糖化酶产生菌的分离·鉴定及其选育

[目的]对糖化酶产生菌的分离、鉴定及其选育进行研究。[方法]采用稀释涂布法,分离纯化糖化酶产生菌,通过形态学与生理生化特征进行初步鉴定,再利用紫外线、亚硝酸和聚六亚甲基胍对该菌进行复合诱变选育。[结果]通过筛选获得1株产糖化酶野生株,其产酶活力为72.56 U/ml;经鉴定,该菌株为多粘芽孢杆菌(Bacillus polymyxa);选择紫外线、亚硝酸和聚六亚甲基胍(Polyhexamethy Leneguanidine hydroch Loride,PHMG)连续复合诱变后,突变株酶活力比出发菌株产酶量提高67.90%。[结论]试验所筛选的多粘芽孢杆菌为糖化酶的生产提供了一个新的选择菌种。     

产碱性几丁质酶菌种的筛选与发酵条件的研究

从２７个土样或水样中分离到１４７株产碱性几丁质酶的菌株。摇瓶试验表明,链霉菌Ｓ１００１的的产酶能力最强,该菌的最佳培养基成分为：累粉几丁质１．０,葡萄糖０．１,ＫＮＯ３．０．２３,ＭｇＳＯ４．７Ｈ２Ｏ０．０２,Ｋ２ＨＰＯ４０．１,吐温－６０．０．１,Ｎａ２ＣＯ３１．１,最佳培养条件为起ｐＨ值１１,菌龄９ｄ,培养基装置为三角瓶体积的２５％,３１℃条件下振荡培养５ｄ。     

乙醛脱氢酶高产菌株Z07-J01的选育与酶学特性

通过紫外线和He-Ne激光诱变醋酸菌,选育出1株乙醛脱氢酶高产菌株Z07-J01,该正突变株24 h发酵酶活为1 008.00 U/g湿菌体,比出发株提高了276%,且酶活在10代内稳定。该突变株所产乙醛脱氢酶的最适作用pH为7,最适作用温度为50℃;在25℃保温30 min,该酶酶活不受影响;在65℃保温30 min,该酶完全失活;2 mmol/L Cu2 能使该酶完全失活,2 mmol/L Mn2 则对该酶有较强的激活作用。     

固氮螺菌突变株CWV—22拌种对小麦生长发育及产量的影响

固氮螺菌突变株ＣＷＶ—２２拌种对小麦生长发育及产量的影响皇甫湘荣，宝德俊，张鸿程（河南省农业科学院土壤肥料研究所郑州４５０００２）１９８３年罗孝扬等人用化学诱变方法从固氮螺菌突变株选育出耐高铵固氮菌株ＣＷＶ—２２。该突变株在铵离子达４０—２００ｍｍｏ...     

高效降解秸秆的深绿木霉菌ATMT突变株的筛选

以羧甲基纤维素粉或滤纸为唯一碳源,对深绿木霉菌T23的农杆菌介导的突变株进行了生长速度、产孢率、色素形成等形态学观测,同时,测定了滤纸酶酶活及羧甲基纤维素酶酶活,从中筛选出降解纤维素能力较出发菌T23显著变化的突变株7株。其中,多拷贝T-DNA插入突变株较单拷贝的突变株生长速度快,产孢率高。并且,这些突变株的发酵液呈明显的色素差异。突变株插入的拷贝数越多,酶活越强,在降解过程中这2种酶都观察到了产物的反馈抑制现象。     

高产菊粉酶的黑曲霉菌株产酶酶系分析与研究

对AspergillusnigerH8、A.nigerM89和突变株A.nigerUγ-2三株菊粉酶高产菌株产生的主要酶系进行了分析与研究。结果表明,在产菊粉酶的优化培养基(菊芋汁培养基)中进行摇瓶发酵,三菌株除产菊粉酶活力较高外,还产生蛋白酶,果胶酶,淀粉酶,纤维素酶;三株菌都表现为酶活力高峰随发酵时间依次是蛋白酶、淀粉酶、果胶酶和菊粉酶,纤维素因不同菌株有一定差异;突变株A.nigerUγ-2与其出发菌株A.nigerM89产酶比较表明,突变株在菊粉酶产酶活力获得大幅度提高的同时,淀粉酶和果胶酶的产酶活力也显著提高。     

高产壳聚糖酶菌株的筛选及诱变育种

目的]研究利用紫外线和硫酸二乙酯（DES）诱变得到产壳聚糖酶活性较高的菌株。[方法]利用以壳聚糖为唯一碳源的选择性培养基,从自然界中筛选得到1株产壳聚糖酶活较高的菌株,对其进行鉴定,并且利用紫外线和DES诱变方法来提高该菌株的产酶能力。[结果]经初步鉴定,大致判定产壳聚糖酶的Y-4菌株为烟曲霉（Aspergillus fumigatus）。经紫外线和DES诱变处理分别得到2株壳聚糖酶活性明显提高的突变株,其酶活分别为8.92和8.12 U/ml,分别是出发菌株Y-4（3.00 U/ml）的3.0和2.7倍。2株突变株经连续传代10次后均具有较高的产酶稳定性。[结论]紫外线诱变较DES诱变效果好。     

