花生胚小叶对卡那霉素的敏感性研究

卡那霉素是植物遗传转化中常用的一种筛选剂。研究花生胚小叶对卡那霉素的敏感性,对建立利用卡那霉素筛选花生遗传转化的有效体系具有重要意义。以3个不同基因型花生弗落蔓生、麻油1-1和濮花23号为试验材料,通过计算胚小叶黄化率、丛生芽诱导率和生根数等,并观察外植体的生长状态,研究不同浓度卡那霉素对胚小叶生长发育、丛生芽分化和丛生芽生根阶段的影响,以期确定3个品种胚小叶各个分化阶段的适宜筛选浓度。结果表明,不同基因型花生对卡那霉素的敏感性不同,弗落蔓生、麻油1-1和濮花23号胚小叶丛生芽分化筛选浓度依次为:150mg/L、100mg/L和50mg/L;丛生芽生根筛选浓度分别为:弗落蔓生20mg/L、麻油1-1 20mg/L和濮花23号10mg/L。本研究筛选到不同品种胚小叶丛生芽分化和丛生芽生根阶段的适宜卡那霉素浓度,为以花生胚小叶为外植体的花生遗传转化阳性植株的筛选奠定了基础。     

基因型和AgNO3对甘蓝型油菜子叶外植体植株再生的影响

以甘蓝型油菜无菌苗子叶为外植体,接种于不同配比激素组合的培养基,研究AgNO3及基因型对油菜子叶外植体再生频率的影响.通过对芽苗分化率的方差分析表明,基因型、AgNO3及基因型与AgNO3互作对植株再生的影响均达到极显著水平,其影响程度为基因型＞AgNO3＞基因型×AgNO3.诱导芽苗分化的最佳培养基为MS+4mg/L BA+0.3mg/L NAA+5～10mg/L AgNO3.     

培养条件对紫苏下胚轴外植体再生的影响

以紫苏下胚轴为材料,研究影响紫苏外植体芽再生的影响因素。结果表明：苗龄、黑暗时间、激素浓度及配比对紫苏芽再生均有较大影响。取13d苗龄的下胚轴先在分化培养基（MS+3.0mg/L BA+0.3 mg/L NAA）黑暗预培养8d后转为14h/d光照条件培养可获得较高的再生频率。诱导芽苗生根最佳培养基为1/2MS +1.0mg/L BA+0.3 mg/L IAA。     

玉米幼胚培养及植株再生的研究

以不同玉米自交系幼胚为外植体,研究不同2,4-D浓度对愈伤组织诱导、6-BA浓度对愈伤组织分化和6-BA与NAA配合使用对试管苗生根的影响。结果表明:不同2,4-D浓度对愈伤组织诱导率影响差异不明显,但对胚性率诱导有明显影响,其诱导最佳培养基为MS+2,4-D 2 mg/L+水解酪蛋白500 mg/L+脯氨酸500 mg/L;愈伤组织分化的最佳培养基是MS+6-BA0.5 mg/L+水解酪蛋白500 mg/L+谷氨酰胺200 mg/L+PP₃₃₃ 2 mg/L;试管苗生根的最佳培养基是1/2 MS+6-BA0.5 mg/L+NAA2.0 mg/L+PP₃₃₃ 2.0 mg/L+活性炭0.2%。     

花生组织培养及高频率植株再生

以14个花生品种为材料,对花生组织培养及植株再生进行了研究。将花生成熟胚幼叶、子叶和下胚轴外植体接种到添加0～2 mg/L NAA 和0～10 mg/L BAP的MSB5（MS无机盐 + B5有机）培养基上诱导愈伤,再转到添加0～10 mg/L BAP的分化培养基上诱导不定芽。结果表明,诱导培养基中添加的激素及其浓度对以后在分化培养基上不定芽分化有重要作用,以添加1 mg/L NAA 和6 mg/L BAP最利于不定芽分化;分化培养基中添加4 mg/LBAP利于不定芽伸长及植株再生;幼叶外植体分化不定芽频率明显高于子叶和下胚轴;不同基因型不定芽分化率存在明显差异,白沙1016和花育23幼叶外植体获得了较高的不定芽分化率,分别达到91.8%和88.5%。再生苗经生根培养和驯化后,移栽花盆可正常开花结果。     

