本地早蜜橘胚性愈伤组织的离体诱导

柑橘胚性愈伤组织诱导技术在柑橘种质资源离体保存、理化诱变、原生质体融合、外源基因转化等柑橘种质保存及新种质创制过程中有着重要的基础研究地位。目前随着柑橘分子生物育种技术的快速发展,胚性愈伤组织作为柑橘理化诱变、原生质体融合、外源基因转化的理想起始材料,其在柑橘种质创新研究中的基础应用作用更为明显。柑橘胚性愈伤组织目前主要可通过败育的成熟胚珠、未成熟胚珠、实生幼苗胚轴茎段、子叶以及花药培养等途径来诱导获得。     

枇杷原生质体植株再生

以普通批粑（价iobotlya joponica Lindl．）‘解放钟’等品种的不同发育期胚为材料诱导愈伤组织。起源于鱼雷形胚的胚性愈伤组织是游离原生质体的合适材料。最合适的游离原生质体的酶混合液为：l％纤继素酶＋2％果胶酶干！2％甘露醇，其原生质体得率高于L 07／g愈伤组织，原生质体成活率在 95％以上。原生质体经液体培养 4天后，出现第一次细胞分裂，并继续分裂，形成大量肉眼可见的小愈伤组织。愈伤组织在含3％山梨醇的培养基土培养3周后，其表面出现茎原基，并进一步发育成芽苗。芽苗移入生根培养基后生成完整植株。已获得解放钟和‘白梨’移栽成活的原生质体再生植株。     

柑桔原生质体融合及遗传转化的研究进展

柑桔原生质体再生及融合,为克服柑桔杂交育种中所遇到的珠心胚干扰、杂交不亲和问题提供了有效手段,使柑桔的品种改良上有所突破。迄今已获得20个种(品种)的原生质体再生植株。叶肉原生质体植株的再生使这一技术具有更广泛的应用价值。已经获得有10个属间和5个种间的体细胞(胞质)杂种,不仅丰富了柑桔属的基因资源,同时为品种改良和遗传研究提供了十分珍贵的材料。遗传转化技术的兴起,为柑桔育种提供了新的手段,柑桔基因文库的建立以及DNA探针的制备,为进一步进行柑桔遗传研究和品种改良开辟了崭新的领域。     

柑桔胚珠培养及胚状体发生的研究

选用‘Peng柑’、‘锦橙’、‘桃叶橙’、‘华农本地早’花后7周幼果胚珠进行培养，其胚状体发生的百分率分别是：48.5%、21.2%、19.8%、6.4%；胚性愈伤组织则为：28.2%、13.5%、15.8%、5.8%。各品种胚状体和胚性愈伤组织发生的百分率明显不同，与品种胚数多少相一致。不同激素和有机物对柑桔胚珠培养、胚状体的发生及胚性愈伤组织形成产生不同的影响，多单胚的‘华农本地早’仅从基本培养基中产生胚状体和胚性愈伤组织。胚珠培养中，胚状体发生的方式，根据来源不同分为三种：第一种是由胚珠（或已黄的球形胚上）长出白色的胚性愈伤组织，继而产生胚状体；第二种是在已分化的幼苗下胚轴或根部产生胚性愈伤组织和胚状体；第三种是在畸形胚上直接不断的分化出胚状体。     

柑桔畸形胚再生植株的研究

在柑桔胚状体高频发生、三倍体幼胚培养、败育胚的抢救和原生质体培养及融合研究过程中 ,常常伴随着畸形胚的大量形成 ,如多胚、多子叶、次级胚、幼根愈伤化肥大等 ,难以萌发成苗 ,实际上降低了植株再生频率 ,从而影响了柑桔的生物技术育种进程。本研究的目的是通过改变培养方式和培养条件探讨畸形胚成苗能力 ,这对进一步提高植株再生频率具有一定的指导意义。1　材料与方法1 1　畸形胚的诱导从花后 6～ 7周龄的新会橙、柑、葡萄柚的幼果中挑出幼胚珠接种于愈伤组织诱导培养基 (ＭＴ +ＢＡ 10ｍｇ 1)上 ,2 0天后长出白色的愈伤组织 ,经继…     

柑桔胚性细胞系的建立

将乙烯作用的专化抑剂──硝酸银应用于柑桔胚珠培养中，通过交替继代处理和不断选择，成功地建立起能供给原生质体分离并具有良好再生能力的胚性愈伤组织。     

柑桔试管苗生根试验初报

柑桔试管苗生根试验初报＊权银（中国农业科学院柑桔研究所重庆４００７１２）通过胚、胚状体、胚性愈伤组织等快速繁殖来产生植株，生根较为困难，特别是不易抽发侧根；通过愈伤组织产生的无根试管苗（或芽）易在先端先产生愈伤组织再分化根，显然影响了试管苗生长和移栽...     

