柔嫩艾美耳球虫YZ株SO7基因的克隆与序列分析

对柔嫩艾美耳球虫(E im eria tenella)YZ株折光体SO 7基因进行克隆,并对其核苷酸及氨基酸进行序列分析。以纯化的发育7 h的E.tenella YZ株卵囊孢子提取的总RNA为模板,设计特异性引物,应用两步法RT-PCR技术扩增出SO 7基因特异性片段。将扩增出的片段插入pUCm-T载体,随机选择经蓝白斑筛选、PCR及酶切鉴定为阳性的两个克隆分别进行测序分析,并对结果进行验证。结果表明:两个阳性克隆所含插入片段的DNA序列完全一致,含全长为651个核苷酸的开放阅读框,富含AGC和CTG重复序列,编码区核苷酸与LS18株和B J株的同源性都为99.5%,与HB株同源性为99.4%,与GD株同源性为99.7%。其推测的氨基酸序列与LS18株和GD株的同源性都为99.1%,与B J和HB株同源性为98.6%。通过对其蛋白抗原性、表面可能性、亲水性、柔性区、二级结构等参数预测表明,YZ株核苷酸的变异未引起其蛋白主要特性和B细胞表位的变化。该结果为研制E.tenella的基因工程疫苗奠定了基础。     

柔嫩艾美耳球虫λMzp5-7重组抗原的免疫原性研究

用柔嫩艾美耳球虫子孢子表面蛋白在大肠杆菌中表达的重组抗原,分别于7、14、28日龄三次经肌肉注射菌体蛋白和口服工程活菌免疫海兰小公雏,采用间接ELISA法、流式细胞仪技术检测鸡体产生的免疫应答反应.结果口服工程活菌组的抗体产生水平以及细胞免疫水平均优于其它免疫组.表明λMzp5-7基因的表达产物可诱导鸡体产生一定的免疫反应.     

鸡柔嫩艾美耳球虫免疫保护性研究

鸡的球虫病是危害现代化养鸡业的重大疫病。柔嫩艾美耳球虫(E．tenella)是球虫病爆发中致病性最强的虫种之一，它由Tyzzer于1927年命名为Eimeria tenella的。它具有严格的寄生部位，主要在鸡的盲肠，通过裂殖体在盲肠上皮细胞中大量繁殖，破坏肠粘膜，引发肠管发炎和上皮细胞崩解，鸡表现为排血便，严重的导致死亡。年龄在10～40日龄左右的雏鸡最容易感染，受害严重，死亡率可达80％以     

柔嫩艾美耳球虫长春分离株对7种抗球虫药的抗药性研究

以AA肉仔鸡为试验材料,以最适抗球虫活性百分率(POAA)、病变记分减少率(RLS)、相对卵囊产量减少率(ROP)和抗球虫指数(ACI)为判定指标,检测了长春市柔嫩艾美耳球虫分离株对7种抗球虫药物的抗药性。结果表明:长春市柔嫩艾美耳球虫分离株对莫能菌素、妥曲珠利无抗药性,对尼卡巴嗪有轻度抗药性,对马杜霉素和地克珠利有中度抗药性,对氯羟吡啶和盐霉素有完全抗药性。     

一氧化氮（NO）在鸡感染柔嫩艾美球虫中的作用

在感染柔嫩艾美球虫 (Eimeriatenella)的雏鸡日粮中添加NO前体物L Arg或在饮水中添加iNOS抑制剂Dex ,探讨NO在鸡感染柔嫩艾美球虫过程中的作用。结果显示 ,未感染组鸡的血浆中NO水平无明显变化 ,感染组鸡则明显升高 ,第 6天达到峰值 (P <0 0 1或P <0 0 5 ) ;加喂L Arg组鸡与不添加的对照组NO水平基本一致 (P>0 0 5 ) ;添加Dex组鸡则明显高于不添加的对照组 (P <0 0 5 )。NO水平与卵囊感染数无相关性。加喂L Arg组鸡死亡率最低 ,增重明显 ,每克粪便卵囊数 (OPG)低 ,血粪堆数少 ,病变轻 ;而添加Dex的感染鸡 ,出现负增重和严重死亡。提示 :日粮中添加L Arg对感染球虫的鸡有明显的保护作用 ,而Dex的添加不但不能降低血浆中的NO水平 ,还使鸡对球虫的易感性增强。表明NO在球虫感染过程中可杀伤或抑制球虫 ,但NO生成过多会使宿主产生免疫病理效应而造成损伤     

