利用发根农杆菌转化实美橙子叶外植体的研究

以过夜培养的发根农杆菌 R_(1000)、15834、A)4感染实美橙子叶外植体,与菌体共培养3天后,转移至含头孢霉素的无激素 MT 培养基上进行选择培养,10天后开始产生毛状根,转化率为23%～36%。毛状根在继代培养中,稳定地保持激素自主性生长的特性.纸电泳检测证明,毛状根中含有甘露碱和农杆碱,表明发根农杆菌 Ri 质粒的 T-DNA 转移并整合入实美橙子叶细胞核基因组中,得到了表达,部分毛状根已分化产生不定芽和苗.     

三裂叶葛毛状根的诱导及葛根素的产生

利用发根农杆菌R1601感染药用植物三裂叶野葛叶片、茎段、芽、叶柄等外植体,诱导毛状根产生,通过PCR扩增和southern印迹试验,证实发根农杆菌Ri质粒的T-DNA片段已整合进植物的核基因组中,这些毛状根可以在无激素的培养基中快速生长.本试验探索了不同的外植体对诱导率的影响,对产生的毛状根活性物质的含量进行了分析,结果表明,葛转化中叶片是最合适的外植体,而不同的毛状根细胞株中葛根素的含量差异较大,平均含量达到4.21%.     

发根农杆菌介导的怀地黄遗传转化研究

利用发根农杆菌转化怀地黄组培苗子叶、叶柄和茎段,建立了有效的毛状根培养及其植株再生体系。毛状根可直接从受伤的外植体产生,能在无外源激素的1/2MS固体和液体培养基上自主生长,表现出典型的发根特征。毛状根在附加0.2mg/LKT和3.0mg/L6-BA的1/2MS培养基上能100%形成愈伤组织,51.49%分化出芽;分化芽在1/2MS培养基上100%生根,形成具有矮化、节间短和根系发达等特征的转化再生植株且移栽后生长旺盛。rolB基因PCR和冠瘿碱纸电泳检测证明,农杆菌Ri质粒上的T-DNA整合到怀地黄基因组中并表达,获得转基因怀地黄。     

辣椒叶片离体培养与植株再生

以辣椒无菌苗叶片为外植体，就激素对其不定芽分化及植株再生的影响进行了研究。结果表明，ＢＡ对叶片不定芽的诱导效果最好，ＺＴ次之，ＫＴ不能有效地诱导叶片形成不定芽；ＩＡＡ与ＢＡ相配合使叶片不定芽分化频率明显提高；ＩＢＡ或ＮＡＡ与ＢＡ的激素组合使叶片不定芽分化频率有所不降；２，４－Ｄ对叶片不定芽分化有明显的抑制作用。在分化培养基中添加１．０ｍｇ／ＬＧＡ３有利于不定芽的伸长。不定芽伸长后在不含激素的ＭＳ或ＭＳ＋ＭＡ培养基上诱导生根，形成完整植株。     

6－BA及MET对水稻实生苗不定芽诱导的影响

试验研究不同浓度６－卞氨基嘌呤（６－ＢＡ）与多效唑（ＭＥＴ）对水稻实生苗不定芽诱导的影响。结果表明：（１）６－ＢＡ可明显促进不定芽的形成；（２）单独使用ＭＥＴ不能诱导不定芽的形成，但与６－ＢＡ配合使用可明显提高水稻不定芽的诱导率，这种促进作用对于粳稻尤为明显；（３）籼、粳稻对激素的反应不同。籼稻对激素较为敏感，较低浓度的６－ＢＡ与ＭＥＴ配合使用即能诱导实生苗产生不定芽，而粳稻则对激素比较钝感，需要较高浓度的６－ＢＡ与ＭｒＬ配合使用才能诱导产生不定芽；（４）６－ＢＡ与ＭＥＴ配合使用同样能诱导籼、粳稻杂种Ｆ＿２实生苗高频率地产生不定芽     

