正常鲤外周血白细胞cDNA文库的构建

随着水产养殖业的发展,与鱼病防治紧密相关的鱼类免疫机制的研究越来越显示出其重要的理论与应用价值。鱼类的免疫系统虽不及哺乳动物发达,但其外周血白细胞已具有类似T、B淋巴细胞的分类,是机体体液免疫和细胞免疫的重要组成部分[1,2],但目前人们对鱼类免疫应答调控的机制     

花羔红点鲑cDNA文库的构建

以花羔红点鲑为研究对象,从肝、肾和肌肉中提取总RNA,进一步纯化出mRNA,反转录成cD-NA,构建其cDNA文库,为进行遗传基因的研究奠定基础,同时挽救和保存濒危冷水性鱼类资源花羔红点鲑的遗传信息。     

浅色黄姑鱼脑垂体cDNA文库的构建

以浅色黄姑鱼脑垂体为材料,应用SMART~(TM) cDNA library construction技术,构建以真核表达载体pcD- NA3．1( )为基础的浅色黄姑鱼cDNA文库。利用含Sfi I B酶切位点的oligo(dT)引物合成cDNA第一链,利用含Sfi I A酶切位点的SMART核苷酸作为cDNA第一链在mRNA5′端延伸出去的模板,采用LD PCR引物合成双链cDNA,双链cDNA用Sfi I酶切和过柱分级分离后,与引入Sfi I酶切位点的pcDNA3．1( )-Sfi I载体进行连接,转化大肠杆菌TOP10感受态细胞,构建成脑垂体全长cDNA文库。经过质量鉴定,得到的原始cDNA文库含有约1×10~5个重组子,重组率为90%,插入cDNA片段长度范围约为0．4～3kb。研究为深入开展浅色黄姑鱼的生长发育相关基因的研究奠定了良好的基础。     

绿色巴夫藻cDNA文库的构建及EST序列分析

将绿色巴夫藻(Pavlova viridis)培养液逐种加入氨苄青霉素、硫酸庆大霉素、硫酸阿米卡星3种抗生素处理,经检验后无杂菌污染。以该藻种为实验材料,以λTriplEx2为载体,利用SMART技术构建其cDNA文库。经测定文库滴度为6×106pfu/mL,重组率为98%。利用PCR方法检测cDNA文库插入DNA片段的大小,其长度为0.5~2 kb,表明该文库达到建库要求,可用来筛选低丰度mRNA的基因克隆。对cDNA文库中的阳性克隆进行随机PCR扩增,挑选插入DNA片段较大的克隆,进行5’末端单向序列测定,测序结果与NCBI数据库进行BLAST比对,获得了200个有研究价值的EST序列和cDNA克隆,为进一步研究和开发绿色巴夫藻的功能基因奠定了基础。     

斜带石斑白细胞cDNA文库的构建

用Tripure试剂盒提取斜带石斑白细胞总RNA,反转录合成第一链cDNA,进行长距离PCR,蛋白酶K消化,Sfi I酶切,通过CHROMASPIN-400柱,回收大于500bp的cDNA,与λTripIEx2载体连接,体外包装后构建了斜带石斑白细胞的cDNA文库.库容1.65×1.06,重组频率82%,扩增后滴度7.5×109pfu·mL-1.插入片断长度500～2300bp,最多的是在750～1000bp范围.本文库可作为筛选斜带石斑细胞因子基因的重要资源.     

[03]剑尾鱼肝脏cDNA文库的构建

以暴露于相似文献   

栉孔扇贝急性病毒性坏死症病毒cDNA文库的构建及部分序列分析

急性病毒性坏死症病毒（Acute Virus Necrobiotic Virus,AVNV）已被证实是一种对养殖栉孔扇贝（Chlamys farreri）危害极大的致病病原.本研究应用基因克隆技术对AVNV基因组进行cDNA合成、克隆,并对部分克隆进行序列分析.采用差速和蔗糖密度梯度离心法,分离纯化AVNV.用Trizol试剂抽提病毒RNA,采用随机引物和Oligo（dT）双引物法,SuperScriptⅡ反转录酶合成cDNA,并克隆于pUC118质粒上,利用蓝白斑筛选阳性克隆子,PCR法快速鉴定重组质粒.经筛选得到2个阳性克隆23^#、52^#,插入片段大小约为1200 bp和800 bp.测序结果与GenBank的比对分析显示,尚未有类似的序列报道,提示该病毒可能为一种新发现的病毒.[中国水产科学,2006,13（3）：421-425]     

