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本试验直接从细胞培养液中提取猪瘟兔化弱毒RNA,并根据猪瘟病毒Alfort株和Brescia株的核苷酸序列,将EI基因分两段,设计并合成上物。采用反转录,将EI基因分两段,设计合并成了4条引物。 相似文献
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本研究旨在建立猪瘟病毒野毒株和兔化弱毒疫苗株RT-PCR-RFLP鉴别检测方法。根据Shimen株设计1对特异性引物,建立猪瘟病毒RT-PCR-RFLP检测方法;对20份疑似猪瘟临床样品进行检测,并对检出的山东8株流行野毒株和2株疫苗株PCR产物进行克隆与序列分析,验证上述方法。结果RT-PCR扩增片段为825bp,产物经RFLP分析,野毒株的PCR产物能被ApaⅠ酶切为322bp和503bp 2个片段,兔化弱毒疫苗株则不能被酶切,检测出RNA的最低浓度为0.028 6μg.mL-1;8株流行野毒株都含GGGCCC序列(ApaⅠ酶切位点),2株疫苗株相应序列为GAGCCC,不能被ApaⅠ酶切;8株流行野毒株属于基因2群,2株疫苗株与HCLV遗传关系近,为基因1群。建立了可鉴别猪瘟病毒野毒株和兔化弱毒疫苗株RT-PCR-RFLP检测方法,为猪瘟的防控提供有效手段。 相似文献
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中国株猪瘟兔化弱毒克隆毒的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
采用终点稀释单细胞微量培养法对中国株猪瘟哆化弱毒(C株)进行克隆,获10个克隆株;保持原C株的免疫原性和其他优良特性;在某些方面并有所提高。随机取6号克隆毒(C6)进行系列试验,结果表明:(1)对牛睾丸细胞敏感,共收毒批次和合格批次为15/19(79.9%)(2)用兔增殖毒共归兔64只,发率为90.6%,用睾丸细胞增殖毒对38只兔热反应率为89.47%,(3)按“规程”安检和增大一倍量对猪均无不良 相似文献
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番鸭细小病毒弱毒株VP2基因的分子克隆与序列测定 总被引:2,自引:0,他引:2
将番鸭细小病毒(MDPV)强毒Q株经番鸭胚连续传代,获得致弱株MDPV-26,根据已发表的MDPV的全基因序列,设计了1对引物LHMP7/LHMP8,同时在这2条引物中分别加入2种限制性核酸内切酶Sac Ⅱ和KpnⅠ的酶切位点,应用PCR技术扩增了MDPV0-26株的VP2基因片段,将扩增后的基因片段重组到pMD18-T质粒载体上,并对插入片段进行序列测定,测序结果表明,弱毒株MDPV-26与强毒株MDPV-Q的VP2基因序列相同率达99.7%,与国外分离株的同源性为98.3%,说明强,弱毒株的VP2基因序列变化不大。 相似文献
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本试验对3个代次不同冻干日期的猪瘟兔化弱毒进行了兔体最小感染量测定,并对经猪瘟兔化弱毒F476代毒繁殖冻干的两批猪瘟兔化弱毒F479代毒进行了免疫原性鉴定。结果表明,猪瘟兔化弱毒在-70℃条件下保存14年、15年、29年,其兔体最小感染量均无明显改变;繁殖的两批猪瘟兔化弱毒的最小免疫量均为10^-5稀释1ml,符合《兽用生物制品规程》规定。 相似文献
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根据GenBank中的猪瘟病毒强毒和弱毒株基因组序列设计了1对针对猪瘟病毒的通用引物和2条分别针对猪瘟病毒强毒和猪瘟兔化弱毒疫苗株的特异性TaqMan水解探针,建立了一种能区分猪瘟病毒强毒和兔化弱毒疫苗株的复合实时荧光定量RT—PCR检测方法。结果显示,该方法能将我国大陆流行的不同基因亚群的猪瘟病毒强毒株与猪瘟兔化弱毒疫苗株完全区分开来,而不与其他猪源病毒发生非特异反应,分别可检测到初始模板中41.8和81.5个拷贝的病毒RNA,与已建立的复合RT-套式PCR的敏感性相近,两种方法对152份样品检测的符合率达96.9%~100%。通过对8份猪瘟兔化细胞疫苗效价的检测,证实本方法与兔体反应热测定法有一定的相关性,可用于猪瘟病毒强毒株和兔化弱毒疫苗的定量和鉴别检测。 相似文献
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将番鸭细小病毒强毒株MDPV-Q经番鸭胚传代,获得致弱株MDPV-26,应用PCR技术扩增MDPV-26株的VP2基因片段,将扩增后的VP2基因重组到pMD 18-T质粒载体上,并对插入片段进行序列测定,将测定结果及由该结果推导的氨基酸序列分别与MDPV-Q株及国外已发表的MDPV相应序列进行同源性比较及分析,结果表明,MDPV-26与强毒株MDPV-Q的VP2基因序列及与国外分离株均具有很高的同源性。 相似文献
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利用反转录(RT)及套式PCR(N-PCR)方法扩增了中国猪瘟兔化弱毒株(C-株)兔脾组织毒主要保护性能抗原E2(gp55)基因,成功地将其克隆并测定了核苷酸序列,与国内外已发表的猪瘟病毒(HCV)E2基因序列比较的结果是:C-株兔脾毒与C-株细胞(SK6)毒、C-株疫苗(犊牛睾丸细胞,HCLV-C)毒、HCV-SM株(石门)毒、Brescia sri (荷兰)毒、Alfort株(德国)毒的E2核苷酸序列同源性分别为98.87%、98.34%、94.58%、91.00%、80.78%;氨基酸同源性分别为98.95%、97.37%、94.22%、91.60%、89.23%。对C-株兔脾毒与C-株细胞毒 、经典强毒及国内流行野毒E2上的A、B、C三个中和性抗原区的氨基酸组成进行了比较,其结果为:C-株兔脾毒与C-株细胞毒的差异很小甚至没有差异,而与流行野毒及经典强毒在B、C区有较大的差异。我国经典强毒石门毒与国内80年代和90年代流行毒之间有明显的差异,表明我国猪瘟流行毒株发生了变化。 相似文献
