禽类转基因研究进展

转基因动物是指借助基因工程技术将体外重组的基因导入受精卵或早期胚胎，生产的带有外源基因的动物(Tramgemc Anima1)。整合到动物基因组上的外源结构基因称为转基因。在哺乳动物、鱼类方面转基因技术已取得了很大突破，得到的转基因动物在生产实践中已展示很好的应用前景。而禽类由于其生殖生理的独特性，目前用显微注射存在着以下困难：1、不易获得大量的受精卵；2、受精时多精入卵的干扰使雄原核不易识别；3．卵子重新输入母体输卵管内的技术或受精卵体外孵化技术难度大。     

哺乳动物胚系外源基因的导入及表达

哺乳动物胚系外源基因的导入和表达研究是以显微注射技术为主要导入手段的基因工程和移植胚胎学的有机结合。以哺乳动物胚系作为研究对象远不如鱼、蛙类受精卵和原、真核细胞方便,在受精卵制备、体外培养、移植发育及外源基因导入等方面均受到复杂技术条件的限制。随着实验手段和胚胎移植技术的不断改进,近几年来这一研究领域在基因导入方法和动物新种构建方面已有重大突破,“巨型”小鼠构建的成功,预示     

嵌合体鸡及其在基因组操作中的应用

在哺乳动物,利用显微注射等方法,把外源基因导入受精卵的雄性原核,再把经遗传修饰的合子移植到受体母畜体内,使之发育成转基因后代己获成功。然而在禽类,由于其生殖解剖及生殖生理比较独特,因此把外源DNA导入其基因组的技术,还存在着一系列问题,如处死法获得单细胞卵子、受精时多精入卵的干扰使雄性原核不易识别以及把卵子重新移入母鸡输卵管内等过程中。致使在哺乳动物中已经广泛应用的转基因技术,不适     

转基因技术在畜牧生产中的应用

80年代早期 ,产生了将外源基因显微注射到受精卵 ,产生携带外源基因的动物品系新技术 ,这种携带有外源基因的动物称为“转基因动物”。随着现代分子生物学技术的发展 ,相继出现了 DNA体外重组、某些重要生产性状基因的分离、基因融合、胚胎体外操作等转基因相关技术 ,并在畜牧生产中得到了广泛的应用。目前已报道的转基因动物有线虫、果蝇、海胆、两栖动物、鱼类、小鼠、猪、牛、羊、鸡、兔等。本文就目前转基因的方法及该技术在提高畜禽生产性能、抗病育种、疾病治疗等方面的应用作一论述。1　外源基因转移方法1 .1　显微注射法　 Jaenis…     

转基因动物技术

转基因动物已成为生物技术开发的热点。在肿瘤发生、疾病模型、免疫系统、生物药品、家畜育种等方面开始得到应用。此技术是将确定的外源基因导入哺乳动物的胚胎系,整合于染色体上,使其能正常表达并遗传给后代。将基因导入哺乳动物的生殖细胞,是生物学最新重大技术进展之一。常采用以下几种方法:一、显微注射法将克隆化的 DNA 直接注射进动物受精卵的前核,目前国内外多采用此法。所需设备有微分干涉显微镜、显微操作仪、微熔炉、细胞固定器、微量注射针头和微量玻璃管等。1980年 Gordon 等人首先采用此技术成功地培育出转基因鼠。美国学者Palimter 等(1982)成功地将人生长激素导入小鼠     

家禽转基因技术的分类方法与存在的问题

1993年英国Sang博士将外源基因导入公鸡,首次获得了蛋黄中含有珍贵的人类蛋白的母鸡犤1犦。由于家禽的繁殖周期短,产蛋量高,且转基因产品具有巨大的潜在价值,因此,转基因家禽是一种理想的输卵管生物反应器犤2犦。但由于母禽的生殖生理系统特殊,家禽为体内受精,受精后在卵子周围形成卵白、壳膜及蛋壳,同时受精卵发生快速分裂,受精蛋约20h后产出体外时,胚胎已发育到6000个细胞。因此,对家禽进行早期遗传操作十分困难,以致于在哺乳动物上已经成熟的转基因方法在家禽上却不能发挥有效的作用,使得转基因家禽的生产相对落后于哺乳动物。因此,家禽…     

转基因动物与动物营养

1 转基因技术 1.1 显微注射法 在众多转基因技术中,显微注射法因其出现早,研究深入,被推荐为一种最经典有效的方法。显微注射法的基本原理是将外源基因直接用显微注射器注入受精卵(雄原核)内,利用受精卵分裂繁殖中DNA的复制过程,将外源基因整合到DNA中进行表达。显微注射法的优点是导人外源基因的效率较高,常能获得良好的表达,操作简单,易于掌握,注射的基因不受片段大小限制,无需载体。此法不足之处为外源基因绝大部分是头尾相连,拷贝数不等地随机整合到受体染色体上,因而其表达水平在转基因个体间常不稳定。另外,显微注射法不能将外源基因导入发育较晚阶段的胚胎细胞;显微注射法所针对的是受精卵,对一些单胎动物或少胎动物,加之低整合率,阳性后代出现的机率很少。     

