人白细胞介素-12的纯化及鉴定

[目的]利用人白细胞介素-12(human interleukin 12,hIL-12)转基因马铃薯,探讨hIL-12的纯化条件。[方法]提取转基因马铃薯中的总蛋白,hIL-12的分离纯化步骤包括超滤、MKF-AIW阴离子交换层析、MKF-CIC阳离子交换层析。在阴离子交换层析吸附过程中采用试管法选择最佳吸附pH值,选择洗脱过程最佳洗脱pH值;选择阳离子交换层析洗脱过程最佳洗脱pH值;ELISA法测定各纯化阶段收集的上清液或洗脱峰中的hIL-12的含量;非还原SDS-PAGE电泳鉴定蛋白纯度;Western Blot检测纯化的hIL-12。[结果]阴离子交换层析吸附过程最佳吸附pH值为7.5,洗脱过程最佳洗脱pH值为7,阳离子交换层析洗脱过程最佳洗脱pH值为6.5。纯化的hIL-12经非还原SDS-PAGE分析蛋白纯度为91%。Western Blot分析结果表明,在40 kD处有特异的蛋白条带出现。[结论]hIL-12转基因马铃薯经总蛋白提取,超滤,阴离子交换层析,阳离子交换层析纯化,获得了高纯度的hIL-12。     

从转基因马铃薯中纯化的人白细胞介素-12的生物学活性分析

[目的]研究从转人白细胞介素-12（hIL-12）基因马铃薯中纯化的hIL-12的生物学活性。[方法]MTT法检测纯化的hIL-12体外抗肿瘤作用。[结果]纯化的hIL-12在体外对NK敏感肿瘤细胞K562有杀伤作用,而野生对照组无作用。[结论]试验中从转hIL-12基因马铃薯中纯化的hIL-12具有生物学活性。     

转基因马铃薯中纯化人白介素-12的生物学活性分析

分析了转基因马铃薯中纯化人白介素-12（hIL-12）的生物学活性。结果表明,hIL-12纯化品在体外能刺激植物凝集素（PHA）活化的外周血单个核细胞（PBMC）增殖;hIL-12纯化品对人肝癌细胞HepG2．2．15的生长具有抑制作用,且其抑制效果随hIL-12浓度的升高而增强;hIL-12纯化品在体外对乙肝病毒DNA的复制和表面抗原、e抗原的分泌产生抑制作用.     

重组白细胞介素-2高效纯化方法建立

依次通过离子交换法、凝胶过滤法纯化重组白细胞介素-2(IL-2)粗品,利用SDS-PAGE电泳和hIL-2 Elisa kit检测纯化后重组IL-2的纯度和浓度。结果表明,纯化后的重组IL-2纯度和浓度高。本纯化方法简单、稳定、纯化效果好,可为重组IL-2的生产工艺提供技术支持和依据。     

人白介素-12转基因马铃薯中hIL-12的表达

[目的]研究人白介素-12转基因马铃薯中hIL-12的表达。[方法]采用ELISA和WesternBlot,检测转基因马铃薯中hIL-12的表达情况。[结果]转基因马铃薯叶与块茎中均能被hIL-12p70二聚体特异性的抗体识别的蛋白表达,与野生对照组相比均有0.01水平显著差异。WesternBlot分析结果显示,在40kD处有特异性的蛋白条带出现。[结论]所建立的人白介素-12转基因马铃薯表达体系能正确、有效表达hIL-12二聚体。     

