用牦牛睾丸细胞生产羊传染性脓疱皮炎疫苗效果观察

为满足生产批量化要求，用牦牛睾丸细胞代替犊牛睾丸细胞，接种G0-BT弱毒株，收获，加适当保护剂，经冷冻真空干燥制备羊传染性脓疱皮炎疫苗。结果半成品及成品检验均符合《规程》标准，取得了良好的效果。     

奶山羊睾丸组织冷冻保存及复苏后精原干细胞的分离培养

以关中奶山羊为材料,比较了2种玻璃化冷冻法和1种慢速冷冻法对睾丸组织保存的效率,复苏后发现3种冻存方法均有较高的成活率(超过50%),其中玻璃化Ⅱ组达65%以上,培养及检测后均有精原干细胞存活,在体外培养可以形成胚胎干细胞样克隆,其表达精原干细胞和多能性干细胞的相关特异性标记:碱性磷酸酶(AP)、CD49f、CD133、C-Myc、Oct4和Klf4阳性,证明睾丸组织冷冻可以提供一种有效的奶山羊精原干细胞的保存方法。试验中所使用的低温保存方法简便易行,效果良好,表明这些方法可为癌症治疗等造成的无精症及少精症等不育症患者的医治以及一些珍稀濒危物种和优良畜禽的生殖细胞保存提供一种简捷有效的途径。     

山羊睾丸生精细胞体外培养和鉴定

试验采用两步酶消化法对2月龄公羔睾丸进行处理,得到了总数为7.44×109的生精细胞悬液,经台盼蓝染色,细胞活率在90％以上;支持细胞的贴壁性极好,生精细胞附着在支持细胞上,随着培养时间延长,生精细胞、支持细胞逐渐退化,呈现“集合”的趋势,细胞数量逐渐减少;经BrdU标记、H.E.染色,检测培养的生精细胞到分化到圆形精子细胞阶段,表明成功构建了山羊睾丸生精细胞共培养体系,可为后续深入研究山羊精子体外成熟培养提供一定的实验依据.     

牦牛与犏牛睾丸支持细胞分离培养及生物学特性比较分析

旨在建立牦牛与犏牛睾丸支持细胞分离培养及鉴定方案,比较两种牛睾丸支持细胞的生物学特性.本研究分别采集24月龄的3头健康公牦牛与3头F1代公犏牛睾丸组织作为2个样品组,其中每组3个生物学重复,分别通过混合酶消化、差速贴壁和饥饿处理分离得到两种牛的睾丸支持细胞,采用DMEM高糖及DMEM/F12培养基培养睾丸支持细胞,筛选...     

鸡囊胚细胞玻璃化冷冻保存技术的研究

研究不同冷冻液配方对鸡囊胚细胞的玻璃化冷冻保存效果。对新鲜种蛋囊胚细胞分离提纯后,在DMEM中添加不同的冷冻保护剂DMSO（二甲基亚砜）、EG（乙二醇）、蔗糖,分别组成6种玻璃化冷冻保护液,进行超低温冷冻保存。复苏后通过苔盼蓝染色测定活细胞存活率。结果：玻璃化冷冻保存中,囊胚细胞在玻璃化冷冻液配方2（10％EG＋10％DMSO＋0．5mol／L蔗糖＋20％FBS＋DMEM）条件下复苏后存活率最高（71．32％）,与玻璃化冷冻液配方1和3条件下复苏后存活率之间差异显著（P〈0．05）,且与玻璃化冷冻液配方4、5、6条件下复苏后存活率之间差异均极显著（P〈0．01）,可以作为鸡囊胚细胞的玻璃化冷冻液。     

冷冻保存新生牛睾丸组织中支持细胞的分离纯化

睾丸支持细胞(sertoli cells,SCs)是生精上皮中的多功能体细胞,其分离培养对体外探讨精子发生机理至关重要。因牛新鲜睾丸组织取材不便,本试验在前期基础上探讨了从冷冻保存的新生牛睾丸组织中分离纯化SCs的可行性。将冻存的1日龄牛睾丸组织复苏,进行形态学检查和SCs分离培养。石蜡切片苏木精-伊红(HE)染色显示,曲细精索及睾丸间质保存完好。二步酶消化结果显示,生精上皮解离良好。利用差异贴壁法将原代细胞纯化后扩大培养,绝大多数细胞呈不规则多边形,3d即可生长至汇合。RT-PCR分析显示,贴壁细胞表达SCs阳性分子标记胶质细胞源神经营养因子(GDNF)和雄性激素结合蛋白(ABP)而不表达精原细胞分子标记PLZF。流式细胞术检测显示,所获细胞中ABP和GDNF阳性细胞数分别为99.7%和99.8%。以上结果表明,从冻存的新生牛睾丸组织中可获高纯度的SCs。本试验结果为后续相关试验奠定了基础。     

