不同激素配比对橡胶树叶片愈伤组织诱导的影响

为拓宽橡胶树外植体来源,促进其组织培养技术的发展,本试验以橡胶树无菌苗叶片为外植体材料,采用不同激素及其配比,诱导其叶片愈伤组织的产生。当6-BA浓度一定时,随着NAA浓度的提高,叶片愈伤组织率有逐步提高的趋势,达到1.5 mg/L时,愈伤诱导率最高,而当6-BA浓度>1.5 mg/L时,愈伤诱导率呈现下降的趋势;通过KT与NAA的不同浓度配比组合发现：大多数培养基的愈伤诱导率都低于10%,其中有些还为0;NAA浓度相同时,6-BA的愈伤组织诱导能力明显好于KT。橡胶树叶片愈伤组织的诱导必须依赖于植物激素,在不含激素或单独使用某种激素的培养基中均不能诱导愈伤组织的形成,叶片愈伤组织诱导率最佳培养基为改良MS培养基+1.5 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA,其诱导率达到26.7%。     

冬小麦成熟胚高频愈伤组织形成和分化的适宜条件研究

以4个冬小麦品种的成熟胚为外植体,研究了温度预处理、愈伤组织诱导培养基中2,4-D浓度和分化培养基激素种类及其配比对小麦成熟胚愈伤组织形成和分化的影响。结果表明,与室温25℃相比,低温4℃预处理能明显改善愈伤组织的形成率。适宜愈伤组织形成的诱导培养基中2,4-D浓度以4 mg/L为宜,分化培养基中含有1 mg/LKT 2 mg/L 6-BA较仅含有1 mg/L KT或2 mg/L 6-BA能明显促进愈伤组织的分化。相同培养条件下,不同品种间的愈伤组织形成和再生能力存在较大差异。因此,进行低温种子预处理、愈伤组织诱导过程中采用适宜的2,4-D浓度,以及分化过程中采用适宜的激素组合是冬小麦高频愈伤组织形成和分化的重要条件。     

刺五加愈伤组织诱导的研究

研究了不同培养基、激素和外植体对刺五加愈伤组织诱导的影响,结果表明：在旺盛生长期获取的叶片可以在附加植物激素的BZ培养基上以较高频率诱导出愈伤组织,诱导率为41.58%。刺五加组织培养的适宜外植体为叶片和当年生根,适宜基本培养基为BZ(改良培养基),且适合刺五加愈伤组织诱导和继代培养的激素组合为ZT0.2+NAA2.0+GA31.5。     

石栗树茎段组织培养的研究

建立石栗组织培养的技术体系,筛选出适合诱导愈伤组织和愈伤组织分化的培养基。从外植体消毒,激素配比,培养基筛选等方面对石栗组织培养进行了探索。结果表明诱导愈伤组织的主要因素是细胞分裂素和生长素的比值。TDZ对愈伤组织诱导丛生芽有抑制作用。诱导愈伤组织的最适培养基为：1/2MS+ZT 2 mg/L+NAA 0.5 mg/L+氯化胆碱2 mg/L,诱导愈伤组织丛生芽的最适培养基为1/2MS+6-BA 1 mg/L +IBA 0.1 mg/L。影响诱导愈伤组织的主要因素是细胞分裂素和生长素的比值。     

杏叶片离体繁殖研究

杏叶片培养可以产生不定芽，ZT与2，4－D配合能诱导出愈伤组织，其培养基为MS＋ZT4．0mg/L 2,4-D 3.0mg／L，但只有在KT与NAA配合使用时才能从叶愈伤组织中分化出少量不定芽，30g/L山梨醇对叶片愈伤组织分化不定芽的作用比同浓度的蔗糖强，愈伤组织第11次继代培养中，在NAA浓度一定（5．0mg/L)的情况下，随着KT浓度的增加，新愈伤组织产生率逐步增加，且愈伤组织幼嫩，茂密，第13次继代培养时，只有MS＋NAA6．0mg/L KT2.0mg/L 山梨醇30g/L及MS＋NAA5．0mg/L KT4.0mg/L＋蔗糖30g/L的培养基可以产生不定芽，产生率分别为6．67％和13．33％，叶片正铺与反铺对愈伤组织的诱导率均达100％，不仅正铺所产生的愈伤组织比反铺的重量大，而且只有正铺才能诱导出不定芽。     

