋亡特征;TUNEL试验显示,接毒组细胞核内有多量棕黄色DAB显色颗粒,表明细胞出现了凋亡现象;DNA Ladder检测表明,接毒组细胞具有分子量分别为180～200bp及其整数倍的凋亡梯带电泳图谱特征;电镜观察发现,接毒组细胞具有染色质浓缩、边移,胞浆严重空泡化,细胞核严重变形,形成凋亡小体等典型凋亡特征.上述研究结果表明鸭病毒性肠炎病毒具有显著的致鸭胚成纤维细胞发生凋亡的作用.     

鸭病毒性肠炎病毒CH强毒株在鸭胚成纤维细胞中形态发生学的研究

采用超薄切片和透射电子显微镜技术对鸭病毒性肠炎病毒CH强毒株（DEV-CHv）在鸭胚成纤维细胞（DEF）中的形态发生学进行了研究。结果表明，DEV-CHv吸附到DEF细胞上以后通过囊膜和细胞膜间发生融合的方式侵入宿主细胞；病毒在细胞核内完成病毒核酸的生成、核酸与衣壳的装配；病毒核衣壳通过核膜-内质网膜系统从细胞核转运到内质网池中并在内质网池中得到皮层结构；获得了皮层的DEV-CHv核衣壳通过出芽方式释放到细胞空泡内得到囊膜结构后成为成熟病毒；细胞空泡内的成熟DEV-CHv可通过细胞的胞吐作用被释放到细胞外，或在空泡破裂时被释放到细胞外。     

复方中药禽康散对接种新城疫病毒鸡胚的保护效应

为了研究复方中药禽康散提取液对鸡新城疫病毒活性的影响,试验采用鸡胚法以不同浓度中药提取液与新城疫F48E9毒株悬液混合后各接种8枚鸡胚,观察各组鸡胚的存活情况。结果表明：中药浓度为1．0g/mL、0．5g／mL、0．25g／mL时活胚率分别是87．5％、75．0％、50．0％,而不加中药组鸡胚96h后全部死亡。说明复方中药禽康散具有抗新城疫F48E9毒株的作用,且随着中药浓度的增加抗病毒作用增强,呈现一定的量效关系。     

鸭坦布苏病毒HN1株囊膜E蛋白抑制肽的筛选及鉴定

鸭坦布苏病毒(DTMUV)是一个新发现的病毒,主要引起鸭产蛋严重下降为特征,为鉴定与DTMUV囊膜E蛋白特异性结合的多肽,本试验利用噬菌体展示技术以DTMUV HN1株E蛋白为靶标,进行随机12肽库3轮筛选,结合ELISA试验和竞争抑制试验,成功筛选了2个能够与DTMUV HN1株E蛋白特异性结合的多肽。测序结果显示,其氨基酸序列分别为:HWSTRQGSTRWN(P3-12)和THRSWQGNSWYM(P8-12)。进一步分析多肽P3-12和P8-12对DTMUV在鸭胚成纤维细胞增殖方面的影响,结果显示,E蛋白抑制肽P3-12和P8-12本身对鸭胚成纤维细胞的增殖无明显影响,不同质量浓度的的抑制肽P3-12和P8-12(0.02、0.2、2、20mg/L)均能显著降低DTMUV在鸭胚成纤维细胞中的病毒滴度和病毒拷贝数,以上结果表明,抑制肽P3-12和P8-12均能抑制DTMUV在鸭胚成纤维细胞的增殖,本试验为进一步探明DTMUV与宿主的相互作用及抗病毒制剂的开发提供了理论依据。     

"双黄"在鸭胚中抗鸭瘟病毒的效力试验

用双黄杀毒退烧颗粒剂(简称“双黄”)对8组鸭胚予以不同剂量的抗鸭瘟病毒效力试验,结果表明其在鸭胚中能抑制鸭瘟病毒增殖。     

鸭肿头出血症病毒在鸭胚原代成纤维细胞中增殖特性的研究

将鸭肿头出血症病毒（DSHDV）强毒株经尿囊腔接种10日龄鸭胚，传3代，取第3代尿囊液接种鸭胚成纤维细胞（DEF），传代培养至有细胞病变出现，并对接毒细胞进行TCID50动态检测和透射电镜观察。结果显示，第1代接毒细胞培养至120h出现变圆、脱落，并形成少量蚀斑，第2代培养至96～120h，DEF形成大量圆形或椭圆形的典型蚀斑，第3代培养至72～96h，DEF出现典型蚀斑；此后可稳定适应于DEF，典型细胞病变出现于72～96h。DSHDV在DEF上的TCID50值随传代次数的增加而增高，由第1代的10^2.72增加到第10代的10^6.82，最高毒价出现于96h，该点是收获病毒的最佳时间。经透射电镜观察，可见DSHDV粒子呈球形或椭圆形，大小为60～75nm，无囊膜，具有双层衣壳。结果证实，DSHDV强毒株已经适应了DEF，传代后可获得较高的病毒效价。     