卵巢组织玻璃化冷冻保存的研究进展

就目前卵巢组织玻璃化冷冻保存的发展状况及影响卵巢冻融成功的因素等几个方面进行综述,并对卵巢组织冷冻保存所存在的问题及今后研究方向提出了自己的看法。     

牦牛睾丸附睾LDH同工酶表达模式的研究

利用比色法和聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对６、１２、１８、２４月龄半血野牦牛,横交半血野牦牛和家牦牛睾丸、附睾组织ＬＤＨ同工酶活性及谱带表达进行测析。结果表明,睾丸、附睾ＬＤＨ在相同月龄其表达模式不同,６月龄睾丸ＬＤＨ有四条酶谱,活性百分率依次（ＬＤＨ１〉ＬＤＨ３〉ＬＤＨ２〉ＬＤＨ４）附睾只有三条酶谱（ＬＤＨ１〉ＬＤＨ２〉ＬＤＨ３）;到１２、１８月龄时,睾丸ＬＤＨ有五条酶谱（ＬＤＨ１〉ＬＤＨ３〉ＬＤＨ４     

牦牛及其与黄牛杂交代睾丸的比较研究

对牦牛和牦牛与黄牛杂交1－3代牛的睾丸进行了比较组织学的研究，结果表明：F1代牛睾丸中可见少量的初级精母细胞，F2代牛睾丸中可见少量的次级精母细胞和精子细胞，F3代牛睾丸中具备各级生精细胞和精子。     

用液氮冷冻保存犊牛睾丸原质细胞

进行了液氮冷冻保存犊牛睾丸原质细胞的试验.共制备了3批冷冻细胞,每批均包括原质细胞、原代细胞和次代细胞,并将其分别放入I号冷冻液和II号冷冻液中冻存.试验表明,用冻存方法保存犊牛睾丸原质细胞是切实可行的,而且用I号冷冻液冻存细胞的复活率明显高于II号冷冻液.     

成年牛睾丸组织体外无血清培养研究

为研究促进精子发生的体外培养体系,通过无血清睾丸组织培养法,将成年牛睾丸组织块种植于培养板, 观测不同时间睾丸细胞的迁出和形态变化。通过油红O染色鉴定具有分泌功能的支持细胞,通过碱性磷酸酶和免疫组化染色鉴定集落样生长的精原干细胞。结果发现该体系可获得生长良好的多种类型细胞,包括表达AP、Oct-4和GFRα1的精原干细胞及具有分泌功能的睾丸支持细胞,并可获得大量精子。说明,该无血清培养体系可作为一个重要的工具来研究生物学和化学因素对雄性生殖系统的影响,也为研究精子体外发生和移植提供了材料。     

新生牛生精上皮细胞体外培养的研究

两步酶消化法制备新生牛生精上皮细胞悬液,分离纯化、鉴定精原干细胞和支持细胞,冷冻保存支持细胞。以支持细胞为饲养层探索不同培养条件下精原干细胞的增殖情况,免疫组化鉴定。结果表明:10%DMSO与0.1mol/L的海藻糖组合作为冷冻保护剂,冷冻效果较好;血清浓度为2.5%、支持细胞密度为5×105个/mL时,新生牛精原干细胞较易形成集落;精原干细胞及其集落的AKP染色和C-kit免疫组化均呈阳性。     

牦牛DNA分子遗传标记的研究

本文在归纳总结DNA分子遗传标记的类型、特点和检出方式的基础上,分析讨论了动物遗传育种研究中常用的DNA分子遗传标记如RFLP标记、VNTR标记、AFLP标记、PCR-SSCP标记、RAPD标记、SNPs标记、微卫星标记、DNA指纹标记及mtDNA标记等在牦牛遗传育种研究中的研究现状和存在的问题,指出DNA分子标记在牦牛遗传育种研究中已渗透到牦牛品种的起源、演化和分类研究;牦牛品种间或品种内个体间以及与其他种间亲缘关系鉴定;犏牛雄性不育的机理研究及牦牛经济性状功能基因的克隆和多态性研究等方面。最后探讨了今后的研究趋势和发展前景。     

