超排山羊卵巢卵母细胞体外成熟和体外受精的研究

以ＴＣＭ１９９＋１０ｍｍｏｌ／ＬＨＥＰＥＳ＋青霉素（６ｍｇ／Ｌ）＋链霉素（５ｍｇ／Ｌ）为基础培养液（ＢＭ），再分别加入不同成分，配成５种卵母细胞成熟液：（Ａ）ＢＭ＋１０％ＥＧＳ；（Ｂ）ＢＭ＋１０％ＥＧＳ＋ＨＣＧ（２．５ｍｇ／Ｌ）；（Ｃ）ＢＭ＋１０％ＥＧＳ＋ＨＣＧ＋Ｅ２（１ｍｇ／Ｌ）；（Ｄ）ＢＭ＋１０％ＦＣＳ＋ＨＣＧ＋Ｅ２；（Ｅ）ＢＭ＋１０％ＥＧＳ＋ＨＣＧ＋Ｅ２＋颗粒细胞（１．５×１０６～３．０×１０６个／ｍＬ）。在３８．５℃、５％ＣＯ２下培养２６ｈ，排卵后第１天卵巢卵母细胞体外成熟率分别为６７．６７％（２０／３０），６０．４２％（２９／４８），８３．６７％（４１／４９）和８０．８２％（５９／７３），排卵后第５天卵巢卵母细胞，在培液Ｄ中体外成熟率为７１．４３％（４５／６３）。排卵后第１天的９８枚卵巢卵母细胞，体外成熟体外受精卵裂率为２１．４３％，２１枚２细胞胚移植５头受体获２头羔羊。研究表明，超排山羊卵巢卵母细胞经体外成熟可获得大量廉价的成熟卵母细胞，并可通过体外受精获得试管山羊     

不同繁殖季节山羊卵母细胞体外成熟及受精效果研究

本试验在2012年11月至2013年5月间进行,笔者从荣昌屠宰场采集了重庆本地黑山羊的卵巢,对于非繁殖季节（冬）和繁殖季节（春）期的卵巢卵母细胞的回收情况作了比较,并观察了不同级别卵母细胞的体外成熟和体外受精情况.结果表明：繁殖季节的卵巢平均回收COCs数、可用COCs数和COCs可用率分别为5.43枚、2.65枚、48.57％,均较非繁殖季节高（P＜0.05）;A、B、C、D级卵母细胞体外成熟率的差异极显著（P＜0.01）,但A、B、C级卵母细胞体外成熟（IVM）卵的体外受精率、卵裂率无显著性差异（P＞0.05）.     

性成熟前牛卵母细胞体外受精研究

性成熟前牛卵母细胞体外受精研究孙青原，侯艺，刘国艺，杨庆章，秦鹏春（东北农业大学生物工程系哈尔滨１５００３０）前言在国内，牛体外受精的最大困难之一，就是卵巢来源不足。如果能用小牛作为卵母细胞供体，不仅可扩大卵母细胞来源，还可缩短世代间隔的时间，加快牛...     

山羊卵泡卵母细胞体外受精及受精卵的体外发育

对山羊卵泡卵母细胞的体外成熟、体外受精及受精卵体外培养的系列研究表明,在成熟培养液中添加１５μｇ／Ｌ重组牛生长激素（ｒｂＧＨ）,与ＦＳＨ和ＬＨ配合使用,卵泡卵母细胞的成熟率（６７．９％）显著高于不含ｒｂＧＨ的培养组（５３．１％,Ｐ＜０．０５）;３８．５℃和３９．０℃的培养温度对卵泡卵母细胞体外成熟培养的影响无显著差异（Ｐ＞０．０５）;ＢＯ液上浮法对山羊冷冻精子的活精子分离效果优于Ｐｅｒｃｏｌ分层液法,并得到较高的受精率（６４．３％∶４９．０％,Ｐ＜０．０５）;颗粒细胞单层和输卵管上皮细胞单层的共同培养体系均有益于受精卵的体外发育。     

不同超数排卵方法所获羔山羊卵母细胞体外成熟率及体外受精率…

本研究观察了不同超排处理方法对羔山羊卵母细胞体外成熟及体外受精的影响并将体外受精胚胎进行了移植，以便探讨利用羔山羊卵母细胞生产体外受精胚胎的技术途径。     

羔山羊卵巢卵母细胞体外成熟培养条件的研究

将出生后５０～７０日龄的羔山羊，经超数排卵处理以后，从卵泡中抽取卵母细胞，取外观形态正常的卵母细胞分成五组，在含有１０％胎牛血清（ＦＣＳ）的ＴＣＭ－１９９培养液中分别经１２、１６、１８、２０和２４ｈ的体外成熟培养后进行体外受精，探索不同体外成熟培养时间对体外受精及卵裂率的影响。另外，在成熟用培养基内还分别添加了发情母羊血清（ＥＮＧＳ）和ＦＣＳ以观察其培养效果。结果表明，经过１２～２４ｈ体外成熟培养的卵母细胞，在体外受精后的４８ｈ检查卵裂率分别为１０％、３７．１％、５０．０％，４１．２％和２５．０％，卵母细胞经体外成熟培养１６～２０ｈ的卵裂率显著高于１２ｈ和２４ｈ的卵裂率。在成熟培养基内分别添加ＥＮＧＳ和ＦＣＳ，其体外受精卵的卵裂率分别为６０．３和４６．８％，卵裂率在添加两种血清的培养基之间无显著差异。     

