感染赤星病后不同烟草品种叶片防御酶的变化

研究了云烟87,K326,Beinhart1000-1 3个烟草品种被赤星病菌侵染后烟草叶片相关防御酶的变化,包括氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)、多酚氧化酶(PPO)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)、β-1,3葡聚糖酶(GLU)、几丁质酶(CHT),以期通过防御相关酶活性变化规律与赤星病侵染过程、品种抗病性的关系,揭示不同烟草品种对赤星病的抗病机制.结果表明,在受赤星病菌侵染后,抗病品种Beinhart1000-1在接种赤星病菌后,SOD,POD,PAL活性迅速升高并高于对照,但CAT活性在Beinhart1000-1中基本低于对照,GLU活性变化明显大于感病品种.赤星病菌侵染烟草后,烟草体内的防御酶发生变化,这些防御酶活性变化可作为烟草对赤星病抗性鉴定的生理指标.     

贵州省烟草赤星病菌生物学特性研究

烟草赤星病是发生较严重的一种常见烟草病害,为了模拟室外不同的气象条件下烟草赤星病的最适发生环境,对贵州省烟草赤星病菌的生物学特性进行研究。结果表明,温度为25℃、湿度达到100%、黑暗的条件最适合烟草赤星病菌生存;ZA培养基最适宜赤星菌菌丝生长,而OA培养基最适宜赤星菌产孢。赤星病菌的生长随温度、湿度的增加而增加,在到达一定数值后逐渐下降。利用SPSS软件建立了温度和湿度对烟草赤星病菌落平均直径增长量的的回归方程,分别为:y=0.015x2+0.0158x-0.04,y=-0.001x2+0.213x-4.666。     

产几丁质酶内生细菌的筛选及对烟草赤星病菌的抑制作用

从健康烟草叶片中筛选出1株产几丁质酶活性较高的内生细菌FEC-1。FEC-1菌及其代谢产物对烟草赤星病菌菌丝生长均有明显抑制作用,在PDA平板上27℃培养5 d后抑菌带宽为12.6 mm,被抑制的赤星病菌菌落边缘菌丝生长畸形、膨大呈结节状。FEC-1菌代谢产物对病菌孢子萌发呈明显的抑制作用,随代谢产物浓度提高,抑菌能力显著增强,随培养时间延长,抑菌能力降低。但试验中没有观察到菌丝细胞壁溃解、细胞质浓缩、菌丝细胞质凝聚成颗粒状并外渗等显著的几丁质酶作用病原真菌的特征。因此,该菌抑制烟草赤星病菌的机理还有待进一步研究。     

烟草赤星病菌拮抗菌发酵液的防病作用

以拮抗烟草赤星病菌的两株放线菌SZF2和SZF7为材料,对其发酵液防赤星病菌的效果及机理进行了初步研究.结果表明,SZF2和SZF7的无菌发酵液能抑制烟草赤星病原菌孢子萌发,同时还能激发烟草产生过量过氧化物酶(POD)和多酚氧化酶(PPO),从而提高烟草对赤星病菌的抗性.离体和盆栽试验结果表明,SZF2和SZF7的发酵液可明显降低烟草赤星病的病情指数,其盆栽试验相对防效分别为48.94%和50.13%.     

天竺葵提取物对黄瓜病菌的抑制作用

采用天竺葵(Pelargonium hortorum)叶片提取物对黄瓜的镰刀菌(Fusarium oxyporum)、链格孢菌(Alternaria cucumerina)、蔓枯病菌(Ascochyta citrullina)进行抑菌实验.结果表明,天竺葵提取物对3种黄瓜病菌的菌丝生长均有一定的抑制作用,且抑制效果与提取物浓度呈正相关,提取物对蔓枯菌菌丝生长的抑制作用最强,对镰刀菌菌丝生长的抑制作用次之,对链格孢菌菌丝生长的抑制效果最弱.     

补骨脂提取物对苹果腐烂病菌的抑制作用

通过液体培养方法研究补骨脂提取物对苹果腐烂病菌菌丝生长的抑制作用.同时探究补骨脂提取物对病原菌菌丝体内几丁质酶及β-1,3葡聚糖酶活性的影响.结果表明:当补骨脂提取物浓度为5,10,20,加,80 mg·L1时,对苹果腐烂病菌菌丝干重的抑制率分别为39.8%,62.3%,79.4%,90.6%,98.3%;用50mg·L-1补骨脂提取物处理在液体培养3d的苹果腐烂病菌,处理后1,3,6,12h菌体内几丁质酶活性分别为对照的1.32,3.62,3-34,2.47倍;β-1,3葡聚糖酶活性分别为对照的4.78,9.98,5.83,3.53倍.由此表明,补骨脂提取物对苹果腐烂病菌具有明显的抑制作用.     

灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)次生代谢产物的抑菌活性初步研究

用生长速率法及抑菌圈法测定了灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)高产菌株次生代谢产物提取物对6种植物病原菌的抑菌活性。结果表明,灰葡萄孢菌的提取物对稻瘟病菌(Pyricularia oryzae)、烟草赤星病菌(Alternaria alter-nata)、番茄早疫病菌(Alternaria solani)和梨黑星病菌(Venturia nashicola)的菌丝生长有明显的抑制作用,能够完全抑制菌丝生长的浓度分别为2、2、4和8mg/mL,EC50则分别为0.1039、0.3816、0.8418和1.4950mg/mL。对烟草野火病菌(Pseudomonas syuringae pv.tabaco)、白菜软腐病菌(Erwinia carotovora)2种细菌也有抑制作用,在浓度为2mg/mL时,抑菌圈直径均为2.8cm。     

宜宾烤烟赤星病致病力分化、生物学特性及抑菌药剂筛选研究

为了使生产上对烟草赤星病的防治更有针对性,对采自宜宾市烤烟种植区的具有典型赤星病症状的烟叶样品进行了组织分离、培养和形态特征观察。采用菌丝块创伤接种法测定分离菌株的致病性,同时采用菌丝生长速率法测定了不同致病力的菌株xs-k-1(较强)、xz-k-1(中)和xf-y-1(弱)的生物学特性及4种杀菌剂对较强致病力菌株xs-k-1的室内抑制效果。结果表明:21个菌株均属于链格孢菌,但各菌株间的致病力有明显的差异,平均病情指数为18.75~71.25,其中以中等致病力类型的菌株为主,占测试菌株的61.9%,弱致病力类型和较强致病力类型的菌株所占比例相当,未发现强致病力和不致病力菌株。在人工培育条件下,烟草赤星病菌在7~35℃的温度范围内均能生长和产孢,最适宜的生长和产孢温度为21~28℃;高湿度有利于病菌的生长和产孢,当湿度为100%时,病菌生长和产孢量最高,分别为5.83 cm和4.18×105个·m L-1;在p H值4~10的范围内该病菌均能生长和产孢,适宜p H值范围为7~8.5,其中病菌生长的最适p H值为8.5,产孢量最大的p H值为7。供试药剂的室内平板抑菌效果为:10%多抗霉素60%唑醚·代森联50%氯溴异氰尿酸40%菌核净,10%多抗霉素的EC50为15.182μg·m L-1。     

外源DNA导入烟草后D_2代植株抗病性鉴定和酶活性的测定

提取抗赤星病烤烟CV87的总DNA ,采用花粉管通道法导入感赤星病烤烟NC89。D1代筛选出的优良株收种并种植后得到D2 代 ,对其活体接种赤星病菌 ,检测其抗病性 ,并于接菌前后测定叶片过氧化物酶活性。结果表明 :接菌的 10个株系有 3个株系的抗病性与供体亲本CV87相似 ,并显著高于受体亲本NC89;抗病性强的个体接菌后其过氧化物酶活性较接菌前有明显升高 ,与CV87没有明显差异。但CV87的过氧化物酶活性在接菌前后没有明显变化 ,说明其接菌前就表现高的活性     

烟草赤星病原菌生物学特性及致病性研究

从安徽凤阳采集具有典型烟草赤星病状烟株分离纯化得到烟草赤星病菌,并对烟草赤星病菌进行生物学特性及致病性研究。结果表明,该菌生长温度为10～35℃,最适生长温度为25℃;分生孢子和菌丝致死温度分别为50℃和49℃;光照12h/d时有利于菌丝生长和孢子产生;孢子悬浮液棉球接种和菌丝块接种均有利于引致云烟87成株期发病,所致病斑直径平均分别为5.73 mm和5.23mm,且平均病叶率分别为78.3%和72.33%。     

烟草赤星病菌苗期人工接种方法的研究

以红大和K326为供试烟草品种,以烟草赤星病菌强致病力菌株GY-31为供试菌株,采用茼丝块接种、孢子喷雾接种、孢子液棉球接种、孢子悬滴接种和茵丝悬滴接种等5种方法接种烟草7叶期幼苗,结果表明.孢子液棉球接种和茵丝块接种在2个烟草品种上都能引致发病,而且重复性好,适用于烟草赤星病苗期接种;孢子喷雾接种和孢子悬滴接种成功率低,茵丝悬滴接种在红大上引致叶片枯萎,在K326上未引起发病,重复性差,均不适合于烟草赤星病苗期接种.进一步研究孢子悬浮液浓度和湿度对孢子液棉球接种法接种效果的影响,结果显示.在供试孢子悬浮液浓度范围内,接种所致病叶率随着孢子悬浮液浓度的增大而提高;悬浮液浓度低于104个·mL-1,接种所致病叶率低于35%;悬浮液浓度为105～107个·mL-1,接种所致病叶率为70%～92%;接种后保湿能显著提高接种所致病叶率.     

