口服重组沙门菌诱导的免疫应答动态分析

以融合表达绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)和OVA、LCMV NP CD8~ T细胞表位的重组减毒沙门菌SL7207(ptG2F)为免疫原,经口服途径接种BALB/c小鼠,每2周加强免疫1次,分别于第2次、第3次、第4次、第5次免疫后,以ELISPOT法分别测定免疫小鼠派伊尔氏结细胞中特异性针对OVA和LCMV NP CD8~ T细胞表位的IFN-γ分泌细胞和IL-4分泌细胞。同时,运用ELISA分别检测血清、肠黏膜中的GFP特异性抗体,分析了口服重组减毒沙门菌诱导的特异性免疫应答动态规律。实验表明SL7207(ptG2F)口服免疫BALB/c小鼠后,诱导产生了LCMV NP CD8~ T细胞表位(H-2~d)特异的细胞免疫应答。在第2次免疫后,即可检测到特异性IFN-γ分泌细胞和IL-4分泌细胞;在第3次免疫后,IFN-γ分泌细胞数量明显高于IL-4分泌细胞数。然而,在第4、5次免疫后,IFN-γ分泌细胞数和IL-4分泌细胞数相当,未见明显变化。试验中未能检测到针对OVA CD8~ T细胞表位(H-2~b)的细胞免疫应答。运用ELISA方法检测到SL7207(ptG2F)、SL7207(ptGFP)免疫组GFP特异性IgG和IgA抗体,与对照组相比较,差异显著(P<0.05)。结果表明重组减毒沙门菌口服免疫可以有效运送外源抗原至宿主免疫系统,并诱导产生特异性细胞免疫应答和黏膜免疫应答。     

柔嫩艾美尔球虫SAG_2基因重组卡介苗的抗球虫保护效果

本研究旨在通过动物试验,按设计以滴鼻、口服和颈部皮下注射的方式,将已构建的含有柔嫩艾美尔球虫SAG_2基因的卡介苗pMV361-SAG_2免疫雏鸡,通过检测鸡体液及细胞免疫水平、卵囊数、相对增重率、抗球虫指数等指标,对所构建的重组卡介苗的保护效果进行综合评价。结果显示,在实验室条件下重组卡介苗pMV361-SAG_2具有增强鸡抵抗柔嫩艾美尔球虫的免疫保护功效,且以滴鼻的方式进行免疫时效果最佳。本研究为抗球虫疫苗的研究提供试验依据。     

ADF-IL-2基因重组卡介苗的构建及免疫保护效果

构建柔嫩艾美尔球虫ADF基因和鸡IL-2基因的重组卡介苗,并研究其免疫保护性.将柔嫩艾美尔球虫的ADF基因和鸡的IL-2基因串联后连接到至穿梭表达载体pMV261和整合表达载体pMV361中电转化卡介苗,制备重组卡介苗pMV261-ADF-IL-2和pMV361-ADF-IL-2,将构建的基因重组卡介苗分别以不同免疫途径接种雏鸡,研究其对柔嫩艾美耳球虫的攻毒的免疫保护效果.结果显示,成功构建重组rBCG pMV261-ADF-IL-2和pMV361-ADF-IL-2,且rBCG滴鼻免疫组的免疫效果较好,其抗球虫指数分别为176.08和172.89.结果表明,构建的基因重组卡介苗pMV261-ADF-IL-2和pMV3 61-ADF-IL-2对柔嫩艾美尔球虫卵囊的攻击具有一定的保护作用.     