鲤脑组织cDNA文库的构建及脑室管膜素基因鉴定

用Gubler-Hoffman法构建了低温下鲤(Cyprinus carpio Linnaeus)脑组织cDNA文库,经测定库容量为5.7×105 CFU/mL,文库的重组率接近95%,平均插入片段长度约为1.5 kb,符合文库保存和筛选实验的要求.同时,根据鲤与低温相关消减cDNA文库中低温下特异表达基因片段序列,设计PCR引物在此cDNA文库中进行PCR检测和序列测定,使用BLAST软件将测序的10个cDNA序列同GenBank等数据库进行比对,结果显示8个阳性克隆有相关同源性,2个克隆为功能未知的基因,全长率近75%;以上结果说明本实验所构建的cDNA文库质量较高,可作为筛选与鲤低温性状相关的功能基因的重要资源.同时对其中一个与低温相关的基因脑室管膜素基因构建了表达载体,为进一步验证该基因在鱼类低温适应中所发挥的作用及其作用机理奠定了基础.     

水泥池养殖香鱼性腺发育的观察

对水泥池养殖的香鱼卵巢、精巢发育做组织学观察,并与洄游型、陆封型香鱼的性腺发育做比较:养殖香鱼卵母细胞的结构和洄游型香鱼、陆封型香鱼基本一致;受精孔和精孔细胞出现的时间早于洄游型香鱼和陆封型香鱼。养殖香鱼卵巢发育略早于野生香鱼,但发育速度比野生香鱼慢,尤其慢于陆封香鱼。精巢结构属叶型壶腹型结构。雄鱼发育成熟早于雌鱼,能自然排精。雌鱼不用激素诱导即可获得游离卵。     

Acoustic evaluation of the vertical distribution of dwarf ayu Plecoglossus altivelis altivelis in Lake Biwa

SUMMARY: The vertical distribution of dwarf ayu Plecoglossus altivelis altivelis in the pelagic waters of Lake Biwa was evaluated from June to September in 1995–97 from eight acoustic surveys using a quantitative echosounder. In each survey, echoes from a depth range of 3 m to the sea bottom were collected at a station every 2.7 s for 24 h together with measurements of vertical profiles of water temperature and chlorophyll-a. The ayu's echoes were identified using an underwater video camera. The ayu were observed near the maximum chlorophyll-a depth and above the thermocline. Their density was highest at depths of 4–11 m with 2–4 individuals/m ³ and was almost zero below 20 m. Echo signs were recorded as having a frequent duration of more than 1 h at night, whereas were of a shorter duration in the day. The fish stay in the epilimnion during the day without any clear vertical migration, but are distributed more uniformly at night. The advantages of remaining in the epilimnion are discussed in terms of food availability and predator avoidance.     

Complete mitochondrial DNA sequence of ayu Plecoglossus altivelis

SUMMARY: We determined the complete nucleotide sequence of the mitochondrial genome for ayu, Plecoglossus altivelis . Two large DNA fragments covering the entire genome were amplified using a long polymerase chain reaction (PCR) technique, and the products subsequently used as templates for PCR with 57 fish-versatile and five species-specific primers that amplify contiguous, overlapping segments of the entire genome. Direct sequencing of the PCR products demonstrated that the genome (16 537 bp) contained the same 37 mitochondrial genes (two ribosomal RNA, 22 transfer RNA, and 13 protein-coding genes) as those found in other vertebrates, with the gene order identical to that in typical vertebrates. A major non-coding region between the tRNA^Pro and tRNA^Phe genes (857 bp) was considered to be the control region (D-loop), as it has several conservative blocks that are characteristic to this region.     

香鱼常见病的预防与治疗

根据香鱼养殖中发现的常见病和防治经验,提出了预防香鱼鱼病发生的措施,以及针对有关鱼病,分析了病原、症状、流行情况和相应的治疗意见,为做好香鱼养殖的病害防治工作提供参考。     

浅析碧流河水库陆封型香鱼消亡原因及恢复措施

1982年碧流河水库建成后,其库内洄游型香鱼形成陆封型种群.现有的捕捞数据表明,1999年以来,碧流河水库香鱼资源量锐减,该种群极有可能在碧流河水库内消失.对碧流河水库陆封型香鱼消亡的原因进行了分析,并就恢复措施进行了探讨.认为陆封型香鱼柄息环境恶化、自身不利变异、敌害鱼类和竞争鱼类抑制作用以及人为活动的破坏导致了碧流河水库陆封型香鱼的消亡;针对上述问题,积极有效的措施是通过实施人工增殖放流、控制敌害鱼类和竞争鱼类数量加强对香鱼资源的恢复和保护.