影响西瓜农杆菌介导的高效遗传转化效率的主要因子

以西瓜子叶为外植体材料,利用GUS染色瞬时表达方法研究农杆菌浓度,预培养、共培养时间,预培养条件以及添加乙酰丁酸酮(AS)对西瓜转化效率的影响,优化西瓜遗传转化参数,初步建立以MS BAP 2.0mg/L IAA 0.2 mg/L Hyg 10 mg/L Cef 300 mg/L为分化培养基,黑暗条件下预培养2 d,使用OD为0.3的菌液侵染10 min后,黑暗条件下共培养3 d,然后在25℃,光周期为16 h的条件下筛选抗性芽的遗传转化体系。     

板栗胚性愈伤组织对遗传霉素敏感性的研究

[目的]探究中国板栗主栽品种'燕山红栗'胚性愈伤组织对遗传霉素的耐受力.[方法]以'燕山红栗'(Castanea mollissima Blume'Yanshanhongli')幼胚胚尖诱导出的两种不同状态的胚性愈伤组织为材料,在含有不同质量浓度遗传霉素的固体和液体扩繁培养基上培养,观察其生长状况,并统计其死亡率和鲜质量变化量.[结果]在固体培养基上,遗传霉素对两种胚性愈伤组织的致死质量浓度分别为130 mg/L和80 mg/L;液体悬浮培养中,遗传霉素对两种胚性愈伤组织的致死质量浓度分别为60 mg/L和30 mg/L.[结论]确定在固体和液体悬浮培养条件下,两种板栗胚性愈伤组织对遗传霉素的耐受质量浓度,为板栗转基因过程中遗传霉素的使用提供依据.     

转基因柑桔Kan~r抗性芽的生根研究

以根癌农杆菌感染的锦橙Kanr 抗性芽为试材 ,利用改良MS液体培养基湿润滤纸桥培养进行生根研究 ,结果表明 :2 5 0mg/L的IBA处理抗性芽基部 2 0min后 ,培养在含蔗糖浓度为 30g/L的改良MS液体培养基湿润滤纸桥上 ,30天后 ,生根率可以达到 78% ,平均根数 1.7条 ,平均根长 3.5 3cm ,提高了转基因柑桔的实际成株率?更多还原     

易感线虫番茄品种Rutgers遗传转化体系的建立

【目的】旨在建立Rutgers番茄品种的遗传转化体系。【方法】以易感线虫番茄品种Rutgers为实验材料,采用农杆菌介导法,对无菌苗的苗龄、筛选培养基中Hyg的浓度大小、不定芽诱导培养基的激素配比和生根培养基4个方面进行优化,从而建立Rutgers品种的遗传转化体系。【结果】选择9～11 d的无菌苗的叶片分化愈伤组织的效果最好,筛选培养基中Hyg的浓度为10 mg/L时可以有效的筛选转基因的抗性芽,愈伤组织诱导不定芽培养基中最佳激素配比为6-BA 2 mg/L+IAA 0.1 mg/L。以1/2MS添加不同浓度IBA(0.05、0.1、0.15、0.20 mg/L)进行生根比较,再生芽在1/2 MS+IBA 0.1 mg/L生根培养基上生根最好。【结论】首次建立了Rutgers番茄品种的遗传转化体系,为番茄的抗根结线虫转基因育种打下基础。     

转基因柑桔Kan^抗性芽的生根研究

以根癌农杆菌感染的锦登Kan^r抗性芽为试材,利用改良MS液体培养基湿润滤纸桥培养进行生根研究,结果表明：250mg/L的IBA处理抗性芽基部20min后,培养在含蔗糖浓度为30g/L的改良MS液体培养基湿润滤纸桥上,30天后,生根率可以达到78％,平均根数1．7条,平均根长3．53cm,提高了转基因柑桔的实际成株率。     

植物抗病基因snc1在超级杂交稻父本0293中的遗传转化

以超级杂交稻父本0293为材料,利用农杆菌介导基因转化法研究植物抗病基因snc1在超级杂交稻父本中的遗传转化。结果表明:0293成熟胚愈伤组织的最适诱导培养基为NMB诱导培养基,2,4–D和6–BA的最适质量浓度分别为3.0和0.2 mg/L;以LB液体培养的农杆菌转化能力最强,抽真空转化方式获得的抗性愈伤率较高,最适共培养时间为2 d;麦芽糖为抗性愈伤组织分化的最适碳源,NMB+KT 0.4 mg/L+6–BA 2.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L+IAA 0.5 mg/L为较适合的分化培养基;通过优化农杆菌介导的遗传转化条件,共获得6株含目的基因snc1的转化植株。     

