小反刍兽疫病毒(PPRV)N基因体外转录与RT-PCR方法的研究

小反刍兽疫(PPR)是由PPRV引起的主要是绵羊和山羊的一种热性病毒病。我们合成了PPRVN基因,连接到pGEM-T载体中,线性化处理后用T7转录酶启动体外转录,获取类PPRV的RNA作为阳性对照,参考国外文献设计一对合适的引物NP3和NP4,经PCR条件的优化,获得了预期的350bp目的片断,初步建立了检测PPRVN基因的反转录聚合酶链反应(RT-PCR)。     

小反刍兽疫病毒P蛋白的表达、纯化及抗体的制备及初步应用

本文旨在对小反刍兽疫病毒P蛋白进行原核表达,并利用表达的蛋白制备抗血清,然后用于间接免疫荧光检测。将构建好的pET-30a(+)-P重组表达质粒转化大肠杆菌构建P蛋白的原核表达体系。重组菌经IPTG诱导,用SDS-PAGE电泳检测融合蛋白得到了表达。通过对表达条件的优化,确定了P蛋白在28℃、IPTG诱导浓度为0.2 mmol.μL-1的条件下诱导6 h,可溶性P蛋白表达量最高。利用镍柱亲和层析法纯化可溶性的P蛋白,然后以纯化的蛋白为抗原免疫小鼠,制备了多克隆抗体,其滴度最高可达1∶25 600,而且特异性好,表明获得了P蛋白的多克隆抗体。同时利用所制备的抗体对pcDNA3.1/P真核表达进行了间接免疫荧光检测。P蛋白在大肠杆菌中得到了高效表达,并制备了特异性好、滴度高的抗血清,为研究P蛋白功能奠定了基础。     

小反刍兽疫病毒（PPRV）基因体外转录与RT—PCR方法的研究

小反刍兽疫（PPR）是由PPRV引起的主要是绵羊和山羊的一种热性病毒病。我们合成了PPRVN基因。连接到pGEM—T载体中，线性化处理后用T7转录酶启动体外转录，获取类PPRV的RNA作为阳性对照，参考国外文献设计一对合适的引物NP3和NP4，经PCR条件的优化，获得了预期的350bp目的片断，初步建立了检测PPRVN基因的反转录聚合酶链反应（RT—PCR）。     

小反刍兽疫病毒H蛋白的原核表达和免疫学活性鉴定

研究小反刍兽疫病毒（Peste des petits ruminants virus,PPRV）H 蛋白生物学活性,为建立PPRV 抗体检测方法提供材料。根据 GenBank 已发表的 PPRV H 蛋白质序列,设计上、下游引物,以 PPRV核酸为模板进行 PCR 扩增,扩增产物克隆至 pET52／LIC 载体中,构建了 pET52／LIC-PPRV H 表达载体。将 pET52／LIC-PPRV H 重组质粒转化大肠埃希菌 BL21（DE3）进行融合表达,经 SDS-PAGE 电泳分析,可见 PPRV H 蛋白成功得到了表达,融合蛋白的分子质量约为75 ku,Western blot 分析表明所表达的重组蛋白可与 PPRV 阳性血清发生特异性反应,说明表达的 PPRV H 蛋白可以作为建立 PPRV 抗体检测的蛋白。     

小反刍兽疫病毒间接ELISA抗体检测方法的建立与初步应用

本研究利用原核表达的小反刍兽疫病毒核衣壳（N）蛋白作为标准抗原蛋白,建立PPRV抗体检测方法,同时对建立的检测方法的相关条件进行了优化。通过优化确定抗原的最佳包被浓度为10 mg/L,血清最佳稀释度为1∶40,二抗的使用浓度为1∶200,血清及二抗的最佳反应条件为37 ℃孵育60 min,底物的最佳反应时间为37 ℃ 15 min。通过批内及批间重复性的评价,变异系数均小于0.1,表明本检测方法具有较高的可重复性。经过临床样品检测证明,建立的检测方法可用于临床PPRV抗体的检测。     

小反刍兽疫病毒抗体ELISA试验测量不确定度评估

为进一步评定小反刍兽疫病毒抗体的测量不确定度,使用ELISA方法进行相关试验,依据《兽医检测实验室ELISA试验测量不确定度评估指南》(CNAS-GL043:2020)、《测量不确定度评定与表示》(JJF 1059.1—2012),分析了ELISA试验测量不确定度的各分量,并根据各分量的来源及产生途径,详细评定了各分量...     