鸭胚与小鼠的破骨细胞特性比较

本文分别采集鸭胚与小鼠的破骨细胞(osteoclast,OC),通过检测TRAP阳性细胞数及骨吸收陷窝面积,比较鸭胚与小鼠的OC形态、数目及活性。结果表明,鸭胚OC形状不规则、体积较大、核多且主要分布于胞质,而小鼠OC形状较规则、体积小、核多且大多分布于细胞边缘;随机选取视野中,鸭胚与小鼠OC数差异不显著;而鸭胚OC骨吸收陷窝面积显著大于小鼠OC骨吸收陷窝面积(P0.05)。表明鸭胚与小鼠OC均具有OC的普遍特征,但两者在骨吸收活性方面存在差异。     

雏鹅新型病毒性肠炎病毒对鸭胚成纤维细胞的适应性及增殖特性

为了获得适宜雏鹅新型病毒性肠炎病毒（NGVEV）体外培养的细胞系，开展了NGVEV强毒株在鸭胚成纤维细胞（DEF）适应性和增殖特性的研究。结果表明，NGVEV强毒株经尿囊腔接种10日龄鸭胚传4代，取尿囊液接种DEF，第1代无明显细胞病变；第2代培养至72～96hDEF出现颗粒状缺失、脱落，但无典型蚀斑出现；第3代培养至96～120h，DEF形成大小不等、圆形或椭圆形的典型蚀斑；第5代以后的NGVEV可稳定适应于DEF，典型细胞病变出现于48～72h。取适应DEF的NGVEV感染DEF细胞后制作超薄切片经电镜观察，可见典型的腺病毒粒子，大小为70～90nm。NGVEV在DEF上的TCID5。值随着传代次数增加而增高，由第1代的10^1.23增加到第8代的10^8.02，最高毒价出现于96～144h，96～120h是收获病毒的最佳时间。     

鸭肠炎病毒gL蛋白在鸡胚成纤维细胞中动态表达的检测

为研究鸭肠炎病毒(DEV)gL蛋白在感染鸡胚成纤维细胞(CEF)过程中的表达情况,本研究以DEVClone-03基因组为模板,应用PCR方法分别扩增得到截短的(gLt,181 bp～711 bp)和全长的gL(1 bp～711 bp)两个基因片段。将gLt基因片段克隆至pET-30a原核表达载体,转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达并对表达产物进行纯化复性,免疫BALB/c小鼠,制备鼠抗gL蛋白多克隆抗体。同时将全长gL基因克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),构建真核表达重组质粒pcDNA-gL,转染293T细胞。采用获得的抗gL蛋白抗体检测DEV感染CEF后及真核表达质粒pcDNA-gL转染293T细胞后gL蛋白在不同时间点的表达情况。结果表明,在pcDNA-gL转染293T细胞后12 h应用western blot方法能够检测到gL蛋白的表达,其表达量随着转染时间增加而增加;在病毒感染CEF后24 h应用间接免疫荧光方法能够检测到gL蛋白少量的表达,western blot方法在病毒感染CEF48 h后检测到gL蛋白的表达,其表达量随着病毒感染时间增加而增加。上述结果提示,编码gL蛋白基因可能是病毒复制的晚期表达基因。     

1株番鸭源新型鸭呼肠孤病毒(QY株)生物学鉴定

从广东清远地区临床病变为发病鸭软脚,肝、脾肿大,有点/块状出血、坏死,其他各脏器不同程度出血的病死雏番鸭肝、脾组织中分离到1株病毒.通过形态观察、核酸图谱鉴定、RT-PCR扩增、基因序列分析、动物回归试验结果表明,该病毒为一株不同于以往番鸭呼肠孤病毒的新型鸭呼肠孤病毒,并命名为DRV-QY株.     