拮抗菌Ata 28对烟草赤星病菌的抑制及种类鉴定

从烟草叶片上分离到的细菌Ata 28经鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),通过平板对峙培养,测定其对不同致病力的烟草赤星病菌(Alternaria alternata(Fries) Keissler)均有拮抗作用,抑菌带的宽度达8.4 mm;在温室中进一步进行盆栽控病试验,防治效果为75.8%.无菌滤液试验表明,拮抗菌Ata 28的无菌滤液在一定浓度范围内均能有效地抑制赤星病菌菌丝生长,减少孢子萌发,且浓度越高,抑制能力越强.     

拮抗菌Ata 28对烟草赤星病菌的抑制及种类鉴定

从烟草叶片上分离到的细菌Ata28经鉴定为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）,通过平板对峙培养,测定其对不同致病力的烟草赤星病菌（Affernaria alternata （Fries）Keissler）均有拮抗作用,抑菌带的宽度达8．4mm;在温室中进一步进行盆栽控病试验,防治效果为75.8％．无菌滤液试验表明,拮抗菌Ata28的无菌滤液在一定浓度范围内均能有效地抑制赤星病菌菌丝生长,减少孢子萌发,且浓度越高,抑制能力越强．     

短小芽孢杆菌AR03挥发性有机物的抑菌活性及其组分分析

【目的】对分离自烟草根际土壤中的一株短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)AR03菌株产生的挥发性有机物进行抑菌活性测定和组分分析。【方法】采用培养皿对扣熏蒸法和凹玻片孢子萌发法测定挥发性有机物对烟草黑胫病菌(Phytophthora parasitica var.nicotianae)和赤星病菌(Alternaria alternata)菌落、菌丝生长以及孢子萌发的影响,采用离体叶片接种法测定挥发性有机物对烟草黑胫病和赤星病的防治效果;采用顶空加热法收集抑菌挥发性有机物,对其进行气相色谱-质谱(GC-MS)检测,并结合保留指数(retention index,RI)和内标(internal standard,IS)1-十五烯对其组分进行定性和定量分析。【结果】短小芽孢杆菌AR03菌株分泌的挥发性有机物对供试的两种病原真菌均具有一定的抑制作用,表现为经处理后的烟草黑胫病菌菌丝生长稀疏缓慢变粗、分支增多且扭曲、断裂;赤星病菌菌丝生长畸形,其上不产生分生孢子梗,内含物大部分聚集成团导致菌丝干瘪、缢缩。对峙培养2、4、6和8 d时,挥发物对黑胫病菌和赤星病菌菌丝生长的抑制率分别为56.21%和59.23%、64.75%和59.86%、66.13%和61.10%、67.04%和70.00%;对黑胫病菌游动孢子和赤星病菌分生孢子的抑制作用表现为延迟萌发且萌发后的芽管生长缓慢;黑胫病菌产生孢子囊数明显减少,赤星病菌分生孢子各分隔处的细胞畸形肿胀成泡状。离体叶片抗病测定结果显示,挥发性有机物抑制黑胫病菌和赤星病菌病斑在叶片的扩展,对峙熏蒸40 h时,对照叶片黑胫病的发病率为92.50%,圆形坏死病斑直径是25.10 mm,经挥发物处理后叶片发病率为70.83%,病斑直径为9.45 mm,对黑胫病斑扩散的抑制率为62.35%;对峙熏蒸80 h时,对照叶片赤星病的发病率为88.33%,病斑扩散为近圆形的褐色坏死斑,平均直径为8.32 mm,经挥发物处理后赤星病的发病率为60.80%,病斑扩展较慢,平均直径为2.85 mm,挥发物对赤星病斑扩散的抑制率为65.75%。SPME GC-MS分析表明,AR03菌株胞外分泌7种组分挥发性物质,均为C15H24结构的倍半萜烯类化合物,分别是二氢姜黄烯、(E)-β-金合欢烯、γ-姜黄烯、α-姜烯、π-红没药烯、β-倍半萜水芹烯和γ-E-红没药烯;AR03培养1 d后,其中β-倍半萜水芹烯相对含量最高,为80.64%,其次为(E)-β-金合欢烯和α-姜烯,相对含量分别为7.20%和6.67%;随着AR03培养时间的延长,各组分种类相同,但相对含量差异较大,除二氢姜黄烯含量保持基本不变外,其他组分含量呈递减趋势,培养至第6天时,各组分含量下降超过50%。【结论】短小芽孢杆菌AR03菌株能够产生具有较强抑菌活性的挥发性有机物,有潜力作为开发抗真菌代谢物和新药物的重要微生物资源。     