哮喘及肺炎患儿血浆白细胞介素-18、白细胞介素-16、 白细胞介素-4及γ-干扰素水平的相关性及临床意义

目的 探讨哮喘及肺炎患儿血浆白细胞介素(IL)-18、IL-16、IL-4及γ-干扰素(IFN-γ)水平的相关性及临床意义。方法 研究对象为哮喘患儿(哮喘组)33例,肺炎患儿(肺炎组)38例,健康小儿40例(对照组),采用酶联免疫吸附实验(ELISA)测定研究对象血浆IL-18、IL-16、IL-4及IFN-γ水平,并比较各指标的相关性。结果 哮喘患儿急性发作期和非发作期血浆IL-16、IL-4水平与对照组比较,差异有统计学意义(F=15.687、18.359,P<0.05),血浆IL-18和IFN-γ水平,在急性发作期、非发作期与对照组相比,差异无统计学意义(F=3.025、4.367,P>0.05)。肺炎患儿急性期和恢复期血浆IL-18、IL-16水平与对照组相比,差异有统计学意义(F=24.386、31.256,P<0.05),血浆IL-4和IFN-γ水平,在急性期、恢复期与对照组相比,差异无统计学意义(F=5.328、5.587,P>0.05)。哮喘患儿血浆中IL-18与IL-4、IFN-γ之间,IL-16与IL-18、IL-4、IFN-γ之间显著正相关(P<0.05);IL-4与IFN-γ之间存在显著负相关(P<0.05)。肺炎患儿血浆中IL-18与IL-16、IL-4、IFN-γ之间,IL-16与IFN-γ之间显著正相关(P<0.05)。结论 IL-18、IL-16、IL-4、IFN-γ参与了小儿哮喘和肺炎的免疫反应过程。     

急性白血病患者白细胞介素-12的表达及临床意义

目的通过检测急性白血病（AL）患者静脉血清中白细胞介素12（IL-12）的含量,探讨IL-12在急性白血病中的临床意义.方法应用定量酶联免疫吸附实验测定10例初诊未治、10例缓解期、5例复发患者和9例正常对照血清中IL-12的含量.结果对照组的IL-12水平（58.96±38.11）ng/L与初诊复发组（初诊未治组与复发组的合称）（32.51±14.58）ng/L、缓解组（71.67±119.09）ng/L之间均有显著性差异（P〈0.05）.结论IL-12与AL的病情变化有一定的关系.     

~(125)I示踪法研究重组人白细胞介素-12在大鼠体内各组织中的分布

试验采用125I同位素示踪法结合三氯醋酸(TCA)沉淀法来测定各主要组织器官的总放射性浓度和酸沉部分放射性浓度,从而获得rhIL-12在动物(SD大鼠)体内的吸收、分布数据.结果表明,在SD大鼠皮下注射标记药物0~120 h之间,测定大鼠的器官、组织和体液中均有该药物的存在,但在泌尿系统中的含量最高,在各组织器官中12 h达到高峰,以后逐渐下降.     

转基因马铃薯中人白介素-12体外诱导人肝癌细胞凋亡的研究

[目的]检测从人白介素-12（human interleukin12,hIL-12）转基因马铃薯中提取的hIL-12的抗肝癌效应。[方法]用MTT法检测转基因马铃薯中hIL-12对人肝癌细胞HepG22.2.15的体外杀伤作用;用AnnexinV/PI双染色法加激光共聚焦显微镜观察转基因马铃薯中hIL-12对HepG22.2.15细胞的诱导凋亡作用。[结果]转基因马铃薯中表达的hIL-12与重组人白介素-12（rhIL-12）在体外对HepG22.2.15具有杀伤作用,而野生对照组无杀伤作用;AnnexinV/PI双染色法加激光共聚焦显微镜观察结果表明,转基因马铃薯中表达hIL-12可诱导HepG22.2.15细胞凋亡。[结论]转基因马铃薯表达体系表达的人白介素-12具有抗肝癌细胞增殖、促进肝癌细胞凋亡的作用。     

转基因马铃薯中人白介素-12体外诱导人肝癌细胞凋亡的研究（摘要）

[目的]检测从人白介素-12（human interleukin 12,hIL-12）转基因马铃薯中提取的hIL-12的抗肝癌效应。[方法]用MTT法检测转基因马铃薯中hIL-12对人肝癌细胞HepG22.2.15的体外杀伤作用;用AnnexinV/PI双染色法加激光共聚焦显微镜观察转基因马铃薯中hIL-12对HepG22.2.15细胞的诱导凋亡作用。[结果]转基因马铃薯中表达的hIL-12与重组人白介素-12（rhIL-12）在体外对HepG22.2.15具有杀伤作用,而野生对照组无杀伤作用;An-nexinV/PI双染色法加激光共聚焦显微镜观察结果表明,转基因马铃薯中表达hIL-12可诱导HepG22.2.15细胞凋亡。[结论]转基因马铃薯表达体系表达的人白介素-12具有抗肝癌细胞增殖、促进肝癌细胞凋亡的作用。     