农杆菌介导的长春花毛状根诱导及培养技术

研究了发根农杆菌介导下的长春花毛状根的诱导及培养。不同的菌种、外植体部位、培养基和代谢产物对毛状根诱导效果不同，最高诱导率分别为：Ａ４菌２５．３％；下胚轴２４．１％；１／２ＭＳ培养基２３．３％。农杆菌诱导转化时间１５～２０ｄ。完成了长春花毛状根的筛选克隆及培养     

山豆根毛状根培养体系的建立与优化

为探索定向培养山豆根植物细胞及器官获取有效药用成分的新途径,为山豆根有效药用成分的大规模生产奠定基础,采用共培养法研究发根农杆菌R1601感染诱导山豆根无菌苗子叶产生毛状根,并在此基础上从不同培养液、不同蔗糖浓度和外源激素对毛状根生长的影响方面筛选山豆根毛状根生长的最佳培养液。结果表明:利用发根农杆菌R1601感染山豆根无菌苗子叶16min,在MS+AS 100μmol/L的固体培养基上培养可诱导产生毛状根,且诱导率最高,达66.67%;1/2 MS+IAA 0.5mg/L+5%蔗糖的培养液最有利于山豆根毛状根的生长。     

发根农杆菌A4菌株诱导三分三毛状根的研究

利用发根农杆菌A4菌株侵染三分三组培苗叶片诱导毛状根,并对其毛状根进行继代增殖培养;采用PCR技术检测毛状根。结果表明：发根农杆菌A4菌株Ri质粒的rolB基因已整合到三分三叶肉细胞的基因组中,进而成功地从叶片诱导出毛状根,诱导率可达77%以上;毛状根除菌后,能在无激素的MS固体培养基上快速生长。三分三遗传转化体系的建立为实现基于毛状根的三分三产托品烷类生物碱的代谢工程奠定基础。     

桑树毛状根再生条件研究

为建立桑树毛状根的再生体系,以桑树毛状根作为外植体,研究不同质量浓度6-BA和NAA配比对桑树毛状根愈伤组织诱导和不定芽分化的影响,并对再生植株进行PCR检测。结果表明,桑树毛状根的最佳愈伤组织诱导培养基为MS+0.2mg/L 6-BA+2.0mg/L NAA,最佳不定芽分化培养基为MS+1.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA,3周愈伤组织不定芽分化率为16.7%。应用该不定芽获得再生植株的根系生长旺盛,叶片提取的基因组中含有rolB生根基因。     

6—BA及MET对水稻实生苗不定芽诱导的影响

试验研究不同浓度６－卞氨基嘌呤与多效唑对水稻实生苗不定芽诱导的影响。结果表明：（１）６－ＢＡ可明显促进不定芽的形成；（２）单独使用ＭＥＴ不能诱导不定芽的形成，但与６－ＢＡ配合使用可明显提高水稻不定芽的诱导率，这种促进作用对于粳稻尤为明显；（３）籼。粳稻对激素的反应不同。籼稻对激素较为敏感，低浓度的６－ＢＡ与ＭＥＴ配合即能诱导实生苗产生不定芽，而粳稻则对激素比较钝感，需要较高浓度的６－ＢＡ与ＭＥＴ配     

辣椒叶片离体培养与植株再生

以辣椒无菌苗叶片为外植体，就激素对其不定芽分化及植株再生的影响进行了研究。结果表明，ＢＡ对叶片不定芽的诱导效果最好，ＺＴ次之，ＫＴ不能有效地诱导叶片形成不定芽；ＩＡＡ与ＢＡ相配合使叶片不定芽分化频率明显提高；ＩＢＡ或ＮＡＡ与ＢＡ的激素组合使叶片不定芽分化频率有所下降；２，４－Ｄ对叶片不定芽分化有明显的抑制作用。在分化培养基中添加１．０ｍｇ／Ｌ ＧＡ３有利于不定芽的伸长。不定芽伸长后在不含激素的ＭＳ     