不同处理方法对金花茶组培苗不定根发生的影响

[目的]筛选金花茶组培苗的最适生根培养条件。[方法]以金花茶组培苗为材料,研究不同激素处理、不同生根培养基、不同形态MW培养基对金花茶组培苗生根的影响。[结果]就促生根激素而言,500 mg/L IBA溶液浸泡处理效果较好,其生根率达82.5%,显著优于NAA;就基础培养基而言,MW培养基的生根效果更好,其生根率是1/2MS培养基的1.5倍;固体培养和滤纸桥液体培养同样都能诱导不定根产生,且生根率相当,不定根都较发达,侧根多。[结论]将金花茶无菌苗基部浸泡于500 mg/L IBA溶液后,转接于MW固体培养基进行生根培养,效果最好。     

葡萄叶盘法基因转化中抗生素种类和浓度的筛选

本研究以优良无核葡萄品种莫利莎葡萄试管苗为试材,研究了卡那霉素（Kan）、潮霉素（Hyg）对葡萄继代苗生长和离体叶片再生的影响,以确定叶盘法基因转化的选择压和转化体的筛选浓度;同时研究了不同浓度的头孢霉素（Cef）和羧苄青霉素（Carb）对葡萄离体叶片再生的影响,以确定侵菌共培养后合适的抑菌抗生素种类和浓度。试验结果表明葡萄继代苗对Hyg的敏感性强于Kan,葡萄遗传转化更适合使用潮霉素磷酸转移酶基因作为选择标记。Hyg 3.0mg/L即达到继代苗致死浓度,可作为转化后抗性苗的筛选浓度,Hyg 0.8mg/L完全抑制叶片不定芽的分化,可作为叶盘法转化时抗性芽的选择压。葡萄叶盘法基因转化中抑制农杆菌生长的抗生素可选用Cef 300mg/L或Carb 400mg/L,但对不定芽的分化有抑制作用。     

欧洲丁香品种‘Downfield’花序和花序轴愈伤组织诱导和悬浮培养

以欧洲丁香(Syringa vulgaris)花序和花序轴作为外植体,研究基本培养基类型、植物激素类型和质量浓度对欧洲丁香愈伤组织诱导的影响,并通过正交试验研究锥形瓶容积、初始液体培养基体积、旧培养基保留比例、接种质量及抗氧化剂质量浓度对悬浮培养愈伤组织增殖效果的影响。结果表明：最优花序轴愈伤组织诱导培养基为改良型Blaydes+苯基噻二唑基脲(TDZ)0.10 mg/L+2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)1 mg/L,最优诱导花序愈伤组织的培养基为MS培养基+TDZ 0.10 mg/L+2,4-D 1 mg/L,诱导率均为100%。2,4-D质量浓度显著影响花序和花序轴愈伤组织诱导率(p<0.05),TDZ与2,4-D联合作用显著影响花序轴愈伤组织诱导率(p<0.05)。悬浮培养的最优组合为锥形瓶容积250 mL、初始液体培养基体积150 mL、旧培养基保留1/4、接种质量7.0 g,聚乙烯吡咯烷酮(PVP)质量浓度100 mg/L,维生素C(Vc)质量浓度75 mg/L。首次以欧洲丁香花序和花序轴为材料建立了愈伤组织诱导和细胞悬浮培养体系,为后续开展工厂化育苗和遗传转化...     

大花蕙兰原球茎增殖影响因素的研究

[目的]为探明组培过程中大花蕙兰原球茎增殖生长的影响因素。[方法]以大花蕙兰茎尖诱导的原球茎为外植体,研究了MS培养基浓度、BA浓度及培养方式对原球茎增殖和生长的影响。[结果]1MS基本培养基适合大花蕙兰原球茎培养;在振荡培养时MS培养基中加入BA1．5mg／L时,原球茎生长良好,显著好于其他浓度处理;在液体培养基中培养原球茎明显优于在固体培养基中培养,液体培养基培养的原球茎鲜重和增殖系数均为固体培养的1．75倍。[结论]培养基配方为Ms＋BA1．5mg／L＋NAA0．2mg／L＋蔗糖30g／L且振荡培养时,大花蕙兰原球茎增殖及生长效果较好。     