分解蔗渣的研究

从蔗渣烂域筛选出一株高纤维素酶活力的特异青霉ＹＢ－５，经紫外线和亚硝基胍诱变，获得一突变株ＹＢ－７，其生长快，产孢子多且无毒性。并研究了碳源、氮源、金属离子和表面活性剂对产酶的影响。在正交优化的固体培养基和优化培养条件下，６０ｈ时ＣＭＣａｓｅ、ＦＰＡ和β－葡萄糖苷酶活力分别可达２９．４ＩＵ／ｍｌ、８．４０ＩＵ／ｍｌ和２５．１ＩＵ／ｍｌ。     

高产果胶酶菌株的选育及其固态发酵条件

对Ｇ９１黑曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ Ｎｉｇｅｒ）分别作紫外线和亚硝酸诱变处理，获得２株高产果胶酶的突变株；Ｇ９１Ｆ和Ｇ９１Ｋ。突变株的产酶水平（干曲）为２０００～２ ３００ＩＵ．ｇ＾－１，大约是原始菌株的４倍。经正交试验得出固态发酵产酶的最适条件，并进行了诱导物和附加氮源的选择试验。     

苏云金芽孢杆菌新分离株S_(18-4) δ-内毒素基因在Btk·BE_(20)中的克隆和表达

选用土壤新分离株Ｓ１８－４为供体菌,以ＰＨＴ３１０１穿梭质粒为载体,载体和供体ＤＮＡ用Ｐｓｔｌ酶切后进行连接,用电激法将重组质粒转入苏云金芽孢杆菌无晶体突变株Ｂｔｋ·ＢＥ２０中。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ蛋白电泳及扫描电镜观察,证明δ－内毒素基因得到了表达,并具有很高的表达量。生物测定结果显示,重组株对夜蛾科幼虫具有比野生株Ｓ１８－４更强的杀虫毒性。     

一株芽孢杆菌的鉴定及遗传稳定性的研究

杆菌X株是在产酶益生素菌种分离过程中得到的一株产酶能力较强的菌株,经常规鉴定为枯草芽孢杆菌,通过测定发现该菌株具有良好的遗传稳定性,可作为优良的益生素生产侯选菌,从而为其益生作用的发挥提供保证和依据。     

虎杖苷转化菌的筛选及所产酶的性质研究

利用专一性底物法,以虎杖水提液为初始培养基,经过初筛复筛获得转化菌。根据菌落形态特征对菌株进行初步鉴定,对转化菌产酶的酶学性质进行研究。结果表明,通过筛选得到1株特异性转化虎杖苷为白藜芦醇的菌株,经形态学鉴定为青霉菌。该菌产的酶最适p H值为5. 0,最适温度为60℃; Fe2+、Na+和Ca2+对酶活力有激活作用;虎杖苷是该酶理想的水解作用底物。利用该菌产的酶液转化虎杖原料,虎杖苷的转化率最高可达到100%。     

分解蔗渣的研究I.菌株的选育及其固态发酵条件的研究

从蔗渣腐烂域筛选出一株高纤维素酶活力的特异青霉（Ｐ．ｎｏｔａｔｕｍ）ＹＢ－５，经紫外线和亚硝基胍诱变，获得一突变株ＹＢ－７，其生长快，产孢子多且无毒性。并研究了碳源、氮源、金属离子和表面活性剂对产酶的影响。在正交优化的固体培养基和优化培养条件下，６０ｈ时ＣＭＣａｓｅ、ＦＰＡ和β－葡萄糖苷酶活力分别可达２９．４ＩＵ／ｍｌ、８．４０ＩＵ／ｍｌ和２５．１ＩＵ／ｍｌ。     

高效秸秆降解菌株的分离与选育

为了选育高效降解玉米秸秆的菌株,首先用羧甲基纤维素钠(CMC-Na)培养基结合滤纸条无机盐培养基,对从样品中分离的菌株进行初筛,再以玉米秸秆培养基复筛并进行发酵产酶试验,测定CMC-Na酶活和FPA酶活,最后对目的菌进行紫外诱变。通过筛选得到降解效果较好的2株真菌PJ-2、PJ-4和1株放线菌GJ-1。紫外诱变后获得正向突变菌3株,分别为PJ-2的突变菌UV-1-1,PJ-4的突变菌UV-2-2和UV-2-4,这3株突变株的CMC-Na酶活力相对原菌株分别提高45%、20%和10%以上,菌株降解秸秆能力也显著提高。     

腐乳毛霉菌种选育及产酶条件研究

以毛霉菌Ｍ２为出发菌株，经紫外线，６０Ｃｏγ－射线复合诱变，获得一株高产蛋白酶突变株毛霉Ｍ２６３．该菌株的生长速度快，菌丝旺盛，且洁白致密。固体培养，中性蛋白酶活力为８４１μｇ／ｍｉｎ，产酶活力约为原出发菌株的２倍。产酶最适培养条件为：９８％麸皮，１％豆饼粉，１％葡萄糖，料水比１：１，起如ｐＨ７．０，２０℃培养１２０ｈ。     

