奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌的分离鉴定与耐药分析

为了解本地区规模化奶牛场奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌的流行与耐药情况，本研究采集了300份奶牛乳房炎奶样，进行金黄色葡萄球菌的分离、培养，利用荧光PCR方法鉴定，同时对分离出的阳性菌株采用纸片扩散法进行耐药性分析。结果表明：从奶牛乳房炎样品中分离出42株金黄色葡萄球菌，分离率为14%；耐药性分析表明分离的金黄色葡萄球菌对青霉素、磺胺异噁唑耐药率超过70%，对庆大霉素、氧氟沙星、头孢哌酮敏感性大于90%。本研究为本地区奶牛乳房炎的防控与临床用药提供了依据。     

邯郸地区奶牛乳房炎病原菌的分离鉴定及耐药性分析

奶牛乳房炎是奶牛养殖中的常见病和多发病,严重危害我国奶牛养殖业的发展。为确定邯郸地区奶牛乳房炎主要致病菌,本试验采集邯郸地区临床型奶牛乳房炎奶样31份,进行了病原菌分离鉴定、分子生物学检测和耐药性分析。结果,分离出金黄色葡萄球菌9株、大肠杆菌9株、沙门氏菌8株、链球菌9株,分离率分别为29.03%、25.81%、29.03%、29.03%。药敏试验结果显示,分离出的四种病原菌主要对青霉素和头孢噻吩不同程度耐药,对氨苄西林、卡那霉素、恩诺沙星、万古霉素、环丙沙星高度敏感,敏感率为100%,表明以上抗生素对四种病原菌生长繁殖有良好抑制作用。本试验研究为临床治疗奶牛乳房炎制定合理用药措施提供了理论基础。     

奶牛乳房炎源性肺炎克雷伯杆菌的分离鉴定和耐药性分析

为研究河北省奶牛乳房炎性肺炎克雷伯菌的流行和耐药特性,本试验从河北省某大型奶牛养殖场无菌采集患乳房炎奶牛的乳样245份,进行细菌分离鉴定和耐药性分析。通过细菌形态学观察、生化试验和16S rRNA扩增试验鉴定奶牛乳房炎性肺炎克雷伯杆菌,并利用药敏试验检测分离株的耐药性。结果显示:分离获得45株奶牛乳房炎源性肺炎克雷伯杆菌,占18.4%。革兰染色镜检可见红色的短棒状细菌;生化试验结果表明,分离株可分解葡萄糖、赖氨酸、鸟氨酸、卫茅醇和尿素;PCR扩增结果表明,分离株的DNA大小约为1 500 bp。与此同时,药敏试验结果表明,肺炎克雷伯杆菌对青霉素、四环素、庆大霉素和克林霉素的耐药率分别为73.3%、53.3%、48.9%和46.6%,对头孢氨苄、卡那霉素和头孢喹肟的敏感率分别为60%、46.7%和44.4%。本试验对防控肺炎克雷伯杆菌引起的奶牛乳房炎提供科学的理论依据。     

长春地区奶牛乳房炎主要病原菌的分离鉴定及耐药性分析

为了获取长春地区奶牛乳房炎主要病原菌及其耐药谱系统资料,并为指导临床合理使用抗生素和提高奶牛乳房炎的治愈效果提供理伦依据。本试验研究对长春地区多个奶牛场采集患乳房炎奶牛的231份奶样进行传统细菌生化实验培养,分离鉴定和做药物敏感试验。一共分离出大肠杆菌、葡萄球菌和无乳链球菌3种病原菌208株,其中大肠杆菌54株,耐药菌株为41株,耐药率为17.75%;金黄色葡萄球菌101株,耐药菌株为92株,耐药率为44.23%;无乳链球菌53株,耐药菌株为39株,耐药率为18.75%,其中耐三种以上抗生素的菌株为126株,耐药率为60.58%,且产生了多重耐药性。3种主要病原菌对磺胺类药物、头孢唑林、链霉素、大观霉素、多西环素、庆大霉素、四环素都产生了不同程度的耐药,对万古霉素、左氧氟沙星、环丙沙星敏感,对青霉素、卡那霉素产生了完全耐药性。     