转基因动物培育方法及其应用

转基因动物培育研究是近十年来人们开辟的一个崭新的热门研究领域,是外源基因转移从细胞水平到机体水平的一大飞跃。进入80年代以来,人们应用转基因技术,已将来源于人、动物、细菌和病毒等许多种不同的外源基因导入小鼠、大鼠、兔、羊、牛的生殖细胞,成功地培育出了相应的转基因动物,使得动物的基因操作能以前所未有的规模向前发展。转基因动物已经成为考察发育和发育的基因调节机理、致癌基因的作用和免疫系统内部错综复杂的细胞反应的有效工具。它还可以用来进行动物新种培育以及肿瘤和遗传性疾病防治。一、转基因动物的培育方法1.DNA 的显微注射将外源 DNA 经显微注射直接导入受精卵的雄前核是目前应用最广泛也是最成功的转基因技术。将注有外源基因的受精卵移     

转基因猪的研究进展

转基因猪的研究中最常用的技术方法是核显微注射法。其原理是在显微镜下将外源基因注入到原核期或经重构发育至原核期的受精卵细胞的胚胎原核中，注射的外源基因与胚胎基因组融合，然后进行体外培养，最后移植到受体母畜子宫内发育，这样分娩的动物体内的每一个细胞都含有新的DNA片段，此即转基因后代。     

兔转基因受精卵自体植入法

在转基因动物的培育过程中,一般都是先由交配后的供体动物采集受精卵,经显微注入外源目的基因之后,再移植到性周期同步的受体动物输卵管内.由于显微注射等体外操作的损伤以及供体—受体之间不太一致的内环境因素,使这些受精卵发育成胎儿并产出仔畜的百分率(即成胎率)甚低.小鼠转基因受精卵的成胎率为20～30%,其他哺     

哺乳动物的基因转移

遗传工程是70年代从分子生物学发展起来的一门新技术,作为基因工程是对DNA上的基因进行体外操作,把不同来源的基因按照设计蓝图构建成一个新的融合基因(Fusion ge-ne),然后导入细胞中,产生具有新的遗传特性的生物。胚胎操作和基因工程技术的结合为哺乳动物基因工程开辟了前景,基因工程的应用涉及到目的基因的分离、重组、转移、整合和表达等一系列过程。在哺乳动物的应用研究中,首先把SV40病毒DNA整合到小鼠的基因组中(Jaenisch等,1974)。Munro(1968)利用鸡进行了外源基因导入动物染色体的研究,并且取得了基因转移成功,但当时没有引起重视。进入80年代以后,利用微注射(Mi-     

分子育种手段之转基因技术

1显微注射法　　转基因猪的研究中最常用的技术方法是核显微注射法.其原理是在显微镜下将外源基因注入到原核期或经重构发育至原核期的受精卵细胞的胚胎原核中,注射的外源基因与胚胎基因组融合,然后进行体外培养,最后移植到受体母畜子宫内发育,这样分娩的动物体内的每一个细胞都含有新的DNA片段,此即转基因后代.     

禽痘病毒分子生物学特性及在哺乳动物中的应用

禽痘病毒(Avipoxvirus)是痘病毒科的成员,可以作为病毒载体表达外源基因。近年来禽痘病毒作为非复制型载体的应用已成为国内外研究的热点,成功地构建了表达不同外源基因的重组禽痘病毒,在肿瘤疾病和艾滋病的预防和治疗中都有不俗的表现。文章主要对禽痘病毒的分子生物学特性及其在哺乳动物中的应用作了概述。     

RecA 蛋白介导的转基因小鼠制备

受精卵原核内核酸酶对外源基因的降解是导致显微注射法制备转基因动物效率低的重要原因之一,RecA蛋白可与单链DNA结合而阻止细胞核内核酸酶对单链DNA的降解。本试验建立了显微注射和RecA蛋白结合制备转基因动物的技术模型,并初步探讨了RecA蛋白对显微注射法制备转基因动物效率的影响。以单链DNA、RecA蛋白与单链DNA的复合体以及双链DNA为外源基因进行受精卵原核显微注射转基因试验,分别获得F0代小鼠28、41和32只,并通过PCR和Southern blot进行了转基因鉴定。结果显示,在小鼠受精卵原核显微注射RecA＋ssDNA复合体获得的F0代中14．6％（6／41）为转基因个体,显微注射dsDNA获得的F0代中转基因个体占6．2％（2／32）,而显微注射SSDNA获得的F0代中无一为转基因个体。     