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猪瘟病毒E2基因的克隆与鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
根据猪瘟病毒Brescia株全基因序列设计合成特异性引物对P1/P2对,采用异硫氰酸胍一步法(略加修改),从PK15细胞培养物中提取石门株、兔化弱毒疫苗株、野毒03株及野毒07株猪瘟病毒的总RNA。应用RT-PCR方法成功地扩增出E2全基因组约1273bp的cDNA片断,经电泳证明其大小与推测相符。分别将石门株、兔化弱毒疫苗株、野毒03株及野毒07株的E2基因片段克隆到pGEM-T载体质粒,通过对这4个重组质粒的EcoRI酶切鉴定、直接与套式PCR扩增,并对E2主要抗原区域进行224bp的序列测定,表明E2全基因克隆成功,为E2全序列测定和结构与功能的分析奠定了基础。 相似文献
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猪瘟兔化弱毒疫苗的研究概况 总被引:1,自引:0,他引:1
猪瘟病毒兔化弱毒株因其优良的免疫原性,成为我国至今唯一使用的猪瘟疫苗株。本文就猪瘟兔化弱毒株的生物学特性、猪瘟兔化弱毒组织疫苗和细胞疫苗的研制以及疫苗的应用进行了综述。 相似文献
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Mhp强弱毒株P97基因的克隆与序列测定 总被引:1,自引:0,他引:1
利用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增出猪肺炎支原体弱毒株R659及强毒株F19的P97基因,PCR产物经纯化后,克隆至载体pGEM-Teasyvector,转化DH5a感受态细胞,筛选阳性克隆,提取质粒,对目的片段测序,结果表明:R659的P97全基因大小为3416bp,F19的P97全基因大小为3329bp,强弱毒株间核苷酸同源性为96.9%,弱毒株R659与标准株232A核苷酸同源性为95.6%,强毒株F19与232A株核苷酸同源性为95.1%。 相似文献
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将病毒保护剂运用于猪瘟兔化弱毒牛睾丸细胞疫苗生产中,结果表明:20%的病毒保护剂对产毒有轻微损伤作用,10%的病毒保护剂要略好于对照组,通过蛋白浓度测定证实提高22%。试验组和对照组的反复冻融试验表明对照组冻融六次即为临界点,病毒保护剂组达10次。冷冻保存期试验表明对照组保存三个月合格,而病毒保护剂组可达五个月。37℃耐热试验表明对照组在8h内合格,病毒保护剂组达10h。细胞毒电镜观察试验及主要保护性抗原基因E2、E0测序比对结果表明,病毒保护剂不改变病毒粒子形态,且不产生基因突变。抗体水平和免疫攻毒试验结果表明,病毒保护剂能刺激机体早期抗体的产生,且免疫保护力坚强。 相似文献
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以聚乙二醇(PEG,MW6000)沉淀法部分纯化的猪瘟兔化弱毒中国株(SFV-C)免疫BALB/C小鼠,取其脾脏制备脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经ELISA检测和有限稀释法克隆化筛选出9株对SFV特异的单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞。它们产生的McAb仅对SFV-C株发生特异性反应,而与SFV-S及BV DV Oregon株不发生反应.相加试验表明,9个McAb分别针对不同的抗原决定簇。所有的McAb均不具有沉淀反应特性。 相似文献
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猪瘟兔化弱毒抗体对不同野毒株体内外中和保护试验的相关性研究 总被引:2,自引:1,他引:2
将猪瘟兔化弱毒疫苗阳性血清与猪瘟野毒株HeBZJK 1 9 5 、GZGD 1 9 5 、HeBHH 2 9 5 、BJXC 1 9 5 、HeNBY 1 9 6 、BJCY 1 9 6 、BJSY 2 9 6 、BGTX 3 9 6 、HeNXH 2 9 8 、FJFQ 1 9 9 、JL 1 9 4 和标准石门株在PK 1 5 单层细胞上进行中和试验 , 测定了猪瘟病毒抗体在体外对野毒株的中和作用能力。结果表明 , 阳性血清对HeBZJK 1 9 5 、GZGD 1 9 5 、BJSY 2 9 6 、JL 1 9 4 和石门株的中和效价为 1 ∶ 2 5 6 , 对BGTX 3 9 6 株为 1 ∶ 1 2 8 , 对HeBHH 2 9 5 、BJCY 1 9 6 、HeNXH 2 9 8株为 1 ∶ 6 4 , 对BJXC 1 9 5 株为 1 ∶ 1 6 , 对FJFQ 1 9 9 株为 1 ∶ 8 , 对HeNBY 1 9 6 株为 1 ∶ 4 。由此表明 , 对不同毒株血清中和效价不同。另外测定了猪体内免疫抗体与免疫保护力的关系。采用 1 头份猪瘟兔化弱毒疫苗主动免疫没有母源抗体的猪 , 免疫后 1 4 d和 1 9 2 d抗体滴度 < 1 ∶ 1 6 , 攻击野毒HeNXH 2 9 8 株 , 仔猪能够完全保护。采食初乳的 2 组仔猪 , 母源抗体滴度为 < 1 ∶ 1 6 ~ 1 ∶ 6 4 , 分别免疫 2 头份和 4 头份猪瘟兔化弱毒疫苗 , 相似文献