烟草赤星病生防菌的鉴定及其抑菌机理

由交替链格孢（Alternaria alternata）引起的烟草赤星病是烟草生长中后期重要的叶部病害，直接影响烟叶的产量和品质。为开发烟草赤星病的生防制剂，对生防菌XNB-01进行了多相分类鉴定，并通过盆栽试验、粗提物的抑菌机理等研究，进一步阐明了XNB-01的生防机理。皿内对峙结果表明，XNB-01对交替链格孢的抑菌半径达到 11.0 mm。菌株XNB-01短杆状，与Paenibacillus polymyxa ATTCC 842相似性为98.63%。次生代谢产物检测结果表明，XNB-01可以分泌多种真菌细胞壁降解酶，并具有溶解有机磷、解钾的能力。盆栽试验结果表明，XNB-01在 1×10⁴_{8 CFU/mL的施用浓度下显著增加了烟草幼苗的株高、鲜质量和干质量；在1×10⁹ CFU/mL的施用浓度下显著降低了烟草赤星病的病情指数，防效为60.94%，与菌核净（65.33%）相当。此外，XNB-01 的胞内粗提物可抑制交替链格孢菌丝的生长和孢子萌发，使菌丝膨大，孢子皱缩。经200 μg/mL XNB-01 胞内粗提物处理后，峰值处的胞外电导率、核酸和蛋白质泄漏量分别是对照组的2.97、1.83、8.28倍，丙二醛含量比对照升高1.36倍。综上所述，P.polymyxa XNB-01 具有防治烟草赤星病的生防潜力。}     

Screening of Antagonistic Bacteria from Phyllosphere towards Tobacco Brown Spot Fungus Alternaria alternata

The possibility of employing antagonistic bacteria for the control of tobacco brown spot was studied. Approximately 136 strains of bacteria were isolated from phyllospheres of tobacco and 9 of these possessed high levels of antagonistic properties. They significantly reduced brown spot in detached tobacco leaves when artificially inoculated with Alternaria alternata. Culture filtrate of the most effective bacterial isolate which designated as Tpb88 was shown to be very efficient in inhibiting mycelial growth of A alternata in dual cultures. Culture filtrate of Tpb88 inhibited germination and germ tube elongation of A alternata. The results showed that the culture filtrate directly inhibited spore germination of A alternata, especially during the first hours of the paired cultivation. The rate of antagonistic activity of culture filtrate of Tpb88 depended on its concentration in the mixture. The greatest inhibition of spore germination was ob served at the highest concentration of filtrate (filtrate to fungal spores inocula mixed in proportion 1: 50). These suggest that the hypothetic mechanism of Tpb88 against tobacco brown spot is to produce antagonistic substances.     

烟草赤星病研究现状及存在问题

烟草赤星病是烟草生产上危害最大的病害之一 ,迄今对病菌生物学特性 ,寄主抗病性 ,病害消长规律以及综合防治等方面进行了广泛的研究。本文综述了烟草赤星病的研究成果 ,分析了赤星病研究工作中存在的问题 ,提出了加强病害预测预报 ,病菌生理分化 ,寄主—病原物互作机制以及利用生物技术获得抗源材料研究的未来烟草赤星病研究新领域     

烤烟感染赤星病后4种酶动态的研究

 本文研究11个烤烟品种接种赤星病病菌后,过氧化物酶(POD)同工酶、多酚氧化酶(PPO)、硝酸还原酶(NR)和抗坏血酸氧化酶(AAO)活性的变化规律,结果表明,相对抗赤星病强的品种,PPO在接种36h内活性升高,以后下降;POD同工酶活性变幅大,变化快,接种初期活性稍下降,然后增强,其中以阴极端2,4同工酶带增加较快,接种180h后就由弱酶带变为强带;NR活性变化不大;AAO活性提高.相反,抗赤星病弱的品种,ppo活性低于对照;POD同工酶变化不大,呈下降趋势;NR活性变幅大;AAO在接种初期活性下降,84h后回升.通过对不同品种的烤烟烟株接种赤星病菌后的4种酶活性的测定,探察到了一些抗病机理,为进一步筛选烟草抗赤星病的生化指标作了研究.     

湖南烟草赤星病发生测报技术研究

通过在湖南主产烟区5点16年次以上系统调查,发现赤星病季节流行呈逻辑斯蒂曲线增长,发病程度年间波动大,分析了发病轻重与环境因子的关系,提出用发生型法及积温法预测赤星病发生期,用孢子捕捉法及多元相关法预测发生程度。