氨基酸分析方法

该研究从分析化学角度,介绍了一些重要的氨基酸分析方法,其中包括柱前衍生化法以及柱后衍生化方法,总结了柱前衍生化法、柱后衍生化法及其不同衍生试剂的优缺点,为氨基酸分析方法的应用提供了理论基础。     

氨基酸高效液相色谱分析

本文论述了用柱后衍生法及柱前衍生法测定氨基酸，其中着重论述了柱前衍生法，包括ＯＰＡ法、ＦＭＯＣ法、ＰＩＴｃ法、Ｄａｎｓｙｌ－Ｃｌ法、ＤＡＢＳＹＬ－ＣＬ法、ＮＢＤ－ＣＬ法以及其它几种衍生法，论述了上述几种方法的原理、特点、优缺点以及应用范围，并阐述了微粒柱、窄径柱与氨基酸分析的关系。     

氨基酸高效液相色谱分析

本文论述了用柱后衍生法及柱前衍生法测定氨基酸,其中着重论述了柱前衍生法,包括ＯＰＡ法、ＦＭＯＣ法、ＰＩＴｃ法、Ｄａｎｓｙｌ－Ｃｌ法、ＤＡＢＳＹＬ－ＣＬ法、ＮＢＤ－ＣＬ法以及其它几种衍生法,论述了上述几种方法的原理、特点、优缺点以及应用范围,并阐述了微粒柱     

柱前衍生RP-HPLC法测定犀牛角中氨基酸的含量

[目的]建立柱前衍生法测定犀牛角中氨基酸含量的方法。[方法]犀牛角以酸水解法制备水解氨基酸样品溶液,采用柱前衍生-液相色谱法(RP-HPLC)法测定氨基酸含量。色谱条件为:色谱柱为Waters Nova-Pak C18柱(150 mm×3.9 mm,5μm),以乙腈-缓冲盐为流动相进行梯度洗脱,流速为1.0 ml/min,紫外检测器检测波长为248 nm,柱温为37℃。[结果]17种氨基酸在0.003 4～0.191mg/ml范围内有良好的线性关系(r0.999 4),平均回收率(n=6)为97.8%。[结论]犀牛角中含有大量的氨基酸,其总氨基酸含量高达41.3%。该方法对研究犀牛角的药用价值与寻找犀牛角药用替代物有积极意义。     

氨基酸分析中的柱前衍生技术

介绍了以邻苯二甲醛、氯甲酸芴甲酯、异硫氰酸苯酯、丹酰氯、二甲胺偶氮苯磺酰氯和6-氨基喹啉-N-羟基琥珀酰亚胺基氨基甲酸酯等作为衍生试剂的柱前衍生与反相高效液相色谱法相结合分析氨基酸的原理及特点。     

高效液相色谱法分析霉菌干酪中游离氨基酸含量

近年来,国内外对干酪的研究工作在不断深入开展。霉菌干酪在干酪研究中具有非常重要地位。霉菌干酪在成熟过程中产生一定量氨基酸,它对干酪的风味产生重要影响。因此,对霉菌干酪中的游离氨基酸的组成和含量进行监测,以获得霉菌干酪过程中氨基酸变化模式具有非常重要的意义,目前国内尚未有对霉菌干酪中游离氨基酸进行检测的报道。目前柱前衍生反相高效液相色谱测定氨基酸技术取得很大进展[1-2]。邻苯二甲醛(OPA)衍生步骤简单、反应速度快,剩余试剂不干扰测定,因此在柱前衍生试剂中以OPA的应用最为广泛。本文采用HP1100系列高效液相色…     

高效液相色谱法分析霉菌干酪中游离氨基酸含量

近年来,国内外对干酪的研究工作在不断深入开展。霉菌干酪在干酪研究中具有非常重要地位。霉菌干酪在成熟过程中产生一定量氨基酸,它对干酪的风味产生重要影响。因此,对霉菌干酪中的游离氨基酸的组成和含量进行监测,以获得霉菌干酪过程中氨基酸变化模式具有非常重要的意义,目前国内尚未有对霉菌干酪中游离氨基酸进行检测的报道。目前柱前衍生反相高效液相色谱测定氨基酸技术取得很大进展[1-2]。邻苯二甲醛(OPA)衍生步骤简单、反应速度快,剩余试剂不干扰测定,因此在柱前衍生试剂中以OPA的应用最为广泛。本文采用HP1100系列高效液相色…     