小麦Rubisco的纯化、鉴定及其活性测定

以小麦叶片为材料 ,根据Rubisco的溶解度、分子大小和形状、电荷种类等特性采用盐析、凝胶过滤、离子交换层析技术进行该酶的分离、纯化。纯化的Rubisco经聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定呈一条谱带 ,经SDS -聚丙烯酰胺凝胶电泳呈 2条谱带 ,一条带为Rubisco大亚基 ,分子量 5 5 0 0 0左右 ;另一条为Rubisco小亚基 ,分子量 14 80 0。     

木瓜多糖的提取、纯化与鉴定

[目的]确定木瓜中多糖最佳提取条件及鉴定方法,为木瓜的深入综合利用提供依据。[方法]采用水提醇沉法从木瓜中提取水溶性粗多糖,通过正交试验确定了最佳提取条件。[结果]确定木瓜多糖的最佳提取工艺为：提取温度90℃,提取时间2.5 h,料液比1∶50,在此条件下进过3次提取所得木瓜粗多糖的平均提取率为8.61%。纯化后木瓜多糖平均收率为6.97%。经过分离纯化后,IR光谱鉴定其结构基团,并鉴定了蛋白质、多酚、淀粉等物质。[结论]采用水提醇沉法提取的木瓜多糖中不含蛋白、淀粉、多酚等杂质,产率高,值得推广。     

双歧杆菌的分离、纯化及鉴定

双歧杆菌是对人为在具有独特生理功能的厌氧微生物类群。采用常规分离方法和设备及气相色谱分析,对来自母乳、健康母乳喂养婴儿的粪便、健康长寿老人的唾液及蜜蜂肠道中的双歧杆菌进行了分离、纯化和鉴定,最终获得了三株双歧杆菌,其中两株分别为婴儿双歧杆菌和短双歧杆菌,为以后产品的开发奠定了基础。     

仙人掌超氧化物歧化酶提取与纯化研究

以仙人掌为试验材料,采用硫酸铵分级沉淀法得到超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase,SOD）粗酶液。然后用Sephadex（葡聚糖凝胶）G-75层析柱层析对粗酶液进行进一步纯化,最后用邻苯三酚法测定酶活力,并对酶活力主要影响因素（包括pH值、温度、抑制剂）进行了研究。结果显示仙人掌SOD酶比活力为751.56U.mg-1。pH值为7.5~8.5时酶活力最大,稳定性也好。温度维持在25~30℃时酶活力最高。由于过氧化氢和氰化钾均能使仙人掌SOD的酶活力显著下降,因而可以初步判断从仙人掌中提取到的SOD是Cu.Zn-SOD。     

腐蹄病节瘤拟杆菌纤毛蛋白与绵羊白细胞介素-2融合基因在PAK/2pfs细胞中的表达与鉴定

将前期工作中筛选出的含有腐蹄病节瘤拟杆菌纤毛蛋白与绵羊白细胞介素-2(Pilin-IL-2)融合基因表达载体的PAK/2pfs工程菌接种于营养肉汤，40℃培养16～18h，离心，向上清液中加入饱和(NH4)2S04提取Pilin-IL-2融合基因表达蛋白。用羊抗兔E型节瘤拟杆菌抗血清与提取的融合蛋白进行对流免疫电泳，证明该融合蛋白具有特异性，且有较高的表达量。经SDS-PAGE电泳和Western blot确证其为Pilin-IL-2融合蛋白。     

大孔树脂对枣皮红色素的分离纯化

[目的]用大孔树脂对枣皮红色素进行分离纯化研究。[方法]利用超声波辅助法粗提枣皮红色素,研究了不同树脂对枣皮红色素的吸附和解吸,并对其分离纯化的静态以及动态吸附工艺进行了探讨。[结果]研究确定了S-8大孔树脂为枣皮红色素纯化的最佳吸附树脂,S-8大孔树脂对枣皮红色素优化的分离纯化条件为:常温下吸附,洗脱剂为0.3 mol/L NaOH,吸附流速为1 ml/min,解吸剂为0.3mol/L NaOH,解吸流速为3 ml/min。枣皮红色素在上述优化条件下纯化,产率可达到4.45%左右,纯化后色素色价比未纯化的提高5倍左右。[结论]研究可为开发和利用枣皮红色素提供理论依据。