BVDV-E2截短基因重组卡介苗对牛的免疫效果评价

为评价牛病毒性腹泻病毒(BVDV)E2截短基因重组卡介苗对牛的免疫效果,将BVDV抗原抗体阴性牛随机分为rBCG-pMV361-E2-1(1 aa-297aa)、rBCG-pMV361-E2-2(1 aa-345 aa)、rBCG-pMV361-E2-3(1 aa-374 aa)、rBCG-pMV361-E2-4(45 aa-297 aa)、rBCG-pMV361-E2-5(45 aa-345 aa)、rBCG-pMV361-E2-6(45 aa-374 aa)、BVDV对照组、BCG对照组和PBS对照组,各组牛免疫相应疫苗后通过特异性抗体检测、淋巴细胞增殖试验、淋巴细胞亚群检测和细胞因子检测分析疫苗的免疫效果。结果显示,BVDV E2截短基因重组卡介苗均可诱导BVDV特异性抗体的产生,rBCG-pMV361-E2-1组抗体水平高于其他重组卡介苗试验组和BVDV对照组。淋巴细胞增殖试验结果显示,rBCG-pMV361-E2-2组SI为2.038±0.21,显著高于其他重组卡介苗试验组(P<0.01)。牛外周血CD4^+、CD8^+T淋巴细胞亚群检测结果显示,rBCG-pMV361-E2-5组牛外周血中CD4^+和CD8^+ T淋巴细胞亚群含量与PBS组比较,差异极显著(P<0.01)。IFN-γ检测结果显示,rBCG-pMV361-E2-1的IFN-γ水平显著高于其他试验组和对照组(P<0.01)。研究表明,rBCG-pMV361-E2-1可诱导接种牛产生较好的体液免疫应答,rBCG-pMV361-E2-1、rBCG-pMV361-E2-2和rBCG-pMV361-E2-5在诱导细胞免疫应答上效果较好。     

转移因子和重组转移因子在防治动物疾病中的应用研究

转移因（Transfer factor，TF）是具有免疫活性的T淋巴细胞在抗原或丝裂原的刺激下释放的一类可透析的小分子多肽。转移因子携带有致敏淋巴细胞的特异性免疫信息，并且能够将其递呈给受体淋巴细胞，使受体无活性的淋巴细胞转变为特异性致敏淋巴细胞，从而激发受体细胞介导的免疫反应。     

不同途径免疫小鼠重组乳酸乳球菌诱导的黏膜及系统免疫应答分析

重组乳酸乳球菌分别经鼻腔和口腔免疫小鼠后,免疫后的测定时间内鼻腔免疫方法刺激呼吸道和肠道产生s-Ig A水平高于口服免疫方法,且肺泡冲洗液中s-Ig A水平差异极显著(P0.01),肠道黏膜s-Ig A水平无显著差异(P0.05);血清中Ig G抗体水平两种免疫方法均无显著差异(P0.05),但鼻腔免疫组抗体水平在最后一次免疫后7 d达到最高,在整个测定时间内维持在高水平,口服免疫组抗体水平在最后一次免疫后21 d达到最高水平,然后迅速下降;h1型细胞因子IL-2和IFN-γ水平滴鼻免疫组高于口服免疫试验组,差异不显著(P0.05),Th2型细胞因子IL-4水平在各组之间差异不显著(P0.05)。结果表明,重组乳酸乳球菌分别经鼻腔及口腔免疫小鼠后,能诱导机体产生黏膜免疫系统的体液免疫及Th1型细胞免疫反应,且滴鼻免疫方法优于口服免疫方法,为传染病的预防控制提供了新的免疫策略。     

ANAE标记T细胞的应用

免疫学研究证明,免疫活性细胞主要是T 细胞(Tc)和B 细胞(Bc)。Bc 主要参与体液免疫反应,而Tc 则主要参与细胞免疫反应。鉴别Tc、Bc常采用E一花环试验、免疫荧光、细胞电泳等方法。由于这些方法要求设备、技术较高,操作烦琐,重复性较差,因此都有其一定的局限性。近年来兴起一种新方法,即用α—醋酸萘酯酶(简称     

应用流式细胞术检测BVDV-E_2截短基因重组卡介苗对小鼠的免疫效果

为评价牛病毒性腹泻-黏膜病病毒(BVDV)E2截短基因重组卡介苗对小鼠的免疫效果,用BVDV-E2截短基因重组卡介苗pMV361-E11、pMV361-E12、pMV361-E13、pMV361-E21、pMV361-E22、pMV361-E23及卡介苗、BVDV灭活苗和生理盐水对试验小鼠进行腹腔免疫,在三免后14d取其脾脏对T、B淋巴细胞、树突状细胞及Th1细胞等细胞因子进行流式细胞术检测,评价各重组卡介苗的免疫效果。结果显示,pMV361-E23重组卡介苗组中各细胞因子的表达量尽管有个别因子在同组中不是最高,但均高于同组生理盐水的表达量(除INF-γ检测中略低外);pMV361-E12组中IL-12的含量高达9.7。表明pMV361-E23和pMV361-E122组截短重组卡介苗免疫效果较好,为预防牛病毒性腹泻病以及新型疫苗的研制奠定基础。     