山羊卵母细胞的体外成熟和受精

在有颗粒细胞，促卵泡素，促黄体素及１７β雌二醇存在的情况下，裹着卵泡卵丘细胞的山羊卵母细胞的体外成熟。从直径２－６ｍｍ的卵泡中获得的卵母细胞，有８６％成熟分裂；而直径为１－２ｍｍ的留言簿包，只有２４％的卵母细胞达到中期Ⅱ。卵泡卵丘母细胞复合体，培养前在２０℃下处理，结果有１１．５％的卵母细胞出现不正常的减数分裂的纺缍体。     

卵泡大小和颗粒细胞对山羊卵泡卵母细胞体外成熟和体外受精的影响

用切割法采集卵泡液,收集卵丘一卵母细胞复合体（Cumulus oocytes comlexs,COCs）和自然裸卵,将部分COCs去除卵丘细胞获得机械裸卵,COCs放入体外成熟培养液中培养为成熟卵母细胞,加入获能的精子液,进行体外受精。结果表明：卵母细胞的体外成熟率和卵裂率与卵泡直径密切相关,大卵泡（80．95％,P〈0．01）和中等卵泡（75．50％,P〈0．05）的卵母细胞成熟率高于小卵泡（50．27％）;犬卯泡（53．53％）和中等卵泡（47．13％）的卵裂率显著高于小卵泡的32．26％（P〈0．05）。COCs、机械裸卵和自然裸卵的体外成熟率分别为75．0％、54．2％和10．5％,差异极显著（P〈0．01）,卵裂率分别为53．8％、10．8％和0％,差异极显著（P〈0．01）。对照组和1×10^5、1×10^6个／mL颗粒细胞组卵母细胞体外成熟率分别为68．6％、69．6％和67．8％,无显著差异（P〉0．05）,但均显著高于1×10^7个／mL（51．5％,P〈0．05）和1×10^10个／mL（35．5％,P〈0．05）颗粒细胞组,但各组间的体外受精率无显著差异（P〉0．05）。结果提示,大卵泡和中卵泡的卵母细胞的体外成熟率和卵裂率显著高于小卵泡,体外成熟培养液中添加高浓度的颗粒细胞能显著抑制卵母细胞的体外成熟。     

屠宰牛卵母细胞体外成熟和体外受精研究

对采集到的卵巢采取抽吸法、割破法回收卵母细胞,割破法得到的A级卵母细胞显著高于抽吸法。把有黄体和无黄体的卵巢卵母细胞进行培养比较,无黄体的卵巢卵母细胞的成熟率为84．33％,显著高于有黄体卵巢卵母细胞的74．32％。本试验中卵泡卵母细胞和深层卵母细胞体外成熟率均能达到75％以上．卵巢表面卵泡卵母细胞的卵裂率为54．76％,高于深层卵母细胞的卵裂率,但二者无显著差异。IVM时添加卵丘细胞、IVC时添加输卵管上皮细胞是比较理想的培养系统。     

影响猪卵母细胞体外受精效率因素的研究

通过比较参与受精的卵母细胞颗粒细胞存在与否、精子上浮时间、精卵共孵育时间、不同受精液等4个方面的因素,研究这些因素对猪卵母细胞体外受精后胚胎发育能力的影响,以求找到最佳的猪卵母细胞体外受精体系。将选择带有不同颗粒细胞的卵丘卵母细胞复合体分为3组：含全部颗粒细胞、2~3层颗粒细胞和裸卵;调整精子在受精液里的上浮时间为0、30、60、120min研究其受精能力;比较3、6、20h精卵共孵育时间对体外受精的影响;结果表明：在本试验体系下,在mTBM受精液中,将精子上浮处理60min,与含2~3层颗粒细胞的卵丘-卵母细胞复合体共孵育6h的IVF体系最为有效,其卵裂率为（77.6±2.3）%,囊胚率为（25.7±2.6）%。     