抑制真菌病害几丁质酶产生菌的筛选、鉴定

从土壤中分离到132株细菌和链霉菌,用平板透明圈法筛选到32株产几丁质酶菌株,其中一株链霉菌经测定对稻瘟菌、水稻纹枯病菌、辣椒炭疽病菌、小麦赤霉病菌等多种病原真菌具明显抑制作用,该菌经形态学及生理生化特性鉴定,初步定为球孢链霉菌(Streptomyces globisporus),是一种新的几丁质酶产生菌。     

猪鸡致病菌β-内酰胺酶、超广谱β-内酰胺酶检测与药敏试验

 对分离的猪鸡致病菌，分别进行了?－内酰胺酶、超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)检测，并用试管二倍稀释法测定了β－内酰胺环类抗生素或β－内酰胺环类抗生素与抑制剂舒巴坦联用对非产酶菌、产?－内酰胺酶菌、产ESBLs菌的抗菌活性。结果表明，43株分离菌的大多数可产生?－内酰胺酶，3株鸡志贺氏菌为ESBLs阳性菌株。30株分离产酶菌均对阿莫西林、氨苄西林耐药（MIC≥32 ?g/ml），16株非产酶菌（标准菌株及分离株）中的15株对阿莫西林、氨苄西林敏感，只有一株非产酶分离菌耐药。氨苄西林与舒巴坦以2∶1、4∶1配比联用时，其对分离产酶菌的MIC值分别降低10~40倍、10~20倍。临床致病菌对三代头孢均敏感，与舒巴坦以2∶1、4∶1配比联用时，三代头孢的MIC值不变。当头孢噻呋、头孢曲松与舒巴坦以2∶1配比联用时，其对产ESBLs菌的MIC值降低2～4倍。     

鸡志贺氏菌产超广谱β内酰胺酶（ESBLs）的分子进化

【目的】检测鸡志贺氏菌分离株和诱导株所产ESBLs的基因型,探讨其产酶耐药的分子进化机制。【方法】对1株诱导和5株临床分离产ESBLs细菌分别用TEM、SHV、CTX-M 3种通用引物进行PCR扩增、基因克隆及测序分析,确定鸡福氏志贺氏菌ESBLs的基因型和基因亚型。【结果】5株临床福氏志贺氏菌质粒上具有相同的TEM序列和相同的SHV序列,TEM型序列与AY903309（TEM-116）序列相比发生了2个位点基因突变即G157A、C409T,其中409位点碱基突变为沉默突变,157位点碱基突变导致相应氨基酸序列53位发生突变Gly53Ser,此氨基酸突变为新的突变位点,所以该TEM型ESBLs是一种新的TEM亚型,暂命名为TEM-1V型;SHV型与AY826418（SHV-12）序列完全相同,为SHV-12型。头孢噻呋诱导标准福氏志贺氏菌,诱导10代时产生了TEM-1型β－内酰胺酶,诱导50代时产生了TEM-1V型ESBLs。【结论】临床分离鸡福氏志贺氏菌ESBLs的基因型为TEM-1V型和SHV-12型,鸡福氏志贺氏菌TEM-1V型ESBLs是由 TEM-1型β内酰胺酶直接进化而来。     

高效降解纤维素菌株的选育

[目的]筛选纤维素酶活性高且酶活稳定的纤维素降解菌。[方法]以木霉为出发菌株,用紫外线对其进行诱变处理,通过平板初筛和摇瓶复筛筛选出纤维素酶活力高且酶活稳定的优良突变株,然后分别以滤纸、甘蔗渣、麦秆和稻壳为目标降解物对优良突变株进行底物降解试验。[结果]经紫外线诱变、初筛、复筛,共选育出3株纤维素酶活力高且酶活稳定的优良突变株N1、N2、N3,其中N3的产酶活力最高（348 U/ml）,为出发菌株的2.13倍;N3对各种底物的降解效果均优于出发菌株,分别以滤纸、甘蔗渣、麦秆和稻壳为唯一碳源时,其失重率分别为48.68%、41.28%、26.53%和23.47%。[结论]该研究选育出了高效降解纤维素的菌株N3。     

腐乳毛霉菌种选育及产酶条件研究

以毛霉菌（Ｍｕｃｏｒ）Ｍ２为出发菌株，经紫外线，６０Ｃｏγ－射线复合诱变，获得一株高产蛋白酶突变株毛霉Ｍ２６３。该菌株的生长速度快，菌丝旺盛，且洁白致密。固体培养，中性蛋白酶活力为８４１μｇ／ｍｉｎ，产酶活力约为原出发菌株的２倍。产酶最适培养条件为：９８％麸皮，１％豆饼粉，１％葡萄糖，料水比１：１，起始ｐＨ７．０，２０℃培养１２０ｈ。