高良姜中具有神经保护作用的化学成分研究

【目的】研究高良姜根茎的化学成分及其神经保护作用。【方法】采用正、反相色谱分离纯化高良姜化学成分,运用核磁及质谱等技术鉴定其结构;采用CCK-8法建立H₂O₂损伤SH-SY5Y细胞模型,筛选高良姜化学成分的神经保护作用。【结果】从高良姜根茎中分离得到22种化合物,分别鉴定为山柰素-4′-甲醚(1)、高良姜素(2)、山柰酚(3)、3,4′-甲氧基-3′,5,7-三羟基黄酮(4)、山柰酚-3-甲醚(5)、5,7,3′,4′-四甲氧基儿茶素(6)、二氢山柰酚(7)、柚皮素(8)、乔松素(9)、环氧松属素查尔酮(10)、(4a S, 7S)-7-hydroxy-1,4a-dimethyl-7-(prop-1-en-2-yl)-4,4a,5,6,7,8-hexahydronaphthalen-2(3H)-one (11)、4-异丙基-1,6-二甲基萘(12)、curcuminol D(13)、补骨脂酚(14)、(3R,4S)-4羟基蜂蜜曲霉素(15)、相对-(3R,3′S,4R,4′S)-3,3′,4,4′-四氢-6,6′-二甲氧基(3,3′-双-2H...     

多巴胺对PC12细胞活性的影响及三七皂苷-Rg1的保护作用

采用细胞化学及生物化学方法研究了三七皂苷-Rg1时多巴胺引起的PC12细胞损伤的保护作用。结果表明：三七皂苷-Rg1对PCl2细胞损伤有明显的改善作用，可显著提高PC12细胞的增殖活性。同时降低培养上清中乳酸脱氢酶的释放量夏细胞内凋亡蛋白Bax的表达，这提示三七皂苷-Rg1对神经系统由于多巴胺氧化引起的损伤有明显的治疗和保护作用。     

药用真菌脂溶性提取物对PC12细胞氧化应激损伤保护作用的研究

利用PCI2细胞氧化应激损伤模型,对6种药用真菌的49个脂溶性提取物进行筛选,研究表明,灵芝等药用真菌均具有氧化应激保护作用,其中桑黄和北虫草活性显著.29个样品在5～150 mg/L对PC12氧化应激损伤的保护作用呈剂量依赖性增长.药用真菌脂溶性提取物对PC12细胞氧化应激损伤保护作用与药用真菌的种类密切相关,并且药用真菌的不同菌株对PC12细胞氧化应激损伤保护作用也是不同的.     

金耳子实体不同提取物的抗氧化性和对PC12细胞氧化损伤的保护作用

采用不同极性的溶剂对金耳子实体进行连续提取分离,利用化学发光法和H2O2诱导PC12细胞氧化损伤保护模型,对提取得到的氯仿相、乙酸乙酯相、乙醇相等部位进行体外抗氧化活性和氧化损伤保护作用的测定.结果表明:氯仿相具有较强的抗氧化活性,三种提取部位对H2O2自由基的清除作用均高于对超氧自由基的清除作用;乙醇相对由H2O2诱导的PC12细胞氧化损伤的保护作用最强,且呈现明显的浓度依赖性.金耳子实体的氯仿相是其抗氧化活性的主要有效部位,乙醇相是保护PC12细胞氧化损伤的主要有效部位.     

细胞松弛素H对MPP~+诱导PC12细胞凋亡的保护作用

以500μmol·L-1甲基苯基吡啶离子(MPP+)制备帕金森病(PD)细胞模型,MTT法测定细胞存活率,比色法测定LDH释放量;AO/EB染色法、透射电镜法观察细胞凋亡形态;流式细胞仪分析细胞凋亡比率并测定ROS含量,探讨青皮内生菌(Phomopsis sp.)固体发酵产物细胞松弛素H(CyH)对MPP+诱导的PC12细胞凋亡的保护作用。结果表明:①CyH与MPP+同时加药(0.05~0.20μmol·L-1)、先加药(0.002 5~0.010 0μmol·L-1)和后加药(0.01~0.20μmol·L-1)均能使PC12细胞存活率显著增加,LDH释放率显著下降;②流式细胞仪测定表明CyH能够降低MPP+诱导的PC12细胞凋亡率(P0.001);透射电镜和AO/EB染色也显示细胞形态的改善;③CyH能显著抑制MPP+升高ROS含量的作用(P0.05)。说明CyH能抑制MPP+诱导的PC12细胞损伤和凋亡,这可能与其减少细胞内ROS含量有关。     

