马链球菌马亚种-MDMC0316株的分离鉴定与遗传进化分析

从内蒙古锡林浩特市某马场中疑似患有马腺疫的马匹下颌部淋巴结中采集脓汁样本,通过实验室常规检测和分子生物学方法进行细菌分离鉴定和遗传进化分析。采用绵羊血琼脂平板划线法分离和纯化培养可疑细菌,并进行革兰染色和镜检;绘制分离菌生长曲线,并对该分离菌进行常规生化试验;对16S rRNA基因使用标准PCR方法扩增和测序并应用Mega 7.0生物软件绘制出该分离菌的系统发育进化树并确定其种属地位;对纯化的分离菌进行药物敏感性试验,拟筛选出辅助治疗效果最佳的抗生素类药物。结果显示,分离菌在绵羊血琼脂平板上呈现典型的β溶血环,染色特点为革兰阳性链球菌,从生长曲线上可以看出分离菌16 h后达到平台期;在生化试验中,分离菌对蔗糖、葡萄糖、麦芽糖、甘露糖利用呈现阳性,而对乳糖、甘露醇、蕈糖、七叶苷、山梨醇等呈现阴性,对精氨酸脱羧酶分解试验呈阳性,而对硝酸盐(还原)试验、胆汁溶菌试验、马尿酸盐分解试验、VP试验呈现阴性,提示分离菌与典型马链球菌马亚种生化试验标准结果吻合;根据16S rRNA基因BLAST比对分析发现,分离菌与NCBI中已注册的马链球菌马亚种序列同源性为100%,遗传进化树上可以看出分离菌与新...     

禽波氏杆菌病病原性的研究

从患眼炎,鼻窦炎的不同地点,不同时间,不同发病鸡群的病料共分离到１７株细菌,经形态学,培养特性,生化试验和动物回归试验等结果表明,该细菌能运动,无芽孢的革兰阴性小杆菌,即禽波氏杆菌,该菌在鲜血平板上产生β溶血,在麦康凯平板上生长良好,形成光滑中央突起的珍珠状菌落,不利用糖类,不能在６．５％ＮａＣｌ培养基中生长,尿素酶和硝酸盐还原试验均呈阳性,能凝集豚鼠和其他动物红血球,人工接种细胞均能使雏鸡发生相     

一起绵羊链球菌病的诊断报告

2006年5月,新疆和静县某牧场饲养细毛杂交绵羊6000只,发病500余只,每天死亡10余只,持续一周多,发病率10%,死亡率30%。病羊颌下淋巴结肿大,有咳嗽,怀孕母羊流产。从患病绵羊尸体内分离出一株链球菌,显微镜检查,在固体培养基生长成双或短链:在液体培养基生长成长链,生化试验、动物致病性试验确定为绵羊链球菌病。     

一株猪链球菌的分离鉴定

从河北某猪场送检的一份病猪病料中分离出1株链球菌,革兰氏染色表现为G+球菌,该菌在普通琼脂绵羊血平板上形成圆形、乳白色、表面光滑整齐、具有溶血环的小菌落,通过对该菌进行细菌16SRNA、PCR扩增,测序结果表明分离菌是一链球菌,对该分离菌株的毒力因子检测中发现,其荚膜多糖CPS2J+、gdh+、sly+、epf+、mrp+均为阳性、该菌一定剂量对小白鼠有致死性,对阿莫西林、青霉素、复方新诺明比较敏感,对四环素耐药。该结果对今后该猪场猪链球菌病的临床防治具有一定的指导意义。     

牦牛源副乳房链球菌的分离鉴定及部分生物学特性分析

从青海省某养殖场牦牛肺脏中分离出3株细菌,通过生化试验、16S rDNA序列分析、小鼠致病性试验和药敏试验检测。结果发现,这3株细菌为革兰氏阳性链球菌,与副乳房链球菌(Spu)同源性为99%;分离株在TSA琼脂培养基上呈光滑圆形,半透明的菌落,在血琼脂上呈α溶血;其中Spu-1分离株对小鼠具致病性;药敏试验显示,分离菌株均对链霉素耐药,对红霉素、阿奇霉素、万古霉素和麦迪霉素敏感。研究结果为了解牦牛副乳房链球菌的流行情况提供了新资料。     

致病性马兽疫链球菌的分离鉴定、生物学特性及其M-like基因的序列分析

为鉴定锦州某猪场引起关节炎病疫情的病原,本研究将患猪关节液在血平板培养基上培养进行细菌分离;对分离细菌进行形态学观察、生化反应、致病性试验及药物敏感性试验;并对其M-like基因进行克隆和测序分析.结果在显微镜下观察到周围具有透明的β溶血环的革兰氏阳性中长链球菌,经生化反应及M-like基因鉴定为马兽疫链球菌(命名为10JZ12);分离株10JZ12对小鼠的致死剂量为1.75× 108 cfu;并对苯唑西林、青霉素G、红霉素、克拉霉素、克林霉素、米诺环素、环丙沙星、左氟沙星、多粘菌素B、呋喃妥因敏感,对氯霉素、四环素、诺氟沙星、复方新诺明不敏感.     