小麦不同外植体的组织培养效果研究

良好的组织培养效果是提高植物基因转化效率的基础。以山东省近年来育成并大面积推广的10个优良品种（系）为材料,对这些品种的花药、幼穗、幼胚和成熟胚的组织培养效果进行研究,旨在筛选每一基因型最适合于组织培养的外植体类型,为应用基因工程技术进行小麦遗传改良提供基础材料。结果表明,禽伤诱导率和再生成苗率与基因型和外植体类型（花药、幼穗、幼胚和成熟胚）密切相关。8802在花药和成熟胚培养中表现突出,花药出愈率达119．5％,愈伤分化成苗率19．9％;烟农19的幼穗愈伤直接分化成苗率最高,这43．5％;8802、烟农19和潍麦8号三个基因型的幼胚培养效果差异不显著,其愈伤分化成苗率分别为26．3％、24．5％和24．8％。蔗糖浓度在3％～9％之间,对成熟胚的愈伤组织诱导率影响很小。高浓度蔗糖降低愈伤生长速度。在一定蔗糖浓度下,愈伤诱导率与2,4-D浓度密切相关,高浓度的2,4-D对愈伤组织再生不利。MS＋4mg／L2,4-D对于成熟胚的脱分化相对较好,MS和MS＋0．4mg／L NAA＋0．6mg／L KT作为成熟胚的愈伤组织再生培养基,对不同基因型具有一定的适用性。     

玉米幼胚离体培养体系的建立

以78599、A189和糯杂3号的幼胚为外植体进行幼胚培养,研究最佳培养基配方及培养程序。结果表明:用改良的玉培培养基 2mg/L2,4-D 0.2mg/LKT 5mmol CaCl2 600mg/L脯氨酸 500mg/L水解酪蛋白 7g/L琼脂 30g/L糖进行诱导培养,3种基因型中78599最易诱导出愈伤组织。在其它条件不变的情形下,2,4-D浓度降到1mg/L,胚性愈伤组织呈颗粒状分散且颗粒细小,呈黄绿色。此种胚性愈伤组织接种在加KT或加BA的分化培养基中,以加KT的绿苗数多。     

香蕉未成熟雄花组织培养与快速繁殖研究

以香蕉未成熟雄花为外植体,进行组织培养和快速繁殖研究。结果表明,香蕉未成熟雄花外植体不消毒处理,在离体24 h内切片厚度1.2 mm为最佳外植体处理方式。最佳愈伤组织诱导培养基为MS+TDZ 0.2 mg/L+Zeatin 0.2 mg/L+生物素1.0 mg/L+谷氨酰胺100 mg/L+糖40 g/L（pH值5.3）;最佳胚性分化培养基为MS+6-BA 4.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L+糖30 g/L（pH值5.8）;最佳生根培养基为MS+IBA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+蔗糖30 g/L（pH值5.8）。炼苗后移栽至椰糠基质中,移栽成活率100％。     

巴西橡胶树未成熟花药的体细胞胚胎发生及植株再生

以巴西橡胶树（Hevea brasiliensis Muell. Arg.）的未成熟花药为外植体成功实现高频体细胞胚胎发生及植株再生。筛选出的最佳愈伤组织诱导培养基为：改良MS+2,4-D 2.0 mg/L+KT 0.5 mg/L， 最佳体细胞胚胎诱导培养基则为：改良MS+KT 0.7 mg/L+NAA 0.2 mg/L。将成熟体胚转移至无激素培养基中可进一步发育出根、茎、叶完整的小植株。细胞学分析显示， 所有受检小植株均为二倍体。将长至2-3 cm高的小植株移栽到营养袋中并置于温室条件下育苗， 随后可定植到大田。     

小麦遗传转化中优良受体基因型及L-PPT适宜浓度的筛选

为了筛选小麦遗传转化中的优良受体基因型和L-PPT(L-phosphinothricin,草丁膦)适宜浓度,以16份具有较大应用潜力的小麦品种(系)幼胚为外植体,研究了不同基因型间幼胚愈伤组织诱导、增殖、分化成苗的差异,并对获得的转基因受体基因型进行L-PPT敏感性试验.结果表明,16份材料组织培养特性差异较大,其中周19和2000H1012-2-1-5组织培养特性较好,其诱导率、增殖率和绿苗分化率均较高,可作为组织培养和转基因受体材料的良好基因型;筛选剂L-PPT为6 mg/L时大部分愈伤组织分化受到抑制,L-PPT为6 mg/L是周19和2000H1012-2-1-5幼胚愈伤组织比较理想的分化筛选浓度.     