马铃薯晋薯16号愈伤组织再生体系的建立

为建立马铃薯品种晋薯16号组织再生体系,以晋薯16号无菌苗为材料,对外植体类型、外植体表面消毒试剂浓度和根的诱导条件进行筛选,同时优化了愈伤组织诱导和分化的最佳植物激素组合及浓度。结果表明:愈伤组织诱导的最佳外植体为茎段;2%的次氯酸钠消毒效果较好;根的诱导使用含50g/L蔗糖的MS培养基较好;愈伤组织诱导培养基以MS+6-BA 1.5mg/L+NAA 0.5mg/L为佳;愈伤组织分化培养基以MS+6-BA 1.5mg/L+GA3 2.0mg/L+ZT 1.0mg/L为佳。     

紫花苜蓿愈伤组织诱导和分化研究

以紫花苜蓿SANDITI无菌苗下胚轴、茎、叶3种不同外植体,在附加不同激素浓度的MS培养基上诱导愈伤组织。结果表明,SANDIT最佳外植体为下胚轴,最佳下胚轴愈伤组织诱导培养基为MS+2,4-D 2.0 mg/L+6-BA 0.5mg/L。15 d继代1次,或适当降低2,4-D浓度,提高6-BA或KT浓度,可以降低愈伤组织褐化率。愈伤组织在6-BA0.5 mg/L,NAA 0.1 mg/L,GA31.0 mg/L,YE 250 mg/L,CH 250 mg/L的MS培养基上,可获得较高的分化率。     

初步研究不同激素对海岛棉体细胞胚胎发生的影响响

本论文对海岛棉体细胞胚胎发生和植株再生体系进行了研究,结果如下：对多种激素及其配比对愈伤组织的诱导效应进行研究,2,4-D和KT组合诱导的愈伤组织状态较好,质地疏松,为淡黄色,但后期持续使用不易分化。NAA和KT组合诱导的愈伤组织质地较硬,多为绿色及黄绿色,后期容易疯长。IBA和KT组合诱导的愈伤组织质地也较硬,后期易死亡。2,4-D和KT的相对比值可能比两者的绝对浓度更为重要,海岛棉可能比陆地棉所需要的相对比值要高出两倍。     

影响红掌愈伤组织诱导、增殖和芽分化的因素

以Pink champion等盆栽植株和试管苗为材料，研究了影响红掌愈伤组织诱导、增殖和芽分化的因素。结果表明，不同品种的愈伤组织诱导率和外植体褐变率均存在显著差异，诱导率和褐变率之间呈显著的负相关关系。外植体、外源激素和培养基对愈伤组织的诱导有显著影响，不同品种和外植体的适宜诱导培养基不同。光照对愈伤组织的诱导有显著的抑制作用；高浓度生长素、低浓度细胞分裂素，促进愈伤组织的增殖，高浓度细胞分裂素及低浓度生长素促进愈伤组织芽分化；固体培养比液体培养更有利于愈伤组织的增殖和芽分化。     

激素和低温预处理对胡麻花药愈伤组织诱导的影响

本文以胡麻杂交组合IS×95005的F_1为材料,研究了激素和低温预处理对花药愈伤组织诱导的影 响.研究结果表明,不同培养基不仅对花药愈伤组织的诱导率有影响,而且对愈伤组织的颜色、生长速率和质地也有较大的影响.KT+2,4-D激素组合对花药愈伤组织的诱导效果优于KT+NAA.接种前花蕾4℃低温预处理能显著提高化药愈伤诱导率.在相同培养基中,低温预处理大数对愈伤诱导率起主要作用.综合考虑愈伤组织的质量和诱导率,胡麻组合1S×95005的F_1代花药愈伤诱导率存低温预处理5 d,附加KT 1.0 mg/L+2,4-D2.0 mg/L的MS固体培养基上诱导效果最好.     