山羊卵母细胞体外成熟体系研究进展

卵母细胞体外成熟(IVM)是山羊胚胎体外生产的关键步骤,其对山羊体外生产胚胎的数量和质量均具有非常重要的意义。此外,IVM还可以满足胚胎工程技术如体细胞核移植、转基因动物生产对卵母细胞的大量需求。然而,由于山羊卵母细胞体外成熟研究起步较晚,与牛、猪等家畜相比仍然存在不小的差距,存在诸如体外成熟率低、胚胎质量不佳、培养体系可重复性低等问题。因此,分析山羊卵母细胞体外成熟的主要影响因素,提高山羊卵母细胞体外成熟率,建立山羊卵母细胞体外成熟稳定培养体系,就成为了近年来山羊胚胎体外生产的研究重点。论文综合国内外学者近年的相关研究,对可能影响山羊卵母细胞体外成熟效率的各种因素进行了综述分析,同时对山羊卵母细胞体外成熟现存问题进行了分析,以期为建立山羊卵母细胞体外成熟体系提供理论支持。     

大熊猫卵泡卵母细胞体外受精的初步研究

用抽吸法和切割法采集非发情季节病亡大熊猫的卵泡卵母细胞,经体外成熟培养后,用大熊猫冷冻精液进行体外受精。结果表明∶（１）在非繁殖季节,大熊猫卵巢中小腔及大腔卵泡卵母细胞仍较丰富,其大腔卵泡卵母细胞可在体外培养成熟;（２） 大熊猫的卵母细胞平均直径为（１４１±６．７）μｍ ,其胞质富含卵黄颗粒;（３）自配 Ｐａｎｄａ Ｉ Ｉ号获能液（含丙酮酸钠、肾上腺素等）可使大熊猫精子有效获能;（４） 大熊猫卵母细胞体外受精后,经培养可观察到第 ２ 极体,有的受精卵开始发生卵裂。     

山羊卵泡母细胞体外受精及受精卵的体外发育

对山羊卵泡卵母细胞的体外成熟,体外及受精卵体外培养的系列研究表明、在成熟培养液中添加１５μｇ／Ｌ,重组牛生长激素,与ＦＳ睡ＬＨ配合使用,卵泡卵母细胞的成熟率（６７．９％）显著高于不含ｒｂＧＨ的培养组;３８．５℃和３９．０℃的培养温度以 卵母细胞体外成熟培养的影响无显著差异;ＢＯ液上浮法对山羊冷冻精子的活精子分离效果优于Ｐｅｒｃｏｌｌ分层液法,并得到较高的受精率;颗粒细胞单层和输卵管上皮细胞单层扔共     

牛成熟卵母细胞体外受精的研究进展

这篇论文论述了牛成熟卵母细胞体外受精的研究进展,主要从精子的制备方法,获能液的组成、精子获能的判定、受精方,法以及卵母细胞受精与否的评定5个方面加以阐述,并展望了体外受精的研究方向。     

羔山羊卵巢母细胞体外成熟培养条件的研究

将出生后５０～７０日龄的羔山羊，经超数排卵处理后，从卵泡中抽取卵母细胞，取外观形态正常的卵母细胞分成五组，在含有１０％胚牛血清（ＦＣＳ）的ＴＣＭ－１９９培养液中分别经１２、１６、１８、２０和２４ｈ的体外成熟培养后进行体外受精，探索不同体外成熟培养时间对体外受精及卵裂率的影响，另外，在成熟用培养基内还分别添加了发情母羊血清（ＥＮＧＳ）和ＦＣＳ以观察其次培养效果，结果表明，经过１２～２４ｈ体外成熟培养     

牛卵母细胞体外成熟和体外受精技术的研究进展

论述了牛卵母细胞体外成熟和体外受精的最新研究进展,包括卵丘母细胞复合体、卵母细胞的体内、体外成熟、以及体内、体外的异常成熟和卵母细胞的体外成熟方法,无蛋白质、无血清系统的限定性培养液的研究进展,卵母细胞全外成熟与标志的某些理论上的突破性;体外受精中精子供体的选择、精子活力和正常形态的选择冷冻解冻精液的体外获能、精了的体外受精力,以及体外的异常受精,还论述了牛卵母细胞体外成熟和体外受精技术在家畜育种     

牛卵母细胞体外受精和培养技术

本文综述了牛卵母细胞体外受精和体外成熟技术的研究进展,包括精子的体外获能、卵母细胞成熟培养和体外受精、体外受精早期胚胎的培养等,并且对影响该技术的主要原因进行了分析。     

牛卵母细胞体外成熟和体外受精技术

本文综述了十几年来牛的卵母细胞体外受精和体外成熟技术的研究进展,包括精子的体外获能、卵母细胞采集及成熟培养和体外受精、体外受精早期胚胎的培养等环节,并且对影响该技术的主要原因进行了分析,对体外受精在家畜育种中的应用提出了展望。     

山羊卵母细胞体外成熟的研究

在38℃和39℃不同温度条件下培养山羊卵母细胞,结果表明:在38℃和39℃下成熟率分别为63.6%和57.3%,二者之间差异不显著,说明只要培养温度在山羊正常体温的变动范围内,对其卵母细胞的成熟率没有影响;在38℃温度条件下用10?S的M199培养液成熟率为62.5%,而10 mg/ml BSA的M199培养液成熟率为58.7%,二者之间差异不显著,说明无血清培养可以代替血清培养.