Regulation of Innate Immune Function in Bovine Oviduct Epithelial Cells in Culture: The Homeostatic Role of Epithelial Cells in Balancing Th1/Th2 Response

This study aimed to investigate the role of epithelial cells in regulating innate immunity in bovine oviduct epithelial cell (BOEC) culture. We studied the effect of Escherichia coli lipopolysaccharide (LPS) and its interaction with ovarian steroids, estradiol (E2) and progesterone (P4), and luteinizing hormone (LH) at concentrations observed during the preovulatory period on immune responses in BOEC culture. Immunohistochemistry of oviduct tissue showed intensive expression of Toll-like receptor-4 (TLR-4) and TLR-2 in epithelial cells. A dose of 10 ng/ml LPS stimulated TLR-4, cyclooxygenase-2 (COX-2), nuclear factor kappa B inhibitor A (NFKBIA), interleukin 1β (IL-1β) and tumor necrosis factor α (TNF-α) expression, indicating an early pro-inflammatory response. A dose of 100 ng/ml LPS did not induce expression of these genes but stimulated TLR-2, IL-10,IL-4 and microsomal prostaglandin E synthase-1 (mPGES-1) expression and PGE2 secretion, indicating an anti-inflammatory response. Ovarian steroids and LH completely block LPS (10 ng/ml)-induced TLR-4, IL-1β and TNF-α expression as well as LPS (100 ng/ml)-induced TLR-2 expression. Taken together, this study suggests the existence of an early signaling system to respond to infection in the BOEC. In addition, ovarian steroids and LH may play a critical role in inducing homeostasis and in controlling hyperactive pro-inflammatory responses detrimental to epithelial cells, sperm and the embryo.     

新疆野生荒漠肉苁蓉醇提物调节小鼠DCs成熟对Th1/Th2的免疫增强作用

旨在探讨新疆野生荒漠肉苁蓉醇提物(ethanol extracts of wild Cistanche deserticola,EEWCD)调节Th1/Th2免疫反应的特点及初步的作用机制.采用卵清白蛋白(ovalbumin,OVA)为抗原,研究EEWCD对小鼠体液免疫,细胞免疫,细胞因子分泌,树突状细胞(dendri...     

绵羊痒螨巨噬细胞迁移抑制因子重组蛋白对兔外周血单个核细胞Th1/Th2型和Th17/Treg型特征因子表达的影响

为了初步探讨绵羊痒螨巨噬细胞迁移抑制因子（PoMIF）对健康新西兰兔外周血单个核细胞（PBMC）中Th1/Th2和Th17/Treg细胞平衡的变化。采用RT-PCR从绵羊痒螨总RNA中扩增得到MIF全长基因,经原核表达、纯化重组PoMIF（rPoMIF）蛋白,并分析其氧化还原酶和互变异构酶活性。筛选与健康新西兰兔PBMC孵育的最佳rPoMIF浓度,且用最佳浓度rPoMIF（0.2 μg·mL^-1）与PBMC共同孵育0、1、6、12、24、36 h后收集细胞,用荧光定量PCR检测其Th1/Th2/Th17/Treg细胞相对应的特征性转录因子T-bet/GATA-3/RORc/Foxp3和特征性细胞因子IFN-γ/IL-4/IL-17A/IL-10 mRNA表达变化。结果表明：PoMIF全长363 bp,rPoMIF大小为32 ku（含pET32a标签蛋白19 ku）,且具有互变异构酶活性;rPoMIF刺激后PBMC中Th1细胞的T-bet和IFN-γ先下降后上升,Th2细胞的GATA-3和IL-4均呈下降趋势,且T-bet/GATA-3和IFN-γ/IL-4比值在12、24和36 h均升高;Th17细胞的RORc和IL-17A在各时间点下降,而Treg细胞的Foxp3和IL-10在各时间点升高,且RORc/Foxp3和IL-17A/IL-10比值在各时间点均变低。rPoMIF可造成家兔外周血单个核细胞的Th1/Th2和Th17/Treg平衡分别向Th1和Treg偏移。     