NAA或潮霉素对小麦成熟胚愈伤组织分化的影响

以5个栽培小麦品种诱导而来的成熟胚愈伤组织为外植体,研究了在分化培养基中加入NAA对小麦成熟胚愈伤组织分化的效果以及潮霉素浓度对不同阶段成熟胚愈伤组织分化的影响。研究结果表明,在对照的分化培养基中(含5mg/L激动素)加入0.1mg/L萘乙酸(NAA,1-naphthlcetic acid)形成的分化培养基,可显著提高4个供试小麦基因型的成熟胚愈伤组织的分化率,提高幅度达到12%～32%。不同的潮霉素浓度在"花培1号"愈伤组织的诱导阶段进行抗性筛选的结果表明,即使是在潮霉素浓度达到250mg/L时,仍有24%左右的愈伤组织存活率,这些存活的愈伤组织仍可能分化形成绿点甚至分化成苗,说明在"花培1号"愈伤组织的诱导阶段进行潮霉素抗性筛选是不适合的。5个不同小麦品种分化阶段进行潮霉素筛选具有明显的效果,但不同品种之间存在一定差异,其中:宁麦13的适宜潮霉素浓度为20mg/L,花培1号和扬麦158的适宜潮霉素浓度约为30mg/L,宁麦9和宁麦16的适宜潮霉素浓度在30～40mg/L左右。因此,我们认为,在分化阶段进行潮霉素抗性筛选是理想的筛选时期,在分化培养基中添加20～40mg/L浓度的潮霉素即可完全抑制小麦成熟胚愈伤组织的分化。本研究结果将有助于改进和完善普通小麦成熟胚遗传转化体系。     

加工番茄离体再生体系的建立

以加工番茄‘亚心98-1’和‘里格尔87-5’2个品种的子叶作为外植体,研究不同激素组合对其出愈和诱芽的影响。结果表明,激素的种类和浓度对加工番茄外植体出愈率的影响没有差异,但是诱导形成的愈伤组织形态和不定芽存在差异,ZT与IAA组合对不定芽的诱导效果高于6-BA与IAA组合,不定芽诱导率最高的培养基为MS+ZT 0.5 mg/L+IAA 0.2 mg/L。品种之间存在差异,‘亚心98-1’比‘里格尔87-5’更易产生较高比率的正常芽。再生芽在1/2MS + 0.1 mg/L IAA生根培养基上能正常生根,并发育成完整的小植株。     

“济麦”系列品种成熟胚再生体系的优化研究

建立成熟的外植体再生体系,搭建有效的转化平台是实现小麦基因工程改良的重要途径。与未成熟胚相比,利用小麦成熟胚作为外植体不仅取材方便,而且不受环境和季节的限制。因此,建立小麦成熟胚再生体系是小麦组织培养发展的重要趋势。本研究利用"济麦"系列5个品种济南17、济麦19、济麦20、济麦21和济麦22,以适于组培的小麦品种Bobwhite作对照,研究了不同浓度2,4-D、玉米素(ZT)和激动素(KT)对小麦成熟胚的愈伤诱导和分化成苗的影响。结果表明,与对照品种Bobwhite相比,"济麦"系列品种具有更高的成熟胚出愈率,品种间差异显著,呈现出基因型效应。在相同2,4-D诱愈浓度条件下,不同品种间分化和成苗率差异极显著。"济麦"系列品种的成苗率均低于对照品种Bobwhite(13.55%),说明进一步优化愈伤的再生成苗能力是未来建立再生体系的关键。相同品种条件下,2,4-D诱愈浓度对出愈、分化和成苗率影响显著,当2,4-D诱愈浓度4mg/L时,除济麦20以外,其它五个品种均能分化成苗,其中济麦22成苗率约10.33%,接近Bobwhite水平。本研究为建立和完善"济麦"系列品种的成熟胚再生和遗传转化体系奠定了基础。     

马铃薯未授粉子房离体培养诱导双单体植株初探

以MS培养基为基本培养基,添加不同种类和浓度的生长调节剂,离体培养8个马铃薯普通栽培种（2n=4x=48）品种的未授粉子房,获得了青薯168和青薯7号的双单体小植株。花蕾4℃下预处理24~72 h的愈伤组织诱导率（51.24%~57.08%）比未预处理（9.35%）的明显提高。对青薯168和青薯7号而言,最佳培养基分别为MS+2-4-D 2.0 mg/L+ZT 0.1 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂7 g/L和1/2MS+GA3 0.5 mg/L+2-4-D 0.5 mg/L+KT 2.0 mg/L+BAP 2.0 mg/L+ ZT 0.2 mg/L+蔗糖20 g/L+琼脂7 g/L。品种对愈伤组织分化形成小植株的影响比培养基的影响要大。     