新疆部分地区奶牛乳房炎大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析

[目的]为了解本地区奶牛乳房炎大肠杆菌的流行及耐药情况。[方法]对新疆部分地区奶牛乳房炎大肠杆菌进行分离培养、染色镜检、荧光PCR鉴定,并用纸片法对分离菌株开展药物敏感试验。[结果]从200 份奶牛乳房炎样品中分离出63 株大肠杆菌,分离率为31.5%。分离菌株对青霉素耐药率最高,达到了93.65%,对美罗培南敏感率最高,达到了98.14%,对其他抗生素均有不同程度的耐药。[结论]新疆部分地区奶牛乳房炎中大肠杆菌广泛流行,具有较高的耐药性。     

抚顺某奶牛场隐性乳房炎病原菌耐药性的调查研究

研究旨在确定抚顺某规模化奶牛养殖场隐性乳房炎主要病原耐药情况。试验使用CMT检测法,对该场隐性乳房炎患病情况进行调查;采用鉴别培养基及生化反应鉴定对主要病原菌金黄色葡萄球菌及大肠杆菌进行分离,纸片法评估病原菌分离株对临床常用20种抗菌药物的耐药性。结果显示,该场奶牛隐性乳房炎患病率为4.67%,乳区阳性率为1.96%。研究得到38株金黄色葡萄球菌分离株和31株大肠杆菌分离株,2种病原菌均对磺胺类药物高度耐药,对头孢菌素类药物敏感性较高,且病原菌多药耐药现象较为严重。研究表明,该场奶牛隐性乳房炎患病率相对较低,病原菌耐药性及多药耐药情况相对较为严重。     

新疆阿克苏地区奶牛乳房炎源大肠杆菌毒力基因检测及耐药性分析

为了解新疆阿克苏地区致奶牛乳房炎性大肠杆菌的耐药性及其耐药基因的流行状况,从患有乳房炎的奶牛病例中分离出20株大肠杆菌,采用K-B(Kirby-Bauer)法对其耐药性进行了检测,对其耐药基因进行了分子生物学检测。结果表明:分离菌株对氨苄西林的耐药性最高,耐药率达到了50%,对多西环素、四环素和链霉素的耐药性次之,耐药率为40%,而对环丙沙星、阿米卡星、诺氟沙星则比较敏感;能够检出的毒力基因为astA、escV、eaeA、sepA和hlyA,能够扩增出的耐药基因为tetB、tetC、GyrA、GyrB和ParC。说明新疆阿克苏地区奶牛乳房炎源大肠杆菌主要携带四环素和氟喹诺酮类耐药基因,耐药菌株的耐药基因型与耐药表型呈现正相关。     

辽宁地区奶牛乳房炎细菌性病原分离鉴定及大肠杆菌药敏试验

为了掌握辽宁地区奶牛乳房炎主要细菌性病原种类及致奶牛乳房炎大肠杆菌药物敏感性特征,本研究选取辽宁地区某大型奶牛场75头临床表现为乳房炎的奶样进行细菌培养与分离,通过生化方法对分离到的细菌进行鉴定,并对分离到的奶牛源大肠杆菌进行体外药物敏感性试验研究。结果发现,该场奶牛乳房炎细菌性病原主要为大肠杆菌、葡萄球菌和链球菌,其检出率分别为58.7%、64.0%和54.7%,存在二重感染和三重感染等混合感染的情况。大肠杆菌药物敏感性试验结果表明,该场分离株对磺胺类药物（耐药率>85%）及氯霉素类药物（耐药率>30%）耐药性较高,对氨苄西林（9.5%）、环丙沙星（9.5%）、头孢噻呋（7.1%）和氧氟沙星（4.8%）比较敏感。上述研究结果为该地区奶牛乳房炎的防制提供可靠的理论依据。     