一株小反刍兽疫病毒的分离鉴定与生长曲线测定

将含高滴度小反刍兽疫病毒的新鲜病料研磨后接种VERO DS细胞系进行病毒分离,出现细胞病变后连续传代,取3代以上培养物,进行RT-PCR和间接免疫荧光试验及生长曲线测定。生长曲线测定分别以0.01和0.1 MOI接种VERO DS细胞,每隔12h测定病毒滴度,连续培养168h,绘制病毒生长曲线,分析生长特性。结果显示,病料接种细胞72h后,出现细胞病变,经RT-PCR和间接免疫荧光试验鉴定为小反刍兽疫病毒?;生长特性研究显示,0.01和0.1 MOI两种病毒接种量,病毒滴度最高均为106 TCID50左右,但峰值出现时间和下降速度存在差异,0.01 MOI接种量出现峰值晚,但是维持高滴度时间较长。本文成功分离一株小反刍兽疫病毒,并对两种接毒量的生长特性差异进行了初步分析,为探索该病毒培养方法和收毒时间提供了借鉴。     

Prion蛋白致病机理的研究

Prion这一术语是Prusiner提出的,其中Pr源自英文蛋白质(protein),i源自英文传染性的(infec-tious),on意指粒子(particle)。Prions病也称为传染性海绵状脑病(transmissible spongiform enceph-alopathies,TSEs),是发生于动物与人类的一种致命性神经退行性疾病(Attwood等,2000)。TSEs包括疯牛病(mad cow disease,MCD),即牛海绵状脑病(bovine spongiform encephalopathy,BSE)、羊瘙痒症(scrapie)、克-雅氏病(creutzfeldt-jakob dis-ease,CJD)、GSS综合征(gersrmann-straussler-scheikerg disease,GSS)和致死性睡眠综合征(fatalfamil…     

小反刍兽疫快速诊断技术及其疫苗的研究进展

小反刍兽疫（PPR）是一种感染家养和野生反刍类动物的急性传染病，它是由副粘病毒科麻疹病毒属的小反刍兽疫病毒（PPRV）引起的。本病没有有效治疗方法，只能预防,因此诊断监测技术是控制该病的重要手段。由于传统的血清学检测技术，如琼脂糖凝胶免疫扩散(AGID)、病毒中和试验（VNT）等存在诸多缺陷，难以用于大规模的疫情监控。目前国际上发展的主流是以分子生物学技术为基础的检测方法，如RT-PCR、PCR-ELISA等，这些新技术灵敏便捷，高通量，而且能够在野外进行。而疫苗以重组疫苗为研究方向。     

小反刍兽疫病毒H蛋白原核表达的研究

小反刍兽疫病毒属副粘病毒科麻疹病毒属,为一不分节段的负链RNA病毒。本研究以灭活的检测用抗原为材料,抽提基因组RNA作为模板,根据GenBank下栽的序列及载体的需要设计其主要的抗原基因H基因的编码序列的RT—PCIL扩增引物;然后将扩增基因片段与T载体连接克隆测序,再与原核表达载体pET100／D—TOPO连接、诱导表达。结果显示所设计引物对模极有预期扩增,序列测定表明为正确片段;片段经纯化与表达载体连接,已挑到阳性克隆。H基因的表达菌经IPTG诱导,SDS—PAGE电泳。结果显示：H基因有预期分子量大小的蛋白表达;用Anti—His抗体已检测到相应融合蛋白的表达,其原核表达的相应蛋白抗原性状况正在试验研究中,表达产物具有潜在的诊断抗原和免疫原价值。     

小反刍兽疫病毒竞争ELISA检测试剂盒生产工艺研究

为研究小反刍兽疫病毒（PPRV）竞争ELISA试剂盒的生产工艺,本试验利用昆虫细胞表达的PPRV核蛋白及其单克隆抗体,建立一种特异性高、敏感性强的PPRV竞争ELISA检测方法,并对该方法的各个步骤进行优化,确定该方法的最适条件,从而确定竞争ELISA的操作程序。并用该方法与OIE推荐的PPRV rC-ELISA抗体检测试剂盒同时检测来自西藏、内蒙古共977份临床羊、牛血清样本,结果显示特异性、敏感性、符合率分别达99.89%、93.82%、99.38%。本研究建立的PPRV竞争ELISA方法为该病毒检测试剂盒的研制奠定技术基础,为小反刍兽疫的防控提供科学依据。     

小反刍兽疫疫苗研究进展

小反刍兽疫是由小反刍兽疫病毒引起的一种严重的烈性、接触性重大跨国动物疫病.目前,该病在我国已经发生,给我国畜牧业经济造成了巨大损失.同多数病毒性疾病的防制相同,对小反刍兽疫PPRS的防制仍以疫苗免疫预防为主.文章对小反刍兽疫的各类疫苗进行综述,以期为疫苗的合理应用提供技术帮助.     