不同二倍体和四倍体小麦成熟胚再生体系研究

为了研究不同基因型和培养条件对小麦成熟胚愈伤组织诱导和分化的影响,以硬粒小麦、墨西里卡、野生一粒麦Tu和野生一粒麦Tb为实验材料,对其成熟胚在不同激素配比下愈伤组织的诱导和植株分化进行研究。结果表明,不同基因型小麦成熟胚愈伤组织诱导、分化及再生均存在很大差异。其中硬粒小麦的成熟胚培养效果最佳,其愈伤组织在不同2,4-D浓度（1.0~4.0 mg/L）下诱导率均在93%以上。不同激素配比对成熟胚愈伤组织绿点率、再生率均有显著影响。硬粒小麦、墨西里卡、野生一粒麦Tb在激素配比为KT 1.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L的分化培养基中培养效果最好,其绿点率分别为85.22%,61.67%,8.50%,成苗率分别为40.40%,32.06%,1.72%;而野生一粒麦Tu的最适分化培养基激素配比为KT 1.0 mg/L +NAA 1.0 mg/L,其绿点率和再生率分别为18.64%和8.47%。研究表明,基因型是影响二倍体和四倍体小麦成熟胚培养的主要因素,愈伤组织的诱导和植株的再生是相互独立的。     

不同品系橡胶树花药愈伤诱导和体胚发生研究

为建立橡胶树不同品系的体胚发生和植株再生体系,为不同品系橡胶树良种生产奠定基础。以橡胶树优良品系‘热研106’、‘热试59’、‘热试62’的花药为材料,采用正交设计,对不同品系、不同植物生长调节剂配比培养基的花药愈伤和体胚诱导效果进行了研究。[结果]结果表明：3个品系的愈伤诱导率和体胚诱导效率差异明显,同一品系不同培养基的愈伤诱导率和体胚诱导效率差异明显;愈伤诱导培养基中的植物生长调节剂对下一阶段的体胚诱导有明显影响。根据本研究,‘热研106’的花药愈伤诱导最佳浓度组合为2,4-D 1 mg/L+NAA 2 mg/L+KT 1 mg/L,‘热试59’的花药愈伤组织诱导最佳浓度组合为2,4-D 0.5mg/L+NAA 1 mg/L+KT 1 mg/L,‘热试62’的花药愈伤组织诱导最佳浓度组合为2,4-D 1 mg/L+NAA 1 mg/L+KT 1 mg/L。‘热试62’的体胚发生最佳浓度组合为KT 3 mg/L+NAA 0.05 mg/L+GA3 0.05 mg/L+6-BA 0.5 mg/L。[结论]本研究获得了不同品系的愈伤诱导和体胚发生最佳培养基组合,为多品系橡胶树花药植株再生体系的建立奠定了基础。     

柱花草子叶组织培养多因素组合数学模型的研究

采用正交试验研究了影响柱花草子叶组织培养的可控因子, 并建立了柱花草子叶培养对可控因子反应的数学模型。结果表明, 可控因子与柱花草愈伤组织诱导率、芽分化系数和生根率之间存在真实的回归关系, 最佳回归模型分别为Y = 86.90+3.34X1+1.36X3+2.86X1X3、Y = 7.70 +1.52X2和Y = 299.30+6.39X1+4.32X1X2。从模型的解析可看出, 对愈伤组织诱导率影响最大的是NAA, 其次是NAA与蔗糖之间的互作, 最后是蔗糖; 对芽分化有影响的是KT; 对生根率影响最大的是NAA, 其次是NAA/IAA的比值。     

月季茎段组织培养的研究

以MS为基本培养基，附加不同浓度的细胞分裂素(BA)和生长素(NAA)，对月季茎段组培快繁进行了研究。结果表明：初代培养阶段，以较低浓度的细胞分裂素和生长素配比对侧芽萌发具有较好的促进作用，适宜的培养基为MS BA1.2mg/L NAA0．3mg/L。继代增殖阶段，以培养基MS BA1.5mg/L NAA0.05mg/L效果较好。生根阶段，最适宜的培养基为1／2MS IBA0．5mg/L。