OPA柱前衍生法测定饲料中的氨基酸含量

在ＫＮＡＵＥＲ－８３０型氨基酸全自动分析仪上ＯＰＡ柱前衍生法能快速,准确地测定饲料中的氨基酸含量,色谱条件为：流量１ｍｌ／ｍｉｎ,反应时间５ｍｉｎ柱温４５℃,洗脱液为醋酸钠和甲醇混合液,采用梯度洗脱,饲料中氨基酸含量的变异系数在０．３７％～７．０３％之间,氨基酸回收率除蛋氨酸外,其余都在９５％～１０５％之间,氨基酸含量与峰面积的相关系数在０．９３２９～０．９９９７之间。     

茚三酮法测定茶叶游离氨基酸总量研究

鉴于茚三酮法测定游离氨基酸总量不够稳定,本文对茚三酮法测定茶游离氨基酸的显色反应时间与氨基酸浓度因素进行了条件优化,并考察了方法的准确度与精密度。结果表明,将200μL的2×p H 5.6的缓冲液、200μL水或茶叶水提取液(茶水比1∶250,沸煮30 min)和400μL茚三酮溶液显色体系均匀混合,沸煮结束后立即用自来水充分冷却并加入4.8 m L去离子水,于570 nm处测定吸光值,所获得的结果稳定可靠,适宜作为茶叶中游离氨基酸总量的测定条件。     

柱前衍生反相液相色谱法测定饲料中氨基酸含量

采用邻苯二甲醛-氯甲酸芴甲酯(OPA-FMOC)柱前衍生反相高效液相色谱法测定饲料中17种氨基酸含量,以C18柱为分析柱,采用荧光检测器,25min内17种氨基酸得到了分离.氨基酸浓度在10-1000pmol/ul范围内,其峰面积与氨基酸浓度的线性相关系数均大于0.996,17种氨基酸的加标回收率在83.9%-109.8%范围内.试验结果表明本方法具有操作简单、灵敏度高,适用于饲料中氨基酸的测定.     

浙贝母组织培养技术的研究进展

综述了浙贝母组培技术的研究进展。并提出了目前浙贝母研究中存在的一些问题。     

诱导浙贝母多倍体的研究初报

浙贝母(Fritillaria thunbergii Miq)是二倍体植物(2n=24),本试验用不同浓度的秋水仙碱处理(野生浙贝×细叶种)F_1种子,结果表明:用0.20％秋水仙碱处理湿种子和干种子的加倍成功率最高,分别为33.62％和10.17％;变异株具有典型的多倍体特性,植株生长旺盛,叶片明显增厚,叶色深绿,叶片表皮气孔增大,根系肥大,细胞学观察结果表明;变异株的染色体数已加倍成2n=48。此外,对浙贝母倍性育种的前景进行了简略的讨论。     

浙贝母花及花粉中8种E族维生素的高效液相色谱-荧光分析

[目的]分析浙贝母花及其花粉中E族维生素的组成和含量,为浙贝母花资源的开发提供一定的科学依据。[方法]采用高效液相色谱—荧光分析法（HPLC-FLD）检测E族维生素的成分,检测条件如下：Agilent Zorbax RX-SIL（4.6 mm×150 mm,5μm）色谱柱,4.6mm×10 mm保护柱,含0.2%异丙醇和0.8%冰乙酸的正己烷溶液为流动相（1∶4,V/V）,流速为1.0 ml/min进行洗脱,柱温25℃,荧光最大激发波长292 nm,最大发射波长328 nm。[结果]首次建立了可同时测定8种维生素E成分的高效液相色谱—荧光分析法,8种成分在检测范围内均具有良好的线性关系,R2〉0.999 0,加样回收率大于98%。结果表明浙贝母花中共含有7种E族维生素成分,其中D-α-生育三烯酚含量最高,达181.606 mg/kg,而浙贝母花花粉中E族维生素成分的含量则偏低。[结论]浙贝母花和花粉中均含有较多的E族维生素成分,其中浙贝母花中所含的种类和数量多于花粉,可作为新的药食两用资源进一步开发。同时,本研究建立的HPLC-FLD方法快速高效,适于分析和测定E族维生素的含量。     