不同培养条件对铁皮石斛原球茎增殖的影响

[目的]为了找到适合原球茎增殖的培养条件,为工厂化育苗提供技术支撑。[方法]以铁皮石斛茎段诱导出的原球茎为实验材料,研究了不同基本培养基、不同碳源、不同浓度的脱落酸(ABA)和培养方式对其增殖的影响。[结果]在5种培养基中,原球茎增殖倍数均呈上升的趋势,其中改良MS的增殖倍数明显高于其他培养基;在低浓度的条件下,随ABA浓度的增加,原球茎的增殖速度加快,当浓度为0.5 mg/L时,增殖最大;蔗糖为碳源时原球茎增殖的效果比葡萄糖、果糖好;固体培养和液体振荡培养时原球茎增殖倍数最高。[结论]在改良MS中加入30 mg/L蔗糖和0.5 mg/L ABA,进行固体培养或液体振荡培养,铁皮石斛原球茎增殖的效果好。     

小白菜高效子叶离体植株再生体系的建立

以丰顺小白菜带柄子叶为外植体,研究了苗龄、不同激素配比、A gNO3浓度和抗生素、共培养时间对不定芽再生的影响。结果显示,子叶不定芽再生的最佳苗龄为5~9d;经过2d的预培养,在M S 1.0m g/L TDZ 0.1m g/L NAA 7.5m g/L A gNO3 0.5m g/L ABA培养基中,带柄子叶不定芽再生率最高,为82.53%;在含有2.0m g/LIBA的1/2M S0培养基中诱导生根,不定根形成率为100%。抗生素敏感性试验表明,可选择浓度为20m g/L Hyg(潮霉素)作为最适合选择压,抑制农杆菌生长的抗生素选用500m g/L Cb(羧卞青霉素)。不同浓度农杆菌菌液对子叶再生不定芽的影响不大,但共培养时间的长短却明显地影响不定芽的分化。     

中国李原生质体培养及植株再生

对中国李（ＰｒｕｎｕｓｓａｌｉｃｉｎａＬｉｎｄｌ．）原生质体分离和培养的有关因素进行了研究。以悬浮培养物为材料,在适宜的酶解液中酶解１２ｈ,原生质体产量和活力分别达到３×１０７个／ｇ和９５％．以改良ＭＳ为基本培养基,在培养初期加２,４－Ｄ１．０ｍｇ／Ｌ,ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ,培养３０ｄ后将ＢＡ调至１．０ｍｇ／Ｌ,以０．５５ｍｏｌ／Ｌ葡萄糖调节渗透压,在２×１０５个／Ｌ的植板密度下液体浅层培养５０ｄ后形成了微愈伤组织。微愈伤组织转至固体培养基上继代培养,在分化培养基上分化出不定芽,在生根培养基上生根形成完整植株。     

农杆菌介导的曼地亚红豆杉细胞遗传转化体系的建立

建立了根癌农杆菌介导的红豆杉细胞遗传转化体系,为红豆杉细胞的遗传改良打下基础。最优转化条件是:菌液光密度A600=0.6,侵染时间25 min,共培养最适温度21℃,共培养时间48 h;最适头孢霉素(Cephamycin,Cef)抑菌浓度为300 mg/L;最优的除菌及筛选方式为:用含100 mg/L头孢霉素的无菌水冲洗共培养后的细胞10 s,然后将细胞转至含300 mg/L头孢霉素的抑菌培养基上,两周后转至含150 mg/L卡那霉素(Kanamycin,Kan)或8 mg/L潮霉素(Hygromycin,Hyg)的筛选培养基上筛选。采用小愈伤团法筛选转基因纯系,GUS染色显示,筛选后转化细胞株的阳性细胞占80%以上。     

超声波辅助诱导春石斛原球茎途径再生体系的建立

春石斛是目前国际流行的高档盆花,研究春石斛品系材料No.H118和No.33原球茎再生体系的建立.首先通过原植株的茎尖或腋芽外植体诱导得到无菌苗;将无菌苗茎基无叶芽茎段,经40 kHz超声波预处理10 min,接于1/2 MS+6-BA 0.2 mg/L固体培养基可诱导得到原球茎,系列筛选试验表明,采用液体MS+6-BA 0.2 mg/L两供试材料均得到最高的原球茎增殖率,分别为4.57倍/月和4.31倍/月,添加150 mL/L的椰汁诱导效率显著高于添加蛋白胨和香蕉泥;采用1/2 MS+6-BA 1.0 mg/L+NAb.0.2 mg/L固体培养基,芽增殖率最高,不同的春石斛品种或材料原球茎诱导成功率存在显著性差异.     