鹿骨胶水解物抗氧化活性及对H2O2损伤PC12细胞保护作用的研究

[目的]研究鹿骨胶水解物的抗氧化活性及其对H_2O_2损伤PC12细胞的保护作用。[方法]采用热水抽提法对脱脂脱钙的鹿骨进行蛋白提取,用胃蛋白酶和胰蛋白酶进行双酶酶解得鹿骨胶水解物。以DPPH、·OH自由基清除能力测定鹿骨胶水解物的体外抗氧化活性。利用H_2O_2损伤PC12细胞的模型,探究鹿骨胶水解物(HDBG)对氧化损伤PC12细胞的保护作用。[结果]鹿骨胶水解物具有良好的抗氧化活性,对DPPH自由基和·OH均有一定的清除能力,IC_(50)值分别为10.05和4.76 mg/mL。鹿骨胶水解物对正常PC12具有明显的增殖作用,对H_2O_2诱导损伤的PC12细胞具有显著的保护作用,且呈剂量依赖关系。在250、750和1 500μg/mL时,细胞活力分别53.79%、73.16%和82.43%。[结论]鹿骨胶水解物具有良好的抗氧化活性,对H_2O_2损伤PC12细胞具有保护作用。     

神经生长因子诱导PC12细胞对细胞周期的影响

目的:观察神经生长因子(NGF)诱导PC 12细胞周期的变化,以建立体外神经元样细胞周期的研究模型。方法:用流式细胞仪检测不同质量浓度NGF诱导及50μg/L NGF诱导不同天数PC 12细胞的细胞周期。结果:(1)不同质量浓度NGF诱导PC 12细胞7d,细胞百分比G0/G1期升高,S和G2/M期降低,25,50,100μg/L NGF诱导组与阴性对照组,50与25,100μg/L NGF诱导组比较,差异有显著性(P<0.01或P<0.05);(2)50μg/L NGF诱导PC 12细胞不同天数的细胞百分比,G0/G1期从诱导第1天始升高,至7d达到最高,9d又有下降,S期从诱导第1天开始降低,至7d最低,9d又有上升,诱导1,3,5,7,9d与基础组比较,差异有显著性(P<0.05或P<0.01);G2/M期从诱导3d降低,至7d降至最低,9d又有升高,诱导3,5,7,9d与基础组比较,P<0.01。G0/G1期、S期、G2/M期细胞百分比,诱导9d与诱导7d比较,差异有显著性(P均<0.01)。结论:未经NGF诱导的PC 12细胞具有有丝分裂能力,经NGF诱导的PC 12细胞逐渐减少增殖,大部分细胞停滞在G0/G1期,趋向于神经元样分化,50μg/L NGF诱导7d的PC 12细胞可用于神经元样细胞周期模型的实验研究。     

高良姜提取物的降血糖活性

利用α-葡萄糖苷酶抑制活性筛选对海南产高良姜的不同提取部位及其主要化学成分进行降血糖活性测试。结果表明,高良姜的根茎、花、果实和茎叶的乙醇提取物及其主要成分高良姜素、山奈素、异鼠李素和槲皮素对α-葡萄糖苷酶的抑制活性显著高于阳性对照药阿卡波糖。     

高良姜不同成分对人肝癌HepG2细胞的抗氧化损伤活性

目的探讨高良姜二苯基庚烷类、黄酮类、挥发油类及高良姜醇提物（组分Ⅰ-Ⅳ）对人肝癌HepG2细胞过氧化损伤的保护作用。方法采用减压硅胶柱层析（VLC）法对高良姜提取物进行分离;采用薄层色谱法（TLC）结合高效液相-质谱联用（HPLC-MS）法对各组分进行归属与鉴定;建立H2O2诱导HepG2细胞氧化损伤模型,采用MTT法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡。结果组分Ⅰ和模型组的细胞存活率分别为71.9%、50.3%,两组的差异具有显著性（P〈0.05）;与模型组比较,组分Ⅰ和Ⅱ均可降低细胞凋亡率（P〈0.05）,其中组分Ⅰ更明显。结论高良姜组分Ⅰ和组分Ⅱ均有一定的抗氧化活性,其中组分Ⅰ更明显。     

高良姜挥发油的提取工艺研究

研究了酶法、超声波辅助水蒸气蒸馏法提取高良姜中的挥发油,对超声时间、水浴温度、酶作用时间、酶用量进行单因素实验分析,在此基础上做正交实验。结果表明:最佳非正交实验条件是超声时间45min,水浴温度50℃,酶作用时间60min,酶的用量0.4%。表明各因素对1,8-桉油素提取率影响为:纤维素酶量>水浴温度>超声时间>酶作用时间。试验表明添加纤维素酶、辅助超声技术可以有效提高挥发油的提取率。     

高良姜多糖对酪氨酸酶抑制作用的研究

[目的]研究高良姜多糖对酪氨酸酶活性的抑制作用。[方法]以新鲜的高良姜和马铃薯为原料,通过比色法、色差仪法、Photoshop图像灰度值分析等测定高良姜多糖对马铃薯酪氨酸酶活性的抑制率,以及对马铃薯匀浆褐变度和反应体系颜色值变化的影响。[结果]试验得出,高良姜多糖对酪氨酸酶的活力有显著的抑制作用,其IC50为0.315 mg/m L,能显著降低反应体系的褐变度。[结论]高良姜多糖具有较强的酪氨酸酶抑制活性,可望用于美白护肤、果汁护色、鲜切果蔬保鲜等领域,值得进一步研究。     