鸭源副黏病毒的致病性试验

利用鸭源副黏病毒(DPMV)SDFC株分别人工感染21日龄健康非免疫樱桃谷肉鸭和SPF雏鸡,观察试验鸡、鸭的发病情况及临床症状,于感染后不同时间剖杀,观察各组织器官的病理变化,并进行病理组织学研究。结果显示,鸭感染DPMV后发病率为100%,死亡率为43.3%;而鸡感染后的发病率、死亡率均为100%。病理组织学研究结果显示,鸭感染DPMV后,以心脏、肺脏、肝脏、肾脏、脾脏、法氏囊广泛性出血、变性为特征,消化道病变较轻微;而鸡感染DPMV后,各组织器官广泛性出血,脾脏、胸腺、法氏囊、肝脏、胰腺、肾脏、心肌组织细胞出现不同程度的变性、坏死;食管、腺胃和各段肠管广泛性出血,并伴有黏膜脱落。结果表明,DPMV对鸡、鸭均有较强的致病性,而与鸡相比,对鸭的致病性较弱。     

鸭肿头出血症病毒强毒的致病性及感染组织细胞的超微病理变化

将鸭肿头出血症病毒（DSHDV）强毒株以不同途径接种10日龄鸭胚，研究了病毒在鸭胚中的繁殖规律，并用透射电镜观察了感染鸭胚各组织器官的超微结构变化，同时用DSHDV人工感染不同日龄雏鸭，比较了不同感染途径对雏鸭的致病性和对不同日龄雏鸭的致病性。结果显示，尿囊腔和卵黄囊2种途径均能使病毒在鸭胚上繁殖并传代，对鸭胚的半数致死量分别为10^-7.24／0．2mL和10^-6.4／0．2mL。病毒感染鸭胚后，电镜下可观察到肝和尿囊膜中的病毒粒子，病毒粒子呈球形或椭圆形，大小为60～80nm，无囊膜；病毒在细胞浆内复制，可形成特征性包涵体；病毒侵害的主要靶器官为尿囊膜与肝，细胞器的变化主要表现为粗面内质网扩张以及线粒体肿胀和嵴断裂、消失。病毒经肌肉注射、口服和滴鼻均能使28日龄鸭感染发病，致死率分别为86％、89％和97％。研究表明，DSHDV能很好地在鸭胚上生长并致鸭胚各组织器官超微结构发生变化，不同感染途径均能使雏鸭感染发病且致病性强。     

Minocycline prevents primary duck neurons from duck Tembusu virus-induced death

Duck Tembusu virus (DTMUV), a neurotropic flavivirus, is a causative agent of severe neurological diseases in different birds. No approved vaccines or antiviral therapeutic treatments are available to date. The poultry industry experiences significant economic losses due to DTMUV infections. Minocycline is a second-generation semi-synthetic tetracycline analogue that is commonly used as an antimicrobial treatment. Experimental studies have indicated the successful protective effects of minocycline against neuronal cell death from neurodegenerative diseases and viral encephalitis. The aim of this study was to investigate the effects of minocycline on DTMUV infection in neurons. Primary duck neurons were treated with minocycline, which exhibited neuroprotective effects via anti-apoptotic function rather than through viral replication inhibition. Minocycline might serve as a potential effective drug in DTMUV infection.     

不同鸭种间部分免疫性状的比较分析

随机抽取健康的金定鸭、樱桃谷鸭、苏牧麻鸭（樱桃谷鸭♂×金定鸭♀）、番鸭、半番鸭（番鸭♂×金定鸭♀，金番鸭；番鸭♂×樱桃谷鸭♀；樱番鸭；番鸭♂×苏牧麻鸭♀，苏番鸭）各60只，应用全自动生化分析仪（日立7170A型）及试剂盒对10周龄鸭的白蛋白，球蛋白，总蛋白，IgA，IgM，IgG和AI抗体HI效价进行测定。结果表明：所有指标大致表现为家鸭高于番鸭，番鸭高于半番鸭，金定鸭白蛋白显著高于其他鸭群体（P〈0．05），金定鸭和樱桃谷鸭的球蛋白显著高于其他鸭群体（P〈0．05），金定鸭总蛋白显著高于其他鸭群体（P〈0．05），而与樱桃谷鸭差异不显著（P〉0．05），樱番鸭3项指标均表现最低；对血清Ig水平而言，樱桃谷鸭IgA显著高于其他鸭群体（P〈0．05），樱桃谷鸭IgM显著高于其他鸭群体（P〈0．05），而与金定鸭差异不显著（P〉0．05），金定鸭IgG显著高于其他鸭群体（P〈0．05），而樱桃谷鸭与苏牧麻鸭差异不显著（P〉0．05），金番鸭均表现最低；AI抗体HI效价金定鸭表现最高，苏番鸭和金番鸭表现最低。相关性分析表明，AI抗体HI效价与白蛋白、球蛋白、总蛋白和IgG存在显著或极显著相关，而与kA、IgM相关不显著。研究结果为鸭免疫指标正常参考值的建立、家禽的疾病预防以及抗病育种研究提供了理论依据。