罗勒毛状根的诱导及培养

[目的]利用4种发根农杆菌R1,R1601,1025,1000诱导药用植物罗勒产生毛状根,建立毛状根培养体系。[方法]利用共培养法研究不同外植体、菌株、预培养时间、感染时间以及外源激素等对罗勒毛状根诱导率的影响。[结果]利用发根农杆菌1025,预培养2d的叶片为转化材料,感染6～8min,加入0.1mg/LNAA的诱导率最高。经过基本培养基的筛选和毛状根生长动力学的考察,确立罗勒毛状根在1/2MS培养基中的最佳继代时间为21d。[结论]罗勒毛状根离体培养的建立,为进一步进行药用活性成分的工业化生产奠定了基础。     

发根农杆菌诱导栝楼毛状根的研究

栝楼是一种重要的药用植物,提取物具有多种活性。以栝楼的无菌苗为材料,用A4、15834和LBA9402等3种发根农杆菌浸染茎段,诱导毛状根生成,并研究毛状根分化不定芽的条件。结果显示,3种农杆菌都能诱导栝楼毛状根产生,其中LBA9402诱导率最高,达到52%,且毛状根在6-BA 2.0 mg.L-1 KT 2.0 mg.L-1 NAA 0.5 mg.L-1的培养基上,不定芽分化率达到了24%。对毛状根进行基因组DNA提取,PCR扩增检测出rolB基因的存在,初步证明R i质粒T-DNA已经整合到栝楼基因组中。     

发根农杆菌转化茶树的研究

以3个品种茶树的不同部位、器官为材料,探讨发根农杆菌转化茶树及毛状根增殖的条件.感染1025菌种的大红品种茎段,在添加IBA 0.4mg/L的1/2MS培养基上诱导出了毛状根.茶树毛状根细如头发,着生稀疏长根毛,具有激素自主性、分枝多、生长快等特点.经正交试验,将1/2MS培养基的KNO3,NH4NO3质量浓度降至MS培养基的1/8时的培养基,是毛状根伸长、分枝较好的基本培养基.添加IBA 0.2mg/L的培养基,毛状根的伸长、分枝优于添加IBA 0.1mg/L的培养基,但在毛状根上出现少量愈伤组织.     

花生毛状根诱导及其体外培养

[目的]优化花生毛状根诱导条件,为体外培养毛状根生产白藜芦醇以及培养花生根结线虫奠定基础。[方法]研究不同的发根农杆菌及其菌液浓度、外植体类型、侵染时间、共培养时间、乙酰丁香酮浓度对花生毛状根诱导的影响。[结果]发根农杆菌ACCC10060的毛状根诱导率高于ATCC11325;幼叶外植体的毛状根诱导率高于子叶;最佳侵染菌液浓度为0.2～0.4;最佳共培养时间为2 d;最佳侵染时间为10～15 min;菌液中添加75μmol/L乙酰丁香酮(AS)可以提高毛状根诱导率。通过毛状根能在无激素的MS培养上自主生长以及毛状根冠瘿碱检测,确定发根农杆菌中Ri质粒中已整合到花生基因组中。毛状根体外培养的研究表明,液体培养效果好于固体培养,最佳液体培养基为无激素的MS培养基。[结论]该研究建立的花生毛状根培养体系,将为花生转基因技术的完善及利用毛状根生产白藜芦醇和无菌的花生根结线虫提供试验基础。     

黄芩毛状根的诱导及响应面法优化培养条件

[目的]应用响应面法优化黄芩毛状根的培养条件。[方法]利用发根农杆菌1.2556感染黄芩获得毛状根,在单因素试验的基础上,利用Box-Benhnkcn设计和响应面分析法对影响黄芩毛状根生长的培养条件(培养时间、温度、摇床转速和接种量)进行分析,优选最佳培养条件。[结果]毛状根在无外源激素的MS培养基上自主生长,表现出典型的发根特征。毛状根的最优培养条件为:培养时间24.95 d、温度27.4℃、摇床转速123.69 r/min、接种量0.500 g;在此条件下,黄芩毛状根的生长量为(fm)9.271 28 g/瓶。[结论]该研究优化了黄芩毛状根的培养条件,为黄芩的进一步开发利用提供了依据。     