高良姜花和果实的化学成分及生物活性

采用高效液相色谱法(HPLC)测定海南省不同产地的高良姜花和果实乙醇提取物中槲皮素、异鼠李素、高良姜素和山奈素的含量,通过滤纸片琼脂扩散法测定其对白色念珠菌、金黄色葡萄球菌和茄科雷尔氏菌的抑制活性。结果表明,高良姜花中只含有槲皮素,果实中含有槲皮素、高良姜素、山奈素;高良姜花和果的提取物对金黄色葡萄球菌、白色念珠菌和茄科雷尔氏菌均有一定的生长抑制活性。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇对PC12细胞自噬的影响

【目的】研究脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)对PC12细胞自噬的影响。【方法】以不同质量浓度(0(CK),125,250,500,1 000和2 000ng/mL)的DON处理PC12细胞24h后,采用倒置显微镜、透射电镜、免疫荧光、荧光定量PCR、Western-blot等技术,研究DON对PC12细胞形态和超微结构、LC3聚点率及自噬相关基因classⅢPI3 K、Beclin-1、P62 mRNA和蛋白LC3Ⅱ、P62、classⅢPI3K表达的影响。【结果】不同质量浓度的DON均可诱导PC12细胞自噬,各试验组细胞自噬水平均高于对照组(CK),并随着DON质量浓度的增大而先增加后下降,在DON质量浓度为1 000ng/mL时达到峰值。与对照组相比,各试验组classⅢPI3 K mRNA和Beclin-1mRNA表达水平均极显著增高(P0.01),P62mRNA表达水平随着DON质量浓度的增加总体呈下降趋势,差异达显著(P0.05)或极显著(P0.01)水平。Western-blot结果显示,LC3Ⅱ蛋白表达量在DON质量浓度为1 000ng/mL时最高,与对照组相比,250~2 000ng/mL DON处理组的LC3Ⅱ蛋白表达量显著(P0.05)或极显著(P0.01)增加;500~2 000ng/mL DON处理组classⅢPI3K蛋白表达量较对照组显著(P0.05)或极显著(P0.01)增加,其中以1 000ng/mL DON处理组表达量最高;与对照组相比,不同质量浓度DON处理组P62蛋白表达量均极显著降低(P0.01),其中以1 000ng/mL DON处理组最低。【结论】DON能够诱导PC12细胞发生自噬,自噬相关基因classⅢPI3 K、Beclin-1、P62及蛋白LC3Ⅱ、P62、classⅢPI3K等参与了DON诱导PC12细胞自噬的调控。     

多巴胺对分化的PC12细胞par-4基因表达的影响

目的：观察多巴胺(dopamine，DA)对分化的PC12细胞par-4基因表达的影响。方法：PC12细胞采用终浓度分别为0，100，200，400μmol／L的DA处理24h后，用RT—PCR检测mRNA表达的变化和Western blot检测蛋白表达的变化。结果：随着DA剂量的增加．PC12细胞存活率降低凋亡明显增加．且par-4mRNA表达及蛋白表达亦增加。结论：在DA诱导PC12细胞凋亡过程中par-4可能起重要作用。     

高良姜中黄酮类化合物的提取及精制研究

[目的]探索提取高良姜中黄酮类化合物的最佳方法。[方法]通过单因素试验及正交试验确定乙醇浸提高良姜中黄酮类化合物的最佳提取条件,并利用双水相体系萃取精制黄酮类化合物。[结果]高良姜中黄酮类化合物提取工艺的最佳单因素水平为提取温度70℃,溶剂浓度40%,固液比1∶300,提取时间4 h。正交试验结果显示影响高良姜中黄酮类化合物提取的各因素的顺序为固液比>温度>提取时间>酶用量>乙醇浓度。最佳提取条件为固液比1∶450,温度80℃,提取时间5 h,酶用量3%,乙醇浓度50%。最佳双水相萃取条件为:PEG浓度24%,硫酸铵浓度12%,温度25℃,pH值7.00。[结论]试验结果可为高良姜中黄酮类化合物的提取分离及纯化提供技术参数。     

12批海南高良姜挥发油的GC-MS分析

比较了12批海南高良姜挥发油的GC-MS指纹图谱,对其中20个特征化合物进行了相似度评价。结果表明,海南省不同地区的高良姜品质相似。与相同生长年份和相同采收期的徐闻产高良姜进行比较,海南不同产地高良姜在挥发油得率及挥发油主要成分上与其无显著差异,而且两地的高良姜GC-MS指纹图谱的相似度为0.956。因此,海南产高良姜可替代徐闻产高良姜用于食品和香料。     

海南高良姜挥发油GC-MS指纹图谱分析

建立了海南产高良姜挥发油的GC-MS指纹图谱,对其中20个特征化合物进行了精密度、稳定性和重复性分析。结果表明,高良姜挥发油中检测到了110个成分,其中20个特征成分的精密度、稳定性和重复性良好。该方法简单可靠,可应用于高良姜的品质评价。