牦牛输卵管上皮细胞和卵泡颗粒细胞的培养

分离培养牦牛输卵管上皮细胞和卵泡颗粒细胞的目的是克服体外受精中早期胚胎发育阻断,建立有利于牦牛早期胚胎体外发育的共培养体系.采集牦牛输卵管上皮细胞进行原代及传代培养,同时从卵泡液中获取颗粒细胞进行原代培养,培养过程中观察2种细胞的生长方式和形态特点.输卵管上皮细胞贴壁生长时,呈多边形,且呈单层成簇生长.培养144 h～216 h,可形成细胞单层.颗粒细胞贴壁生长时,呈现聚集生长特性,贴壁细胞形状不规则,呈放射状.培养72 h～96 h,形成颗粒细胞单层.     

娟姗牛改良牦牛效果浅析

本文测定了娟姗牛改良牦牛的效果,分析了牦牛改良繁活率低的原因,提出了牦牛乳用改良的措施。     

Study on Production and Quality of Hair for Wild Yak with Domestic Yak

Production of hair and undercoat, type of yak hair fibre, strength, stretched length and ultrastructure of the hair fibre were determined and observed for WY, DY and its offspring in this study. The results showed that hair yield of the 1/2 WY raised by 19.73% and the undercoat by 14% (P＜0. 01)more than that of the DY. Its strength improved 8. 31% (P＞0.05) more than that of the DY. The stretched length and the ultrastructure of hair fibre were resemblance in the WY and DY.     

黄花苜蓿游离细胞培养的初步研究

以黄花苜蓿(Medicago hispida)下胚轴和子叶来源的愈伤组织为材料,进行悬浮细胞振荡培养,经200目尼龙网过滤后得到游离的单细胞。这些细胞作浅层培养、可获得小细胞团。实验还观察到悬浮细胞存在多种形态,对其成因及繁殖方式作了简要讨论。     

Study on The Blood Physiological Indices of Wild Yak, Domestic Yak and Their Crossbreeds

Some blood physiological indices were determined in wild yak,Datong yak(the crossbreeds of the wild and domestic yak)and Tianzhu Black yak in a year. The red blood cell amount(RBC)and packed cell volume (PCV)of the wild yak and Datong yak were similar but differed largely from that of the Tianzhu Black yak. RBC of the wild yak and Datong yak were larger than that of the Tianzhu Black yak and their RBC varied seasonally.The results indicated that wild yak and Datong yak could effectively adapt to changes in environment by adjusting their physiological indices.     

鸡胚原始生殖细胞的冷冻保存和体外培养

采用Ficoll密度梯度离心,提取第19期(孵化72h)鸡受精蛋性腺中的原始生殖细胞(primordialgermcells,PGCs),用不同的冷冻保护液对PGCs采用提纯后直接冷冻保存和在培养体系中培养24h后再进行冷冻保存,7d后复苏,用台盼蓝染色检测其存活率,并用PAS染色对冷冻后的PGCs进行特异性鉴定。复苏后的PGCs在培养体系中培养5d后,更换为培养体系继续培养,进行体外分化试验。结果如下分离后直接进行冷冻保存的PGCs复苏后存活率最高为(85.93±1.24)%;复苏后的PGCs在培养体系中培养48h后进行了PAS染色鉴定,结果PGCs呈PAS阳性(细胞核不着色,细胞质呈红色),表明PGCs的染色特性没有因冷冻保存和体外培养而发生改变;复苏后的PGCs在培养体系中培养可形成细胞克隆,当把PGCs更换到培养体系培养5d后,PGCs克隆有的仍保持克隆状态,但体积缩小,克隆中细胞排列紧密,颜色较深,有的克隆由鸟巢状变为不规则形,且在克隆周围形成类神经细胞样细胞。而经体外培养后再进行冷冻保存的PGCs,复苏后存活率最高为(42.26±1.36)%。     

牦牛GPX5基因CDS区的克隆和表达研究

GPX5作为谷胱甘肽过氧化物酶的成员之一,表达于牦牛附睾之中,其主要作用为抗氧化应激。本实验旨在通过分子技术对牦牛GPX5基因进行克隆,分析其生物信息学的特征和附睾组织的表达特点。结果显示:牦牛GPX5基因CDS区有630 bp、209个氨基酸被编码,所编码蛋白带正电,具有亲水性且不稳定,无跨膜域却存在信号肽;GPX5基因在附睾头的表达高于附睾的颈和尾(P<0.01)。牦牛附睾中的GPX5能有效抵抗氧化应激以保护精子。