高温胁迫下2,4-表油菜素内酯对浙贝母花期耐热性及光合特性的影响

在盆栽条件下,以狭叶浙贝母(Fritillaria thunbergii Miq.)为材料,研究了浙贝母花期高温胁迫条件下表油菜素内酯(EBR)对浙贝母耐热性和光合特性的影响。结果表明,0.10、0.50 mg/L EBR能明显提高叶片中可溶性蛋白含量、SOD、POD和CAT活性,降低MDA含量,增强其抗氧化能力,缓解高温胁迫导致的膜质过氧化伤害;同时,EBR提高了叶片叶绿素含量、Pn、Gs和Tr,从而提高了高温胁迫下浙贝母植株的光合作用;然而EBR并不能提高其Pro及可溶性糖含量,对叶片中类胡萝卜素及胞间CO2浓度(Ci)影响差异不大。结果表明,EBR通过提高高温胁迫下浙贝母叶片可溶性蛋白及叶绿素含量、抗氧化酶活性,来降低体内活性氧水平,维持较高的光合速率,以0.50 mg/L EBR效果最好。     

浙贝母低温解除休眠过程中营养类物质的变化

为了探讨浙贝母低温解除休眠的生理机制,设置不同的低温(5℃)处理时间,测定浙贝母鳞茎的生理生化指标。结果显示:经低温处理的鳞茎可溶性糖、可溶性蛋白含量和淀粉酶活性呈显著变化,且显著高于对照组。随着低温的积累,可溶性糖、可溶性蛋白质含量和淀粉酶活性都呈一定的上升趋势。低温处理30~45 d是鳞茎内物质变化最活跃的时期。     

提取方法与部位对浙贝母基因组DNA提取质量的影响

探讨了改良CTAB法、SDS法、高盐低pH法和试剂盒法对浙贝母(Fritillaria thunbergii Miq.)基因组DNA的提取效果.综合比较了各方法提取的DNA浓度、纯度、完整性,结果表明高盐低pH法是比较适合浙贝母新鲜叶片基因组DNA提取的方法.比较了分别以叶片和鳞茎为材料提取的DNA质量,发现以新鲜叶片...     

浙贝母鳞茎酚类物质含量及相关酶活性与休眠解除的关系

[目的]探讨浙贝母鳞茎中酚类物质及相关酶活性与休眠解除的关系。[方法]将浙贝母鳞茎分别在4和10℃条件下保湿贮藏至75 d,贮藏过程中定期取样测定鳞茎各部位酚类物质含量、苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性和多酚氧化酶(PPO)活性,同时比较了发芽鳞茎与休眠鳞茎中酚类物质含量和PAL与PPO活性的差异。[结果]低温解除休眠过程中,鳞茎及芽内酚类物质含量均呈降低趋势;10℃处理30～45 d和4℃处理45～60 d是酚类物质减少、解除休眠的关键时期;浙贝母各部位酚类物质含量与其PPO活性均呈显著负相关;顶芽中酚类物质含量与PAL活性呈显著正相关;鳞片中酚类物质含量与PAL活性没有明显的相关性。[结论]酚类物质与浙贝母鳞茎休眠有一定相关性,酚类物质含量下降是低温处理解除浙贝母鳞茎休眠的生理机制之一。     

不同温度对浙贝母三种抗逆性酶的影响

浙贝母为百合科多年生的草本植物,具有很高的药用经济价值,而种植中冷害是其生长的一大危害.采用人工控温的方法,将培养于不同温度梯度下的浙贝母植株在常温下恢复一段时间后,测定其叶片中POD、CAT、SOD 3种抗逆性酶的活性.结果表明,浙贝母中3种抗逆性酶的活性因受到温度的影响产生了一定的变化,恢复7 d与14 d后所测得的3种抗逆性酶的活性也具有一定的变化,但基本符合温度骤变跨度越大、浙贝母恢复越差这一现象;也说明浙贝母自身在各种温度条件下具有一定的恢复性,但温度骤变对其生理代谢有危害.     

十种含浙贝母中成药中的二氧化硫残留量分析

采用《中国药典》2015年版四部通则2331二氧化硫残留量测定法第一法对10种含浙贝母(Fritillaria thunbergii)中成药中的二氧化硫残留量进行测定和分析。结果表明,有2个厂家的2种中成药的二氧化硫超标,合格率为86.7%。     

长蕊石头花的营养成分及氨基酸分析

分析了长蕊石头花(Gypsophila oldhamiana Miq.)嫩叶的总蛋白、粗脂肪、水分、灰分等基本营养成分以及6种矿质元素含量、各种氨基酸含量和比例,结果表明该植物P、Ca、Mg、K、Mn、Se含量高,分别为556.10、5 278.73、1 691.58、2 730.85、57.13、1.11 mg/kg;氨基酸种类丰富,比例合理(E/T为43.3%,E/N为76.5%),优于国际卫生组织推荐的标准(E/T为40.0%,E/N为60.0%)。表明该植物为矿质元素及氨基酸营养平衡的优质食物源,可用于食品和保健品的开发。