小反刍兽疫研究进展

小反刍兽疫(PPR)是由小反刍兽疫病毒(PPRV)引起的急性或亚急性传染病,为世界动物卫生组织(OIE)法定报告的动物疫病,易感动物以山羊、绵羊等小反刍动物为主。目前,小反刍兽疫主要流行于西非、中非、中东、阿拉伯半岛及南亚等地区。敏感特异的检测方法和高效的预防性疫苗将为该病的防控奠定良好的基础。论文对小反刍兽疫全球流行现状、诊断技术及疫苗研究进展进行了综述。     

Detection of Antibodies Against Peste des Petits Ruminants Virus in Sera of Cattle,Camels, Sheep and Goats in Sudan

Detection of antibodies against peste des petits ruminants virus in sera of cattle, camels, sheep and goats in Sudan.     

小反刍兽疫研究进展

小反刍兽疫病毒(PPRV)是副黏病毒科(Paramyxoviridae)麻疹病毒属(Morbolivirus)的成员,主要感染山羊、绵羊等小反刍动物,引起一种高度接触性病毒性传染病。小反刍兽疫为一种重大的外来性疾病,2007年在中国西藏自治区日土县首次发生。自2013年末以来中国新疆、青海、甘肃、宁夏、内蒙、湖南、辽宁等地频繁暴发小反兽疫疫情,给中国的畜牧业带来了巨大的损失,引起极大的重视。为更好的分析小反刍兽疫的病原特性及采取有效的防控措施,文章对小反刍兽疫的病原学及疫苗研究进展进行论述。     

小反刍兽疫研究进展

小反刍兽疫是由小反刍兽疫病毒引起的一种重大烈性传染病,主要发生于山羊和绵羊等小反刍兽,在国际上已经得到广泛的重视。本文对小反刍兽疫的病毒病原学、流行病学、临床特征、病理变化以及诊断和疫苗研制等国际上的最新进展进行了全面综述。     

羊口蹄疫、羊小反刍兽疫、羊痘疫苗在不同日龄段羊上组合接种免疫效果对比试验

通过试验,分析得出羊口蹄疫、羊小反刍兽疫、羊痘疫苗在不同日龄段的羊只上,以不同免疫注射组合方式进行接种,产生的免疫抗体效果及免疫安全性实验,为基层从事羊免疫工作的动物防疫员提供科学依据。     

小反刍兽疫活疫苗二次免疫效果评价

为研究已免疫小反刍兽疫(PPR)活疫苗的羊群经二次免疫后PPR抗体水平的变化趋势,对初免21 d羊群进行了第二次免疫,同时监测初免21 d及二免后3 d、7 d、14 d、21 d的血清中和抗体。结果显示,一次免疫羊21 d PPR中和抗体滴度平均可达5.18±2.87,阳性率为84%;二次免疫后3 d、7 d、14 d、21 d,PPR抗体呈上升趋势,平均滴度分别为5.65±2.56、6.95±1.82、7.28±1.18、8.12±1.31,阳性率分别为90%、100%、100%、100%。一免试验组21 d~323 d PPR抗体阳性率为83%,二免试验组在二次免疫7 d PPR抗体阳性率达到100%,并且维持到21 d。试验表明,活疫苗二次免疫增强了免疫效果,对已经有PPR抗体的羊进行二次免疫,可明显提升免疫抗体阳性率。     

小反刍兽疫研究现状

小反刍兽疫(Peste des petits ruminants,PPR)是由小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)引起的一种主要感染小反刍动物的急性、接触性传染病,发病率、死亡率高.近年来,小反刍兽疫(PPR)呈扩散的趋势,成为重要的跨国动物传染病之一,我国周边国家频繁器发该病.2007年7月25日暴发于西藏自治区日土县的我国首例小反刍尊疫疫情,更是对我国如何做好该病的防控工作提出了新的要求和挑战.为了增强广大兽医工作者和相关人士对本病的认识,文中就小反刍兽疫的病原学、流行病学、临床症状、病理特征以及诊断方法等方面的研究现状进行了综述.     

Economics of Prophylaxis against Peste des Petits Ruminants and Gastrointestinal Helminthosis in Small Ruminants in North Cameroon

Data on reproduction and mortality were collected over one year from 5100 sheep and 13 300 goats in treated and control flocks. The treated animals received vaccination against peste des petits ruminants (PPR) and anthelmintics twice a year. Productivity parameters (fecundity and mortality rates) obtained with and without prophylaxis were fitted into a benefit–cost economic analysis model and run for project lifespans varying from one to five years. At a 7% discount rate, the overall benefits for a project lifespan of five years were estimated as over 15 million FCFA and 11 million FCFA for sheep and goats, respectively. The benefit–cost ratio ranged from 2.26 to 3.27 in goats and 3.01 to 4.23 in sheep, depending on the project lifespan. It was concluded that PPR and gastrointestinal helminthosis are important causes of economic losses in small ruminants in Cameroon. A national or even a regional vaccination campaign against PPR and strategic anthelmintic treatment of small ruminants are recommended.