高寒地区奶牛乳房炎凝固酶阴性致病葡萄球菌的分离鉴定及耐药性分析

为调查高寒牧区引起奶牛乳房炎的凝固酶阴性致病葡萄球菌流行现状及耐药情况,本研究对呼伦贝尔地区3个规模化奶牛养殖场采用加州乳房炎测试法(CMT)进行高体细胞牛脂病检测,并采集330份牛奶样品,应用PCR方法、脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型和药敏试验等对样品中的葡萄球菌进行分离鉴定和耐药性分析。结果显示,该地区隐性乳房炎发病率达47.8%,共分离和鉴定出9种葡萄球菌60株(34.5%);60株葡萄球菌分为41个克隆谱型;60株葡萄球菌对青霉素和林可霉素的耐药率较高,分别为40.0%(24/60)和50.0%(30/60),表明这两种药是治疗乳房炎常用药物。本研究为高寒地区致病葡萄球菌引起的奶牛乳房炎临床合理用药及对病原菌的防控提供实验依据和指导。     

无乳链球菌耐药性及耐药基因检测

为了解昆明地区奶牛隐性乳房炎无乳链球菌分离株对常用抗生素的耐药性及耐药基因携带情况,采集昆明某地区隐性乳房炎患牛乳样71份检测。结果显示,分离到的15株无乳链球菌,对青霉素类、红霉素、林可胺类等抗生素存在不同程度的耐药现象,多重耐药现象也比较严重,分离菌共出现10种耐药谱,其中7耐和8耐的占有60%。对青霉素严重耐药,其耐药率达到了100%。其中,PCR扩增β-内酰胺类和大环内酯类耐药基因,结果显示,15株无乳链球菌均含有pbp1a、pbp2b、erm B基因,表明,本地区不能继续使用青霉素等药物来治疗奶牛乳房炎,应选择敏感性的药物,如头孢类抗生素等。同时应合理交叉用药,以防细菌产生耐药性。本试验为昆明地区无乳链球菌引起的隐性奶牛乳房炎的防治提供了一定的依据。     

奶牛隐性乳房炎病原菌的分离鉴定及药敏试验

为了解贵阳市某乳业有限公司奶牛场隐性乳房炎流行情况及其主要病原菌,采用CMT方法检出隐性乳房炎乳样后,对阳性乳样进行细菌分离与鉴定,同时对其主要病原菌进行了体外药敏试验。结果表明,该公司奶牛场隐性乳房炎的感染率为40％,主要病原菌为葡萄球菌属和链球菌属细菌,其敏感的抗菌药物有先锋V霉素、利福平、丙氟哌酸、氟哌酸、新霉素、卡那霉素、庆大霉素等,经临床用药观察,有效地控制了该公司奶牛场隐性乳房炎。     

Isolation and Identification of Pathogenic Bacteria Causing Dairy Cow Mastitis in Liaoning and Drug Sensibility Test of Pathogenic E.coli

In order to understand the main bacterial pathogen species causing dairy cow mastitis in Liaoning, as well as the characteristics of drug sensitivity of the pathogenic E.coli,the milk samples from 75 dairy cows with clinical manifestations for mastitis in certain large-scale dairy farm in Liaoning were collected.The bacteria in milk were cultured and isolated with biochemical methods and in vitro drug sensitivity tests were processed with the isolated E.coli strains.The results showed that the main bacterial pathogen for dairy cow mastitis were E.coli（separation rate 58.7%),S.aureus（64.0%）and S.agalactiae（54.7%),and multiple infection including double and triple infection were identified.The drug sensitivity tests on the isolated E.coli indicated that the E.coli isolates were highly resistant to sulfonamides（resistance rate>85%）and chloramphenicol（resistance rate>30%),and they were relatively low resistant to ampicillin（9.5%),ciprofloxacin（9.5%),ceftiofur（7.1%）and ofloxacin（4.8%).The results was able to provide reliable theoretical basis for prevention and control of dairy cow mastitis in Liaoning area.     