柔嫩艾美耳球虫杨凌株SO7基因的克隆表达与保护性试验

【目的】克隆鸡柔嫩艾美耳球虫SO7基因并进行原核表达,检测表达产物的免疫原性,为鸡球虫基因疫苗的制备奠定基础。【方法】以纯化的柔嫩艾美耳球虫杨凌(Eimeria tenella YL)株孢子化卵囊的总RNA为模板,用RT-PCR方法扩增出E.tenella YL株的SO7基因,对其测序后进行序列分析。将SO7基因克隆到表达载体pET-32a中,构建pET-SO7重组质粒,并在大肠埃希菌BL21中诱导表达出重组蛋白,将重组蛋白纯化后免疫雏鸡,评价其免疫效果。【结果】鸡柔嫩艾美耳球虫SO7基因序列的开放阅读框(ORF)为651个碱基,共编码217个氨基酸。E.tenella YL株SO7基因与E.tenella LS18株、E.tenella BJ株、E.tenella GD株SO7基因ORF区序列相似性分别为99.1%,98.6%和99.1%,其氨基酸序列相似性分别为99.1%,98.6%和99.1%。SDS-PAGE分析表明,表达产物成功地表达出了分子质量为45ku的融合蛋白。各种抗球虫指标的测定结果显示,该蛋白对球虫感染鸡体具有一定的保护性。【结论】SO7基因具有很强的保守性,各虫株之间差异不大;重组蛋白具有一定的保护效果,适合用来制备基因疫苗。     

秦皇岛株柔嫩艾美耳球虫对7种常用抗球虫药的耐药性

【目的】研究秦皇岛株柔嫩艾美耳球虫对克球粉、氨丙啉、马杜霉素、瑞冠球、金三特、球敌和尼卡巴嗪7种抗球虫药的耐药性。【方法】试验设7个感染药物组、1个感染球虫卵囊不给药组(阳性组)和1个未感染球虫卵囊不给药组(阴性组),采用最适抗球虫活性百分率(POAA)、病变记分减少率(RLS)、相对卵囊产量(ROP)和抗球虫指数(ACI)综合评定秦皇岛株柔嫩艾美耳球虫对以上7种抗球虫药物的抗药性。【结果】秦皇岛株柔嫩艾美耳球虫对7种抗球虫药物均产生不同程度的抗药性,其中对马杜霉素、尼卡巴嗪和氨丙啉呈现轻度抗药,对克球粉、瑞冠球和金三特呈现中度抗药,对球敌呈现完全抗药性。【结论】目前在秦皇岛地区可合理使用马杜霉素、尼卡巴嗪和氨丙啉,对克球粉、瑞冠球和金三特应慎用,对球敌应减少或暂停使用。     

杨凌地区柔嫩艾美耳球虫早熟株对雏鸡免疫效果的研究

用杨凌地区鸡柔嫩艾美耳球虫早熟株和母株分别免疫鸡,对免疫前后鸡体的平均增重、饲料转化率、盲肠病变记分和卵囊抑制率等指标进行了分析。结果发现,早熟株免疫组对球虫再攻击时的卵囊减少率分别为77.3%和67.6%,高于母株免疫组的41.7%和57.1%,且对同种同株球虫攻虫时的保护力优于同种不同株球虫。经2次免疫后,早熟株免疫组的鸡平均增重、饲料转化率均高于母株免疫组和对照组,而盲肠病变记分小于后者;早熟株免疫组经球虫攻击后卵囊的繁殖量明显减少,且卵囊抑制率均在91%以上。     