禽痘病毒表达载体在兽用重组疫苗中的应用

禽痘病毒表达载体是已构建表达外源基因的病毒载体中的一种，它在表达外源基因上具有明显的优势：(1)它的基因组结构庞大，能耐受较大的外源基因(25～35kb)在其基因组的不同位点插入。(2)严格的胞浆内复制，避免了病毒基因重组入宿主细胞染色体的可能性。且禽痘病毒的宿主范围较窄，仅感染禽类，在哺乳动物体内仅产生一过性感染，安全性较高。(3)表达产物(蛋白质)在翻译后的加工修饰过程与体内极为相似，因此活性高。且保留了相应的抗原性、免疫原性。基于这些特点，使得禽痘病毒载体不仅可作为禽源疫苗，而且还可作为哺乳动物乃至人类的基因工程活载体疫苗，具有广阔的应用前景。     

关于用注入细胞的方法获得嵌合体鸡的可能性

关于用注入细胞的方法获得嵌合体鸡的可能性Ａ．Ｂ．等著魏庆信译原载《ＣＥ》１９９３．Ｎｏ．２（译者单位：湖北省农科院畜牧兽医研究所）为了获得转基因禽，除了显微注射外源遗传物质到受精卵的基本方法之外，正在试验不直接转基因的方法，这种方法是利用转移供体细胞...     

β干扰素转基因小鼠的建立和特性研究

选择ICR小鼠为受试动物,应用显微注射仪,将线状人β干扰素基因,按2940～10000拷贝,1～3pL的剂量注射到供体受精卵的雄前核,然后移植到假孕受体的输卵管。实验先后注射了301个受精卵,移植到20只假孕受体,其中5只妊娠,产仔25只。从所获得的25只亲代小鼠的尾组织提取DNA,用内切酶BamHI消化,以[α-~(32)P]-dCTP标记的上述外源基因为特异性核酸探针,应用DNA印迹法检测这些小鼠DNA内外源基因的整合状况.结果表明,亲代小鼠中有人β干扰素基因重组子的转基因小鼠,杂交带在6.8kb位置。应用上述同样方法对亲代转基因小鼠的子1代组织DNA检测发现,绝大多数小鼠的标本除见到1条1.8kb人β干扰素基因的较弱杂交带外,还有数条5.0kb以上强弱各异的杂交带,表明这种外源基因不仅整合到了亲代小鼠的遗传物质内,而且可经垂直方式传给子代。人β干扰素基因的鼠体水平表达检测发现,1只子1代转基因小鼠的肿瘤组织浸出液中含有人β干扰素,滴度达160U/mL,表明整合在小鼠DNA内的人β干扰素外源基因不经诱导而有一定表达。     

分子育种手段之转基因技术

1显微注射法转基因猪的研究中最常用的技术方法是核显微注射法。其原理是在显微镜下将外源基因注入到原核期或经重构发育至原核期的受精卵细胞的胚胎原核中,注射的外源基因与胚胎基因组融合,然后进行体外培养,最后移植到受体母畜子宫内发育,这样分娩的动物体内的每一个细胞都含有新的DNA片段,此即转基因后代。显微注射法的缺点是效率低、位置效应(外源基因插入位点随机性)造成表达结果的不稳定性、动物利用率低等。其优点是外源基因的转移率和整合效率都较高。迄今为止,核显微注射法还是最有效、最实用的动物转基因方法。2核移植转基因法…     

家畜受精卵或胚胎保存的进展(综述)

哺乳动物卵子或胚胎的保存,特别是家畜的受精卵或胚胎的保存,对于家畜受精卵或胚胎移植十分重要。在畜牧生产中具有实际应用的意义。过去对于体外保存卵子或胚胎的研究,在实验室哺乳动物中较多,许多实验动物受精卵或胚胎保存的研究,为保存家畜受精卵或胚胎的研究开辟了途径。因此,在这篇综述中有时不能不涉及一些实验室哺乳动物,但尽可能从     

应用精子载体法导入外源DNA影响家蚕遗传性的研究

我们曾经实验表明 ,无论采用直接注射幼虫方法 ,还是采用精子介导的“交配囊法” ,将外源DNA导入蓖麻蚕或家蚕体内 ,都有可能改变受体的某些遗传特性 ,有的变异还可以遗传并育成稳定的新品系。实验结果还表明 ,采用不同品种的家蚕DNA导入同一品种的蓖麻蚕体内 ,对遗传性有不同的影响。为了进一步探讨外源DNA对家蚕的遗传作用 ,也为了进一步验证精子介导的转基因技术在蚕上实际应用的可行性 ,本研究采用我们建立的“交配囊导入法” ,将不同种属的蓖麻蚕和柞蚕DNA导入家蚕处女蛾交配囊内 ,并与同种雄蛾交配 ,获得受精卵 ,观察由此受精卵…