几个籼稻品种的成熟胚愈伤组织植株再生体系的建立

组织培养技术在作物改良上的成功应用需要合适的植株再生体系。本试验以7个籼稻成熟胚为材料，通过优化激素配比，建立适合于水稻遗传转化的高频植株再生体系。研究结果表明，NB 2mg／L2，4-D适合于供试品种的成熟胚愈伤组织的诱导，诱导率达90％以上；在分化培养基中添加3．0-3．5mg／L KT，0．5～1．0mg／L NAA和5．0mg／L ABA的激素配比，明恢81、N175、航1号的最高分化率分别达72．7％、80．0％和78．0％；移栽成活95％以上。     

“热研11号”黑籽雀稗植株再生体系的建立

以热带牧草"热研11号"黑籽雀稗(Paspalum atratum cv.Reyan No.11)种子为材料,对其外植体植株的再生过程进行系统研究.结果表明,以MS无机盐 9.0mg/L维生素B1 9.5mg/L维生素B6 4.5mg/L尼克酸 1.0mg/L水解酪蛋白 30.0g/L蔗糖 8.0g/L琼脂为基本成分(MSM),附加植物激素类物质2.0mg/L2,4-D时,适合种子的愈伤组织形成,愈伤诱导率可达65%:继代培养基附加1.0mg/L2,4-D和0.1mg/LKT:分化的培养基附加6.0mg/L6-BA,分化率可达50%;生根培养基附加0.5mg/L激素类物质NAA,生根率100%.完成植株再生约需13周.     

快中子辐照对花生种子胚小叶植株再生的影响

以花生品种花育22号的成熟饱满种子为试材,采用14Mev不同剂量的快中子(0、9.7、14和18Gy) 进行辐照处理。处理后的种子经表面杀菌后,取胚小叶作为外植体先后在添加2,4-D 和BAP 的培养基上进行培养,诱导体胚形成及其萌发和植株再生。结果表明,体胚诱导率和植株再生率因辐照剂量的不同表现出明显的差异,随辐照剂量的增加,外植体形成体胚的频率及再生植株的频率明显降低。推断快中子辐照花育22号的适宜剂量为9.7~14.0Gy。再生小苗经无菌嫁接驯化后移栽田间,得到了成熟种子。           

第一例栽培种花生花药培养单倍体植株的创制

以栽培种花生为材料,开展花生单倍体培养的前沿性探索,包括离体花药诱导形成愈伤组织、愈伤组织分化形成幼芽、再生苗培养、再生植株倍性鉴定和嫁接移植等研究。通过比较外植体灭菌时间、诱导培养基、分化培养基、再生培养基和再生植株创制培养条件等试验,筛选出适合花生花药培养的方法：1%NaClO消毒灭菌9 min,愈伤组织的诱导培养采用B5N1、B3N1培养基,再分化培养采用B5N1-2培养基,再生苗培养采用SG培养基。本研究获得1株花药培养的再生植株,编号为15B8-8。荧光原位杂交技术（FISH）鉴定结果表明,该植株具有20条染色体,其中9条为A染色体、11条为B染色体,是第一例来自栽培种花生花药培养的单倍体植株;研究还表明,汕油52花生品种具有较强的花药培养力,有潜力作为花生花药培养的“桥梁品种”。     

贵港报春苣苔的叶片组培与植株再生

以贵港报春苣苔的叶片为外植体,研究不同培养基对其不定芽诱导和增殖、愈伤组织诱导与分化以及生根的影响。结果表明,外植体叶片以纵切为宜,不定芽诱导最适培养基为MS+6-BA 4.0 mg/L+IAA 1.5 mg/L,愈伤组织诱导最适培养基为MS+6-BA3.0～5.0 mg/L+2,4-D0.5～1.0 mg/L,不定芽诱导率以及愈伤组织诱导率均为100.00%;愈伤在MS+KT 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+potato 30 g/L+banana 30 g/L+apple 20 g/L+coconut juice 100 mL/L培养基上分化系数达12.64;不定芽在MS+ZT 1.0 mg/L+NAA 0.10 mg/L+potato 30 g/L+banana 30 g/L+apple 20 g/L+coconut juice 100 mL/L培养基的增殖系数为8.55;不定芽在3/4 MS+NAA 0.01～0.05 mg/L+活性炭1.0～3.0 g/L培养基上的生根率为100.00%。综上所述,叶片纵切后能通过不定芽途径以及愈伤组织途径建立贵港报春苣苔的组织培养技术体系,在该体系下不定芽增殖系数高、愈伤分化高,组培苗生根好。     