柔嫩艾美耳球虫感染对鸡肠炎沙门氏菌感染的增强作用

本试验对柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)感染对肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis)感染的影响进行了研究。实验结果表明:肠炎沙门氏菌和柔嫩艾美耳球虫的相互作用显著;在球虫感染后第4,10,14d 时,柔嫩艾美耳虫球虫感染可显著地(P<0.01)增加盲肠内容物中肠炎沙门氏菌数量。肠炎沙门氏菌和柔嫩艾美耳球虫之间协同作用与肠炎沙门氏菌的感染量大小和感染后的时间显著相关(P<0.01)。柔嫩艾美耳球虫感染并没有显著地提高肝脏、脾脏中肠炎沙门氏菌的阳性率。不同感染量的肠炎沙门氏菌感染对鸡盲肠的球虫病变记分显著影响.     

柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)BJ株SO7基因的克隆和序列分析

对柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)BJ 株 SO7基因进行了克隆和测序分析。以纯化的 E.tenella BJ 株7h 孢子化卵囊的总 RNA 为模板,应用 RNA 反转录酶(M-MLV)合成 cDNA,再用 Taq DNA 聚合酶进行PCR 扩增出 BJ 株 SO7基因.用常规基因克隆方法把 BJ 株 SO7基因插入 pGEM-T 克隆载体,选取正方向插入子的一个阳性克隆进行酶切分析及插入片段的全序列测序分析。结果表明:该序列全长862个核苷酸,有一个开放性读框(65～713nt),可编码216个氨基酸(22.4kD)。SO7-BJ 与国外株 SO7比较,同源性为99%,突变的8个核苷酸中,4个为有义突变.开放性读框中有仅2个核苷酸突变,其中1个为有义突变,使推测氨基酸 Cly 变为 Cys。     

柔嫩艾美耳球虫（E.tenella）BJ株SO7基因的克隆和序列分析

对柔嫩艾美耳球虫（E.tenella）BJ株SO7基因进行了克隆和测序分析。以纯化的E.tenella BJ 株7h孢子化卵囊的总RNA为模板,应用RNA反转录酶（M-MLV）合成Cdna,再用Taq DNA聚合酶进行PCR扩增出BJ株SO7基因。用常规基因克隆方法把BJ株SO7基因插入Pgem-T克隆载体,选取正方向插入子的一个阳性克隆进行酶切分析及插入片段的全序列测序分析。结果表明：该序列全长862个核苷酸,有一个开放性读框（65～713nt）,可编码216个氨基酸（22.4ku）。SO7-BJ与国外株SO7比较,同源性为99%,突变的8个核苷酸中,4个为有义突变。开放性读框中仅有2个核苷酸突变,其中1个为有义突变,使推测氨基酸Cly变为Cys。     

鸡柔嫩艾美耳球虫病流行病学研究进展

从球虫的感染、拥挤效应、营养学因素、宿主免疫力、应激因素、抗球虫药以及与其他疾病混合感染等几个方面 ,概述了影响鸡柔嫩艾美耳球虫病发生和流行的各种因素 ,旨在为球虫病的防治提供科学依据。     

柔嫩艾美耳球虫子孢子抗原的制备

[目的]为进一步研究柔嫩艾美耳球虫（E.tenella）的单克隆抗体奠定基础。[方法]给肉鸡雏接种E．tenella纯种孢子化卵囊：第5～10天收集鸡的粪便并标记、粗提,经卵囊孢子化、纯化孢予化的卵囊、计数卵囊后,最终制备出子孢子抗原。[结果]该方法制备E．tenella子孢子抗原较其他方法简单易行,不需太多专门仪器和培养液,一般实验室均可进行,效果良好。但所用时间较长。[结论]该试验成功分离提纯出了鸡的E．tenella卵囊,并获得了蛋白浓度较高的抗原,为单克隆抗体的制备提供了有力保障。     