番木瓜的离体培养快速繁殖

在１／２ＭＴ（无机盐减半）附加０．５ｍｇＬ－１ＢＡ和０．２ｍｇＬ－１ＮＡＡ的ＢＭ１培养基上建立试管株系．在ＭＴ附加０．５ｍｇＬ－１ＢＡ和０．１ｍｇＬ－１ＮＡＡ的ＢＭ２快繁培养基上，每４５ｄ继代一次可获得平均达６．３倍的增殖率．继代芽苗接种在含０．２－１．０ｍｇＬ－１ＩＢＡ培养基中培养可获得较高的长根率     

百合杂种胚的离体培养

以剥除胚乳的两个百合杂交组合的杂种胚，进行离体培养，５ｄ后即开始萌发，１５ｄ后，萌发率达８８％。在不同激素含量的培养基比较试验中，发现以ＭＳ＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ１．０ｍｇ／Ｌ激素浓度培养基培养效果最好，其中，７５％的种胚长成完整植株，１２．５％的种胚长出幼芽，培养过程中，无根的幼苗生长至３ｃｍ左右，约５张叶片时，转移至ＭＳ＋ＮＡＡ０．１ｍｇ／Ｌ的培养基上，２￣３周后，有８０％的幼苗长出根。     

甘蓝子叶作为外植体转Hyg~r－Km~r基因的技术研究

本文报告了以甘蓝（ｂｒｅｓｓｉｃａｏｌｅｒａｃｅａ）子叶为外植体，成功地将抗潮霉素（Ｈｙｇ~ｒ）基因和抗卡那霉素（Ｋｍ~ｒ）基因导入甘蓝品种，培育出转基因植物的技术研究成果．以ＭＳ为基本培养基，添加ＩＡＡ２ｍｇ／１，ＢＡ４ｍｇ／１，蔗糖２０ｍｇ／１和琼脂８．０ｍｇ／１，进行高再生率基因型选择，结果１９个品种的再生芽发生率在０％～９０％之间。对高再生率的品种进一步试验，进行不同激素浓度的适宜培养基的选择。结果表明：以ＩＡＡ３ｍｇ／１和ＢＡ４ｍｇ／１的ＭＳ固体培养基诱导甘蓝子叶，其再生芽发生率高达９５％～１００％；每个外植体平均可诱导出２．４～３．９个再生芽。抗生素耐性试验结果指出，培养基中含有５００ｍｇ／１羧苄青霉素几乎时再生芽的发生率和再生芽个数无影响，只是诱导的再生芽相对发育缓慢，体态弱小。用卡那霉素和潮霉素所进行的致死试验结果是：虽然致死率因基因型不同而有所不同，但培养基中含有Ｋｍ２０ｍｇ／１和Ｈｙｇ２０ｍｇ／１以上基本可以使所有的外植体死亡而无幼芽的再生。选择时期的试验结果显示，在外植体与ＥＨＡ１０１农杆菌共培养３～ｌ０ｄ范围内，共培养６ｄ和７ｄ进行选择分别获得３％～５％的转化率。     

芦笋腋芽一步成苗组培技术研究

本研究通过对外植体及其消毒方法、生根培养激素组合的筛选，建立了芦笋腋芽一步成苗的组培快繁方法。结果表明，以5～10 mm腋芽为外植体，接种在1/2MS+0.05 mg/L NAA+0.1 mg/L KT+1.0 mg/L嘧啶醇+1.0 mg/L IBA+2%蔗糖+0.65%琼脂的培养基上，30天左右即可生根，45天左右根长可达1 cm;再生根可分为3种类型，即从芽基部长出的粗壮肉质根(Ⅰ型)、从愈伤组织上再生的不定根(Ⅱ型)以及从芽基部长出的细长根(Ⅲ型),在确定的最适生根培养基上产生的根主要是Ⅰ型根。培养60天后芽伸长明显，长度可达3～5 cm;培养70天后，将生长健壮的生根苗进行炼苗后移栽，移栽成活率达98%以上。该方法能够为芦笋优异单株的快速繁殖提供解决方案，为规模化生产F₁杂种提供技术支撑。