Callus induction and in vitro plant regeneration of rice (Oryza sativa L.) under various conditions

The objective of the present study was to develop an effective protocol for optimum callus induction and complete plant regeneration for four varieties of rice (Oryza sativa L.) i.e., Super Basmati, Basmati-370, Basmati-371 and Fakhre Malakand. Calli were induced from mature seed scutelum. The Murashige and Skoog (MS) and Chu's N6 media containing hormone 2, 4-D (2, 4-Dichlorophenoxy acetic acid) in different concentrations were used for callus induction. Fakhre Malakand produced maximum calli on N6 media containing 3 mg L(-1) 2,4-D. while other three varieties showed maximum callus induction on N6 media containing 2.5 mg L(-1) 2,4-D. N6 media was found better than MS media for callus induction. For complete plant regeneration the calli of two varieties i.e., Basmati-370 and Basmati-371 were plated on N6 media containing different concentrations of NAA (1-Naphthalene acetic acid) and BAP (6-benzyl aminopurine). The maximum regeneration frequency (%) was observed on N6 media containing NAA 1 mg L(-1) and BAP 2.5 mg L(-1). It took 27-30 days for the callus to regenerate into a complete plant. Basmati-370 produced 4-7 plantlets per callus whereas Basmati-371 produced 4-8 plantlets per callus with regeneration frequencies of 61 and 69%, respectively.     

低浓度2,4-D提高水稻体细胞成苗研究

 以较低浓度(0.2、0.4、0.8 mg/L)的2,4-D作为水稻(Oryza sativa L.)的外植体(种子)诱导愈伤组织培养基中的生长素类激素，发现0.8 mg/L的2,4-D能较早地使胚的盾片产生大量的愈伤组织，但这些愈伤组织在原培养基上不能分化出绿芽。含0.2 mg/L的2,4-D能在胚芽鞘节等部位产生一些较光滑、致密、白色颗粒状的结构或愈伤组织，虽然它们出现较迟，但这些结构物能在原诱导培养基上逐渐转化成芽簇，并产生一些纤细的根。将芽簇分割成小块，转移到加有KT等的成苗培养基上，能形成大量的幼苗，绿苗频率达80%以上，明显高于一般报道的水平。试管苗经大田种植后生长整齐一致，能产生出正常的种子。     

不同基因型菜心游离小孢子培养和植株再生

以11个不同基因型的菜心栽培品种为试材,研究不同培养条件对菜心游离小孢子胚诱导和植株再生的影响。结果有7个基因型材料获得小孢子胚,从不同基因型诱导形成胚的频率存在显著差异,表明基因型是影响菜心小孢子胚发生的主要因素;第1天热激培养时用170 g/L高浓度蔗糖培养之后转换成含130 g/L蔗糖培养基能显著提高小孢子胚诱导率;0.05 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA能促进菜心小孢子诱导成胚;添加0.4 mg/L GA3可显著提高菜心小孢子胚芽诱导率和平均每胚出芽数。7个基因型材料均诱导出再生植株,植株诱导率为100%。     

大苞鞘石斛组织培养快繁研究

为筛选出大苞鞘石斛组培快繁体系各阶段最适培养基配方,以大苞鞘石斛无菌苗茎段为外植体,通过正交试验研究不同因素对大苞鞘石斛植株再生的影响。结果表明:拟原球茎诱导最适培养基为1/2MS+2,4-D0.2 mg/L+蔗糖30 g/L,诱导出的拟原球茎直径1.5 mm时将其从茎段上剥离,并接入原培养基继续诱导15~20 d;拟原球茎增殖最适培养基为1/2MS+NAA 1 mg/L+蔗糖30 g/L+椰乳10%,继代周期25~30 d;拟原球茎分化最适培养基为1/2MS+NAA 0.5 mg/L+蔗糖30 g/L+椰乳10%,分化培养需40 d;将分化的无菌苗继代于花宝2号3 g/L+蛋白胨2 g/L+IBA 1 mg/L+蔗糖30 g/L+椰乳10%生根诱导效果最好,培养45 d;生根壮苗最佳培养基为花宝1号3 g/L+蛋白胨2 g/L+蔗糖30 g/L+活性炭1 g/L,培养50 d。