柔嫩艾美耳球虫F2杂交株Rhomboid基因在大肠杆菌中的表达

根据ET-Rhomboid基因开放阅读框,插入有利于表达的酶切位点设计引物,以虫体DNA为模板扩增并克隆了ET-Rhomboid基因,并将该基因与PET-28a(+)质粒载体连接,构建成了原核表达载体PET-ET-Rhomboid.将构建好的表达质粒转入大肠杆菌DE3,经IFTG诱导表达后,用SDS-PAGE检测表达产物,用蛋白印迹(Western blotting)检测其反应原性.结果表明:含重组质粒的工程菌有明显的表达产物为31 kD的融合蛋白,与推测的融合蛋白的分子量吻合,蛋白印迹检测具有反应原性.     

抗球虫药联合应用的研究

近年来,球虫的抗药性巳成为一个非常严重的问题,越来越多的抗球虫药(包括聚醚类和化学类药物)已达不到早期的效果.本实验采用联合用药的方法来避免抗药性的产生,结果令人满意.一些单独使用效果很差的聚醚类药物和化学类药物,联合使用时可以获得很好的抗球虫效果.如马杜拉霉素和氯吡醇或尼卡巴嚎、球痢灵和洛克沙生合并使用,有非常好的预防效果。磺胺间甲氧嘧啶+DVD 合并使用有非常好的治疗效果.这说明联合用药是防止球虫抗药性产生的有效措施之一。     

鸡球虫微线基因mic2-7h在大肠杆菌中的表达

本文在大肠杆菌中表达了鸡球虫孢子化7h微线基因mic2-7h.质粒pmic2-7h经AatⅡ酶切线化,用Sl核酸酶切平DNA分子,再用NotⅠ切出mic2-7h片段,插入表达质粒pET28-a(+)的6xHis下游NheⅠ处构建成表达载体pET28-mic2-7h.IPTG诱导表达后,经SDS-PAGE分析表明表达的重组蛋白大小为45kD,约比理论推算值(37kD)小,但Western-blotting杂交表明重组蛋白能与兔抗Etmic-2抗体反应.这进一步说明了Mic2-7h可能是Etmic-2的一种蛋白异形体.     

柔嫩艾美耳球虫野外分离株对4种抗球虫药的耐药性检测

该试验采集安庆、肥东及巢湖3个地区的3株盲肠球虫,进行柔嫩艾美耳球虫(E.tellena)单卵囊的分离,采用鸡体实验法对癸氧喹酯、尼卡巴嗪、球痢灵和磺胺氯吡嗪钠进行耐药性检测,以抗球虫指数(ACI)、病变记分减少率(RLS)、相对盲肠卵囊产量(ROP)和最适抗球虫活性百分率(POAA)4项指标综合判定.结果表明,安庆株、肥东株及巢湖株均对癸氧喹酯敏感,对尼卡巴嗪均完全产生耐药;安庆株对球痢灵中度耐药,对磺胺氯吡嗪钠重度耐药;肥东株对球痢灵轻度耐药,对磺胺氯吡嗪钠重度耐药;巢湖株对球痢灵重度耐药,对磺胺氯吡嗪钠完全耐药.     

不同地理株鸡柔嫩艾美耳球虫致病性的研究

采用盲肠病变记分、每克粪便含有的卵囊数、粪便记分、肉鸡增重等检查方法对来自山东、吉林、黑龙江、北京4个不同地区的鸡柔嫩艾美耳球虫的致病性进行了研究。将上述各株球虫分别接种10日龄AA肉鸡，并于接种后5d开始进行各项指标的检测。结果表明：山东株(S株)的致病性最强，黑龙江株(H株)和吉林株(J株)的致病性次之，北京株(B株)最弱。