降钙素基因相关肽及其在免疫系统的功能

降钙素基因相关肽(CGRP)是迄今发现的人体内舒血管活性最强的多肽。CGRP与免疫系统关系密切,能够促进细胞表面分子表达;抑制B淋巴细胞早期发育;调节T淋巴细胞成熟与增殖;增强中性粒细胞的富集并与炎症反应相关。CGRP在免疫系统功能的研究为CGRP运用于抗感染免疫、免疫系统疾病的治疗提供可能性,也为“神经内分泌-免疫调节”的研究提供实例。     

AIV感染雏鸡免疫器官T细胞免疫功能及IL-2诱生活性变化

应用组织培养技术及MTT法,对鹅源H5N1型AIV感染雏鸡胸腺、脾脏T细胞增殖功能及IL-2诱生活性进行检测,结果发现:雏鸡感染AIV后,免疫器官T细胞增殖功能和IL-2诱生活性在感染初期较对照雏鸡明显降低,后期有所恢复,表明AIV感染雏鸡细胞免疫受到抑制,中枢与外周免疫器官分子免疫调节功能障碍.7和21日龄AIV感染雏鸡均发病,但21日龄感染雏鸡上述指标的下降时间较7日龄感染雏鸡短且相对滞后,死亡率也较低,表明21日龄雏鸡免疫能力较强,具有一定的抗AIV感染能力.     

Th1/Th2型免疫反应相关基因在巨噬细胞RAW 264.7应对细粒棘球绦虫原头蚴刺激时的表达谱研究

本研究旨在解析巨噬细胞RAW264.7在应对细粒棘球绦虫原头蚴刺激时其Th1、Th2型免疫反应相关基因的差异表达规律,为进一步揭示巨噬细胞抗细粒棘球绦虫原头蚴免疫调控机制奠定理论基础.将细粒棘球绦虫原头蚴和巨噬细胞RAW264.7共培养6、24、72 h,收集RAW264.7细胞,提取总RNA,构建cDNA文库,利用R...     

Cytokine Concentrations in Bronchoalveolar Lavage Fluid from Horses with Neutrophilic Inflammatory Airway Disease

Background

Multiple cytological patterns occur in bronchoalveolar lavage fluid (BALF) of horses with inflammatory airway disease (IAD). Only few data on BALF cytokine profiles are available for horses with IAD, and are limited to mRNA expression.

Hypothesis/Objective

Cytological profiles of IAD are associated with different BALF immunological pathways. To investigate BALF cytokine concentrations in a large number of horses with neutrophilic IAD.

Animals

One hundred and thirty‐eight client‐owned Standardbred racehorses in active training.

Methods

Prospective observational study. BALF samples were obtained from left and right lungs. Interleukin (IL)‐4, interferon (IFN)‐γ, and tumor necrosis factor (TNF)‐α concentrations were determined by ELISA.

Results

Fourteen horses had normal BALF cytological profiles and 56 exhibited evidence of bilateral neutrophilic IAD. Twenty‐four horses showed BALF with, respectively, IAD‐ and CTL consistent cytology and were excluded; as were 44 horses because of evidence of pulmonary hemorrhage. TNF‐α (56 ± 115 pg/mL; P = .034) and IFN‐γ concentrations (104 ± 247 pg/mL; P = .044) were significantly higher for IAD horses, compared with controls (respectively 19 ± 41 and 80 ± 116 pg/mL). Horses with ‘neutrophil’ subtype had significantly higher IFN‐γ concentrations (110 ± 154 pg/mL), than ‘neutrophil/metachromatic’ (56 ± 54 pg/mL; P = .028) and ‘neutrophil/metachromatic/eosinophil’ subtypes (44 ± 23 pg/mL; P = .012).