新疆石河子奶牛隐性乳房炎源金黄色葡萄球菌的分离鉴定及药物敏感性分析

为了解石河子地区部分规模化奶牛场奶牛隐性乳房炎源金黄色葡萄球菌的生物学特性及药物敏感性,为科学防治该病的发生提供参考依据,本试验选择了石河子周边地区不同规模的11个奶牛场,通过采用LMT法检测其隐性乳房炎的感染率,并从采集到的313份隐性乳房炎奶样中分离鉴定金黄色葡萄球菌,同时采用纸片扩散法（K－B法）对分离株的药物敏感性进行了分析。结果表明,试验区奶牛隐性乳房炎的总阳性率为44．56％（869／1950）,金黄色葡萄球菌的分离率为44．71％（93／208）;药敏试验结果表明,大部分菌株对阿莫西林、红霉素、四环素表现为高度耐药,耐药率分别为92．30％（24／26）、80．77％（21／26）、80．77％（21／26）;对庆大霉素、氧氟沙星、头孢唑啉表现为敏感,敏感率分别为57．70％（15／26）、76．92％（20／26）、76．92％（20／26）;部分菌株对克林霉素中度敏感,敏感率为46．15％（12／26）。建议在选用抗生素治疗奶牛隐性乳房炎时,以流行菌株的药物敏感性为依据。     

辽宁地区奶牛乳房炎源大肠杆菌毒力基因及耐药基因检测分析

为了掌握辽宁地区规模奶牛场乳房炎源大肠杆菌携带的毒力基因和耐药基因,为奶牛养殖业提供更好的乳房炎防制方案,本研究采用PCR检测方法对辽宁地区多个规模奶牛场临床奶牛乳房炎奶样中分离的66株大肠杆菌进行了4种毒力基因和4种耐药基因的检测分析。结果发现,66株大肠杆菌中仅有1株未检出相关目的基因,其余65株中最少检出2种目的基因,最多检出7种目的基因。其中,毒力基因stx2e、eaeA、K99和astA的检出率分别为56.1%、47.0%、34.8%和31.8%,双重毒力基因的检出率达到43.9%,以eaeA/stx2e基因型的检出率最高;耐药基因sul3、sul1、cmlA及aacA4的检出率分别为87.9%、83.3%、40.9%和28.8%,双重耐药基因的检出率为36.4%,以sul1/sul3基因型检出率最高;三重耐药基因的检出率为37.9%,以cmlA/sul1/sul3检出率最高。本研究结果证实,辽宁地区奶牛乳房炎源大肠杆菌携带磺胺类耐药基因和氯霉素类耐药基因的比率较高,与大肠杆菌的耐药性有较直接的关系,该结果对于辽宁地区奶牛乳房炎的防制具有重要的指导意义,更具有重要的公共卫生意义。     

Detection and Analysis of Virulence Genes and Drug Resistance Genes in E. coli Strains Isolated from Dairy Cows with Clinical Mastitis in Liaoning Region

In order to understand the virulence genes and drug resistance genes carried by E.coli strains from dairy cows with mastitis in large-scale dairy farms in Liaoning region, and also provide improved programs for control and treatment of mastitis to dairy farmers, 66 strains of E.coli isolated from milk of dairy cows with clinical mastitis in several large-scale farms in Liaoning region were examined to detect 4 virulence genes and 4 drug resistance genes using PCR methods. The results showed that none of the target genes was detected in only one strain, while at least 2 and up to 7 target genes were detected in the rest of 65 strains. The detection rates of the virulence genes stx2e, eaeA, K99 and astA were 56.1%, 47.0%, 34.8% and 31.8%, respectively. In addition, the detection rate of dual virulence gene reached 43.9%, in which the genotype with the highest detection rate was eaeA/stx2e. The detection rates of the drug resistance genes sul3, sul1, cmlA and aacA4 were 87.9%, 83.3%, 40.9% and 28.8%, respectively. And the dual resistance gene detection rate was 36.4%, in which the highest detection rate was sul1/sul3 genotype; Triple drug resistance gene detection rate was 37.9%, and cmlA/sul1/sul3 presented the highest detection rate. These results confirmed that the E.coli isolated from dairy cow mastitis in large-scale dairy farms in Liaoning region had high detecting rates of sulfonamide resistance genes and chloramphenicol resistance genes, which was directly related to the drug resistance of the E.coli. These results provided important guiding significance for the prevention and control of dairy cow mastitis in Liaoning region as well as the safety of public health.     