铁皮石斛原球茎固体培养和液体悬浮培养动力学研究

为筛选适合铁皮石斛原球茎的最佳培养方式，采用固体培养和液体悬浮培养两种培养方式，并研究液体悬浮培养的营养消耗变化规律，同时考察了液体培养液中pH值和电导率的变化。结果表明：原球茎在固体培养条件下，培养60d后干重达到最大，为13．40g／L，多糖产量最大值为2412．5mg／L；在液体悬浮培养条件下，干重仅需要50d可达到17．64g／L，多糖产量最大值为3081．2mg／L。液体培养在生物量、多糖产量上均优于固体培养；原球茎生长与碳源、氮源和磷的消耗存在着密切关系，培养基电导率变化与原球茎的生物量积累呈线性关系。     

拟南芥悬浮细胞及其愈伤组织对潮霉素的反应

研究了潮霉索对拟南芥悬浮细胞及其愈伤组织的作用效果和特性．结果表明：潮霉素对拟南芥悬浮细胞生长、愈伤组织诱导及其生长均有极明显的抑制作用。但作用效果和特性均有所不同；拟南芥悬浮细胞继代培养阶段、愈伤组织诱导阶段和愈伤组织增殖阶段的临界致死质量浓度分别为25、2．5、1．5mg／L，液体与固体培养条件下差异极大；潮毒素需要一定处理时间才能充分表现其抑制细胞生长或杀死细胞的效果，一般液体培养条件下3d以后、固体培养条件下5d以后效果趋于稳定，但不同的处理质量浓度有较大差异．还就液体与固体培养条件下作用效果差异的原因进行了讨论，并提出了对潮毒素抗性标记筛选的建议．     

植物生长调节剂不同浓度配比对金发藓原丝体发育的影响

以金发藓（Polytrichum commune Hedw.）为供试藓种,MS液体培养基为培养基质,在培养基质中分别添加两种植物生长调节物质6-BA和2,4-D的9种浓度配比,以不添加植物生长调节剂的MS培养基为对照,探索植物生长调节剂对金发藓原丝体各项生长指标的影响机理。在金发藓原丝体发育阶段,6-BA浓度为0.5 mg/L和2,4-D浓度为1.0 mg/L的处理时,对原丝体主枝的生长发育效果最好,且对原丝体分枝的抑制作用最小,因此金发藓原丝体发育的最佳培养基为：MS（液）＋0.5 mg/L 6-BA＋1.0 mg/L 2,4-D＋1%蔗糖。     

高分子树脂膜培养容器在文心兰原球茎增殖中的应用

以薄叶系文心兰 (Oncidium)品种‘AlohaIwanaga’茎尖诱导形成的原球茎 (protocorm likebody ,PLB)为外植体 ,采用树脂膜培养容器 (CP)和三角瓶 ,分别以MS、1 2MS为基本培养基 ,比较 5种不同培养方式 (三角瓶固体方式、三角瓶液体方式、三角瓶液体振荡方式、CP固体方式、CP液体静置方式 )、CO2 施肥和 4种不同糖浓度 (5、10、2 0、30g L)对文心兰原球茎 (PLB)增殖效果的影响 .通过对PLB增殖后的鲜重、干物重和PLB分化幼苗等主要指标分析后表明 :①以 1 2MS为基本培养基、应用CP作培养容器的液体静置培养方式是该实验研究中文心兰PLB增殖的最佳培养方式 ;②CO2 施肥在一定程度上增加了PLB增殖后的鲜重和干物重 ,表明培养容器内的CO2 浓度提高 ,能够促进文心兰PLB的增殖 ;③培养基中 4种不同糖浓度处理中 ,2 0g L糖浓度下 ,增殖后PLB鲜重和干物重均高于其他处理 .糖浓度在 2 0g L以下时不利于PLB的快速增殖 ,高于 2 0g L时对PLB的增殖有一定的抑制作用 .     

甘蓝型油菜与紫罗兰融合体培养的影响因素研究

对影响甘蓝型油菜与紫罗兰下胚轴原生质体融合后的融合体培养因素进行了研究。结果表明:采用液体浅层培养,以改良的KM8p为培养基附加2,4-D1.5 mg/L,NAA0.5 mg/L,6-BA0.5 ml/L,以蔗糖0.3 mol/L和葡萄糖0.1 mol/L作渗透稳定剂进行培养效果最好;原生质体培养3～6 d,细胞发生第1次分裂,第7天时分裂频率最高为13.8%;35天后形成大量的细胞团和肉眼可见的小愈伤组织,其植板率最高为6.5%。