1株羊链球菌的分离鉴定及药敏试验

从青海省大通县城关镇某羊场病死羊肺脏、脾脏、肝脏等病料中分离得到1株细菌,经对分离菌的形态、培养特性和菌株革兰氏染色观察以及生化试验鉴定,结合发病羊临床症状、病理剖检变化,判定该分离菌为链球菌。通过K-B药敏纸片法进行病原菌耐药性检测,结果表明该病原菌对头孢噻吩、头孢他定、阿奇霉素以及磺胺间甲氧嘧啶高度敏感,对其他药物表现出不同程度的耐药性。     

禽波氏杆菌病病原性的研究

从患眼炎、鼻窦炎的不同地点、不同时间、不同发病鸡群的病料共分离到１７株细菌，经形态学、培养特性、生化试验和动物回归试验等结果表明，该细菌能运动、无芽孢的革兰氏阴性小杆菌，即禽波氏杆菌。该菌在鲜血平板上产生β溶血，在麦康凯平板上生长良好，形成光滑中央突起的珍珠状菌落。不利用糖类，不能在６．５％ＮａＣｌ培养基中生长，尿素酶和硝酸盐还原试验均呈阳性，能凝集豚鼠和其他动物红血球。人工接种细菌均能使雏鸡发生相似于自然病例的临床症状和死亡，并且从病变部位回收到相应细菌。     

一株产角蛋白酶的铜绿假单胞菌的分离鉴定

本研究从鸡场长期堆放羽毛的土壤中筛选到一株降解羽毛能力强的菌株。该菌株在牛奶平板上培养24 h后产生透明降解圈,形状不规则,表面粗糙,边缘模糊,产生绿色荧光色素;革兰氏染色阴性,短杆状,无芽孢,有鞭毛,无荚膜。生化试验显示,该分离株能够水解牛奶、明胶,具有角蛋白酶活性,能利用柠檬酸盐,硝酸还原反应阳性。系统进化树分析显示,分离株与铜绿假单胞菌模式菌株（GenBank登录号：BAMA01000316）亲缘关系最近,综合以上结果,最终确定分离株为铜绿假单胞菌,并正式命名为Pesudomonas aeruginosa B1-2。将该分离株在以1%羽毛为唯一碳氮源的基础培养基中发酵培养,48 h后角蛋白酶活性最高达到60.3 U/mL,对羽毛降解率为85.7%。本研究中分离获得的Pesudomonas aeruginosa B1-2可用于畜禽废弃物的处理。     

屠宰生猪副猪嗜血杆菌的分离鉴定及药物敏感性分析

为调查屠宰生猪副猪嗜血杆菌（Hps）的隐性感染情况,本研究从陕西省某规模化生猪屠宰场采集80份病变肺脏,应用PCR方法进行Hps核酸检测,无菌取阳性肺脏,通过平板划线分离获得疑似Hps,进一步对分离菌进行形态观察、培养特性分析、卫星现象观察、生化试验和分离菌核酸片段序列分析,纯化获得Hps分离菌;用药敏纸片法分析Hps分离菌株对常用药物的敏感性。结果显示,从80份病变肺脏中检出39份Hps阳性,阳性率48.75%（39/80）;从39份Hps阳性肺脏中分离获得3株疑似Hps,分离菌在显微镜下呈革兰氏阴性、短杆状;在添加有胎牛血清和NAD的TSA平板上生长良好;在金黄色葡萄球菌周围呈现出典型的"卫星现象"生长;能发酵葡萄糖、蔗糖、果糖、半乳糖、麦芽糖和阿拉伯糖,不发酵甘露醇;PCR扩增序列与Hps同源性在98%以上。药物敏感性试验结果显示,3株分离菌对环丙沙星、恩诺沙星和氟苯尼考等抗菌药物高度敏感,对青霉素、林可霉素和甲氧苄啶等抗菌药物耐药。本研究获得的Hps分离株为疫苗研制提供了基础材料,为生猪养殖场选择敏感药物防控Hps感染提供了参考依据。     