Conclusions and Clinical Importance

Cytokine concentrations in BALF suggested that neutrophilic IAD is associated with activation of the innate immune system and a possible T‐helper (Th)‐1 polarized response. This study also suggested that immunological pathways vary according to cytological IAD subtypes.     

FSH通过激活ERK1/2调节仔猪睾丸支持细胞GDNF的表达

以体外培养的仔猪睾丸支持细胞为研究对象，研究了FSH对GDNF蛋白的调节及其信号传导机制。结果显示：（1）外源性FSH以浓度和时间依赖性促进GDNF蛋白表达：FSH浓度为50ng／mL、作用1h时，GDNF水平达到最高；（2）用FSH（50ng／mL）或dbcAMP（100μmol／L）处理支持细胞，可迅速激活MEK激酶，随FSH刺激时间的延长，ERK1／2活性逐渐升高（0～2h）；（3）MEK1／2的抑制剂U0126可显著抑制FSH对GDNF的激活作用。结果表明，FSH在诱导GDNF蛋白表达的过程中，通过cAMP-PKA-ERK1／2级联通路，促进GDNF基因的表达。     

Effect of bovine colostrum supplementation on cytokine mRNA expression in weaned piglets

The aim of this study was to evaluate the influence of bovine colostrum supplementation on the immune Th1/Th2 response in weaned piglets. After weaning at 21 d, 3 groups of 7 piglets were fed ad libitum with a starter diet and received daily 0, 1 or 5 g of spray-dried bovine colostrum. Spleen and gut-associated lymphoid tissues (GALT): ileal Peyer's patch (iPP), jejunum wall (JW) and mesenteric lymph node (MLN)) biopsies were collected on each piglet after 3 wk of treatment and analysed for their cytokine mRNA expression (IL-2, IL-4, IL-10, IL-12 and IFNγ) by RT-PCR. The supplementation with bovine colostrum induced an increase (P < 0.05) in IL-12 in the JW, in IL-2, IL-10 and IL-12 in the MLN and in IL-4, IL-10 and IL-12 in the iPP. In the latter, bovine colostrum also decreased IFN-γ production (P < 0.01). Finally, no effect of the treatments was recorded in the spleen. These results suggest an immunomodulatory effect of bovine colostrum on the GALT, which responded by producing at different levels both Th1 pro-inflammatory cytokines (IL-2, IFN-γ and IL-12) and Th2 anti-inflammatory cytokines (IL-4 and IL-10). This Th1/Th2 bipolar response protects the weaned piglets from both allergic (food) and infectious (pathogens) diseases.     

生物素对肉仔鸡免疫器官的发育、机体免疫功能和神经内分泌激素的影响

将400只1日龄AA肉仔鸡随机分成4个处理，每个处理5个重复，每个重复20只鸡（公母各半）；基础日粮为小麦-酪蛋白型日粮，在基础日粮中分别添加0．30、0．90和2．7mg／kg3个水平的生物素，包括对照组共4种日粮处理。试验结果表明：（1）添加生物素可促进免疫器官的发育，提高其质量指数；提高了血清中新城疫抗体滴度和IgG水平，0．9mg／kg和2．7mg／kg处理组的新城疫抗体滴度显著高于对照组和0．3mg／kg处理组（P＜0．05），2．7mg／kg处理组的IgG水平显著高于对照组（P＜0．05）；（2）添加生物素显著提高了血液中B淋巴细胞的转化效率（P＜0．05）和脾脏中T淋巴细胞（P＜0．05）和B淋巴细胞的转化效率（P＜0．05）；显著降低了血液中表达CD3^＋的细胞含量（P＜0．05），其中2．7mg／kg处理组极显著低于对照组和0．3mg／kg处理组（P＜0．05）；显著降低了脾脏中表达CD3^＋、CD4^＋和CD8^＋的细胞含量（P＜0．05），其中2．7mg／kg处理组显著低于对照组和0．3mg／kg处理组（P＜0．05）；（3）添加生物素后，血清甲状腺素T4、三碘甲状原氨酸T3、生长激素和皮质醇水平呈上升趋势（P＞0．05）。