石河子地区隐性乳房炎奶牛源大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析

为了解引起石河子地区规模化奶牛场隐性乳房炎奶牛源大肠杆菌的流行情况及其耐药性,本试验采用兰州乳房炎检测板(Lanzhou mastitis test,LMT)对石河子地区11个规模化奶牛场进行了检测,同时对无菌采集的检测为阳性的乳样进行了大肠杆菌分离鉴定及耐药性分析.结果显示,石河子地区11个规模化奶牛场的隐性乳房炎感染阳性率为44.56%(313/1950);对313份无菌采集的乳样进行细菌分离鉴定,结果共分离出病原菌108株,其中大肠杆分离率为14.81%(16/108);药敏试验结果显示16株大肠杆菌对氧氟沙星、头孢唑啉、克林霉素高度敏感,对庆大霉素、氨苄西林、链霉素中度敏感,对阿莫西林、四环素有耐药性.本试验为该地区大肠杆菌源性隐性乳房炎的防制提供科学依据.     

2017年上海、河北地区奶牛乳房炎克雷伯菌分离鉴定及耐药性分析

为了摸清上海和河北地区奶牛乳房炎的主要致病菌克雷伯菌的分离率及其耐药情况,对采集自上海和河北两地的乳房炎患病奶牛乳样进行克雷伯菌的分离培养和形态学、分子生物学鉴定,并选择临床常用的抗生素对分离得到的克雷伯菌进行药敏试验。经革兰染色、镜检以及分子生物学鉴定发现,采集自上海地区的100份乳房炎患病奶牛乳样中有18份乳样存在克雷伯菌,分离率为18%;采集自河北地区的100份乳房炎患病奶牛乳样中有14份乳样存在克雷伯菌,分离率为14%;且上海和河北地区2017年下半年乳房炎患病奶牛乳样中克雷伯菌分离率均高于上半年。药敏试验结果表明,该试验分离得到的克雷伯菌对所测试的抗生素存在不同程度的耐药性,其中,单一耐药菌株占21.88%,多重耐药菌株占53.13%,全部敏感的菌株占12.50%。由该试验结果可以得出,上海、河北地区奶牛发生的乳房炎是与克雷伯菌感染有关;且分离得到的克雷伯菌对临床常用的抗生素存在不同程度的耐药性。在动物生产和兽医临床上应及时监控克雷伯菌的流行趋势和耐药性变迁,并合理使用抗生素以减少耐药菌株的产生。     

山东地区乳房炎牛奶中大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析

试验旨在了解山东地区乳房炎牛奶中大肠杆菌的污染状况及耐药情况。选择山东省3个地区的规模化奶牛场共采集227份牛奶样品,采用细菌学方法对大肠杆菌进行分离鉴定,用微量肉汤稀释法检测分离菌对11种常规抗菌药物的敏感性,采用PCR方法对常见的13种耐药基因、8种毒力基因和Ⅰ类整合子基因盒结构进行分析。结果显示,从227份牛奶样品中共分离出71株大肠杆菌;大肠杆菌对1种及1种以上抗菌药耐药的菌株达到77.5%,多重耐药率为15.5%,其中对多黏菌素耐药率为52.2%,对阿莫西林-克拉维酸耐药率为39.4%,而所有菌株均对新霉素表现为敏感。PCR检测耐药基因、毒力基因和Ⅰ类整合子结果显示,β-内酰胺类耐药基因中blaTEM基因携带率为100%,其中全部为blaTEM-1基因,blaCTX-M基因携带率为32.4%,其中主要为blaCTX-M-15基因,没有检测到blaSHV、blaOXA基因;多黏菌素的耐药基因mcr-1携带率为29.6%;喹诺酮类耐药基因中aac(6’)-Ⅰb-cr基因携带率为29.6%,qnrB基因携带率为20.8%,没有检测到qnrA和qnrC耐药基因;对8种毒力基因检测分析结果显示,仅Hly毒力基因没有被检出,Ecs3703、Irp2基因的检出率较高,分别为90.1%和63.4%,71株大肠杆菌中共有11株携带Ⅰ类整合子,检出率为15.5%,11株大肠杆菌携带6种耐药基因盒结构,最主要的耐药基因盒排列为dfr17-aadA5。本研究结果表明,山东地区乳房炎牛奶中大肠杆菌的耐药现象严重,携带毒力基因Ecs3703、Irp2的大肠杆菌可能是引起奶牛乳房炎的致病菌,Ⅰ类整合子的检测在细菌耐药性与基因携带率方面发挥着关键作用,可为临床预防和治疗奶牛乳房炎大肠杆菌病提供理论依据。