广东省1株猪2型链球菌的分离鉴定及部分生物学特性研究

为确诊引起广东省某规模化猪场保育仔猪发生死亡的病因,本试验采集病猪肝脏、脾脏、心脏、脑、关节液和淋巴结等病料进行细菌分离,并对分离菌株进行纯化培养、菌落形态观察、革兰氏染色、形态学观察、生化试验,用血清型特异性引物进行PCR扩增,并进行毒力基因检测、药敏试验、生长曲线测定及动物试验。结果显示,分离菌株在成牛血清琼脂平板上呈圆形、灰白色、表面光滑、边缘整齐的菌落,镜检为革兰氏阳性球菌,呈链状排列。该菌株的生化试验结果符合链球菌的特征,PCR扩增结果显示猪链球菌保守基因片段（gdh和gapdh）和猪2型链球菌特异的cps2J基因片段均为阳性,表明该分离菌株为猪2型链球菌。毒力基因检测结果表明,该菌株毒力因子基因型为gdh⁺/gapdh⁺/epf⁺/mrp⁺/sly⁺/orf2⁺/fbps⁺。分离菌株用营养肉汤培养6 h达到对数生长期,培养10 h的菌液D_{600 nm}值为0.310。药敏试验结果表明,该菌株对青霉素、阿莫西林、阿莫西林-克拉维酸钾等药物敏感,但对强力霉素耐药。动物试验结果表明,感染分离株的BALB/c小鼠未出现死亡且无明显临床症状,毒力较低。本研究为该猪场链球菌病的防控提供了重要参考信息。     

巴马香猪源马兽疫链球菌分离及分子生物学鉴定

为了对山东某巴马香猪场送检的35日龄病死猪病因进行确诊,试验对送检病料进行了细菌分离培养、形态学观察、生化试验、药敏试验、致病性试验及PCR鉴定。结果表明:分离菌为马兽疫链球菌,该菌株具有多重耐药性,对昆明系小鼠及断奶仔猪均有一定致病性。说明该分离菌为发病猪发病病原,可作为防治该病自家灭活菌苗的候选菌株。     

通辽地区奶牛乳房炎无乳链球菌的分离与鉴定

为研究通辽地区奶牛乳房炎优势性病原菌,试验对30份奶牛临床型乳房炎奶样进行细菌分离,经血液琼脂平板分离培养、生化试验及药敏试验共分离到14个菌株,最终鉴定为无乳链球菌。药敏试验结果表明,分离菌株对临床上常用的链霉素及磺胺类药物均已产生不同程度的耐药性,而对卡那霉素、庆大霉素及麦迪霉素表现出较好的敏感性。     

育肥猪真杆菌的分离与鉴定

本试验系对自安徽某猪场发病育肥猪脓肿脾脏中分离的一株细菌,通过形态特征、培养特性、生化反应检查,致病性和药物敏感性试验,以及16SrR NA基因的扩增和序列分析进行鉴定。结果显示,分离菌为革兰氏阳性短杆状菌,在兔血琼脂平板和牛血清胰蛋白胨大豆琼脂平板有氧条件下生长良好,可致小鼠死亡,对头孢类抗生素和喹诺酮类抗菌药敏感,16SrRNA基因序列与猪真杆菌属细菌的同源性最高,在91.2%~99.4%之间,遗传进化关系密切,与猪真杆菌属细菌属于同一分类群。结果表明,分离菌为猪真杆菌。     

豚鼠源马链球菌兽疫亚种的分离鉴定

为了查明河北省唐山市某豚鼠养殖场发病豚鼠感染的病原菌,本试验采集发病豚鼠的眼角脓性分泌物,采用细菌分离纯化、革兰染色、生化鉴定、16S rRNA基因PCR扩增方法对分离菌进行鉴定,通过K-B试纸法检测分离菌株对24种抗菌药的敏感性,试管二倍稀释法测定19种中药对该分离菌株的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),并通过动物回归试验检测该分离菌株的致病性。结果显示,分离菌株在血琼脂培养基培养24 h生长为针尖状透明菌落、呈β溶血,革兰染色为阳性圆球状、3～5个连接呈短链状,生化特性与马链球菌兽疫亚种相符,将其命名为MLQJ-1;16S rRNA序列比对结果显示,MLQJ-1与马链球菌兽疫亚种同源性高达99.72%,在系统进化树中处于同一分支,鉴定为马链球菌兽疫亚种;MLQJ-1对24种抗菌药的敏感性不同,对青霉素、头孢曲松和阿莫西林等8种抗菌药敏感,对阿米卡星、新霉素和卡那霉素等10种抗菌药耐药;苦地丁、苦参、黄芩和千里光对MLQJ-1的MIC值介于1.9～15.6 mg/mL,MBC值介于1.9～31.2 mg/mL;小鼠腹腔接种MLQJ-1菌液后24 h内全部死亡。结果表明,...     

江西省多个猪场副猪嗜血杆菌的分离鉴定及药敏试验

笔者于2008年11月至2009年2月,从江西省多个猪场的以多发性纤维素性浆膜炎为特征的病猪采集肺脏、关节液、脑组织等病料,接种于TSA平板及巧克力平板,分离到4株革兰氏阴性细小杆菌,兼性厌氧,经生化试验及PCR检测确定均为副猪嗜血杆菌。其中一代表菌株的药敏试验结果表明,其对环丙沙星等药物高度敏感,对新生霉素等药物中度敏感,对庆大霉素等药物不敏感。     

山羊败血性链球菌的分离鉴定与药敏实验

通过临诊观察、病理剖检和细菌分离鉴定,确诊1例急性山羊败血性链球菌病。从患病羊心血分离的致病菌为革兰氏阳性菌,镜下呈单个球状或链状排列,在鲜血琼脂平板上呈β溶血,对头孢哌酮、头孢呋辛、米诺环素、环丙沙星、左氧氟沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、呋喃妥因等抗菌药物高度敏感,可用于山羊链球菌病的治疗。     

羊溶血性曼氏杆菌的分离鉴定及药敏试验

对陕西省关中某奶山羊养殖场呼吸道症状引发死亡的羔羊进行病原检测.无菌采集死亡羔羊肺脏组织接种50 mL/L绵羊血琼脂平板,分别置于恒温培养箱与厌氧培养箱中36℃±1℃培养24 h,厌氧培养平板无菌生长,恒温培养血平板上可见大量溶血的灰白色、半透明的圆形菌落,挑取单菌落纯化培养后对分离株进行染色镜检、生化鉴定、16S r...     

广东省1株猪16型链球菌的分离鉴定及药敏试验

为了确定引起广东省江门市某规模化猪场仔猪死亡的原因,试验采集病猪心脏、脾脏、肺脏、关节液、脑、淋巴结等组织进行病毒检测和细菌分离鉴定,并对分离菌进行纯化培养、革兰氏染色、生化鉴定、菌种鉴定及测序分析、血清型鉴定、毒力基因检测、动物试验及药敏试验。结果表明:分离株在鲜血营养琼脂上生长良好,呈α溶血,镜检可见革兰氏阳性球菌,呈典型链状排列;生化特性与猪链球菌相符;PCR扩增得到大小为1 500 bp和688 bp的目的条带,分离株与猪链球菌同源性大于99%,在系统进化树上与猪链球菌处于同一分支,为16型猪链球菌;该分离菌毒力因子基因型为fbps⁺/orf⁺/sly⁺/gapdh⁺/epf^-/mrp^-,可致NIH小鼠死亡,毒力较强;分离菌对阿莫西林/克拉维酸、青霉素、头孢噻肟、头孢拉定、头孢曲松、庆大霉素、大观霉素、恩诺沙星和氟苯尼考9种药物敏感,对新霉素、复方磺胺甲口恶唑、强力霉素和替米考星4种药物耐药。选用阿莫西林进行群体治疗,取得了很好的效果。说明该猪场仔...     

牦牛源链球菌的分离鉴定及耐药性分析

【目的】了解西藏拉萨地区牦牛链球菌的感染情况、致病性及其耐药性,为牦牛源链球菌的研究提供新的数据。【方法】对55份牦牛鼻拭子进行细菌分离培养、菌落形态观察、革兰氏染色镜检、生化鉴定、16S rRNA序列PCR扩增以鉴定分离菌的种属特性。通过人工感染试验小鼠评价分离菌的致病性,采用药敏纸片扩散法检测分离菌的耐药性。【结果】分离菌在血平板上长出灰白色、表面光滑的α溶血圆形菌落,革兰氏染色镜检呈链状排列的阳性球菌。分离菌可发酵葡萄糖、乳糖、海藻糖和山梨醇,不发酵麦芽糖和甘油,硝酸盐还原试验、靛基质试验、V-P试验和MR试验均呈阴性。经16S rRNA基因序列比对分析,确定有25株链球菌(Tibet-1～Tibet-25),检出率为45.46%(25/55),其中17株多动物链球菌,8株马链球菌。分离菌16S rRNA基因序列与NCBI上已发布的链球菌相似性在97.04%～99.77%之间,其中Tibet-1、Tibet-2、Tibet-3、Tibet-5、Tibet-9、Tibet-10、Tibet-11、Tibet-14、Tibet-15、Tibet-16、Tibet-17共11株牦牛源多...