新疆雪莲胚性愈伤组织的诱导及原生质体分离

以新疆雪莲无菌叶片为材料,诱导其产生胚性愈伤组织,再以胚性愈伤组织为分离原生质体的起始材料,研究质壁分离时间、渗透压浓度、酶液组合、酶解时间等因素对其原生质体分离效果的影响。结果表明:对诱导胚性愈伤组织有较好效果的培养基组合为:MS+2,4-D 0.1mg/L+BA 0.5 mg/L+NAA 1.5 mg/L+葡萄糖30 g/L;原生质体分离最佳体系为:含纤维素酶2.5%、离析酶0.2%、果胶酶1%、MES 0.1%和甘露醇10%的酶解液,在温度(26±1)℃,pH 5.8条件下酶解14~16 h,游离原生质体的产量和活性均较高。     

几种抗生素对柑桔胚性愈伤组织,原生质体生长的影响

本文试验了４种抗生素对柑桔胚性愈伤组织，原生质体生长的影响，认为在柑桔的遗传转化中宜选用潮霉素磷酸转移酶（Ｈｐｔ）基因为选择标记基因，以潮霉素作为筛选剂，即使是使用新霉素磷酸转移酶基因作为选择标记基因，也不宜使用卡那霉素作为筛选剂，同时确定了柑桔遗传转化后的筛选时宜采用的抗生素浓度。     

生长素和细胞分裂素诱导植物胚性愈伤组织研究进展

植物胚性愈伤组织在植物研究与应用中是一种重要的试材,有很多关于植物胚性愈伤组织诱导方法研究的报道。生长素和细胞分裂素被广泛应用于胚性愈伤组织的诱导,是胚性愈伤组织诱导的关键因子。阐述了生长素和细胞分裂素在植物胚性愈伤组织诱导及体细胞胚胎发生过程中的作用,讨论了其在植物胚性愈伤组织诱导中的作用、使用方法与原则,为愈伤组织诱导、愈伤组织胚性化诱导等研究中植物生长调节剂的使用提供依据。     

红姜花胚性细胞悬浮体系的建立和原生质体培养

以红姜花(Hedychium coccineum)未成熟花丝和花药为试材,研究了红姜花胚性愈伤组织的诱导、细胞悬浮体系的建立以及原生质体的培养。结果表明:在MS+4mg/L 2,4-D+4mg/L NAA+1mg/L 6-BA+30g/L蔗糖+7g/L琼脂上经过120d培养诱导出了愈伤组织,愈伤组织在增殖培养基上经过继代筛选获得浅黄色、松散易碎的胚性愈伤组织。胚性愈伤组织通过3个月的悬浮培养,得到均质稳定的胚性细胞悬浮系。以胚性悬浮细胞(ECS)为起始材料分离原生质体,酶解试验表明,在原生质体分离过程中,用于原生质体分离的酶液需要保持一定的渗透压以保护原生质体不被破坏。当甘露醇的浓度为0.14mol/L时,原生质体产量最高,达到2.25×105个/mL PCV ECS(packed cell volume,PCV)。在看护培养系统中,原生质体经过7d的培养,细胞第一次分裂,经过14d培养,细胞分裂频率达到12.3%,28d时,细胞团形成频率达到4.2%。所形成的细胞团具有典型的胚性细胞特征。     

柑桔胚珠培养及胚状体发生的研究

选用‘椪柑’、‘锦橙’、‘桃叶橙’、‘华农本地早’花后7周幼果胚珠进行培养.其胚状体发生的百分率分别是:48.5%、21.2%、19.8%、6.4%;胚性愈伤组织则为:28.2%、13.5%、15.8%、5.8%.各品种胚状体和胚性愈伤组织发生的百分率明显不同.与品种胚数多少相一致.不同激素和有机物对柑桔胚珠培养、胚状体的发生及胚性愈伤组织形成产生不同的影响.多单胚的‘华农本地早’仅从基本培养基中产生胚状体和胚性愈伤组织.胚珠培养中,胚状体发生的方式,根据来源不同分为三种:第一种是由胚珠(或已黄的球形胚上)长出白色的胚性愈伤组织,继而产生胚状体:第二种是在已分化的幼苗下胚轴或根部产生胚性愈伤组织和胚状体;第三种是在畸形胚上直接不断的分化出胚状体.     

不同培养条件对柑桔胚性愈伤组织离体诱导的影响

以5个不同品种柑桔为试材,研究比较了不同培养基激素浓度、接种外植体类型及不同品种实生试管苗下胚轴对柑桔离体培养外植体愈伤及胚性愈伤诱导分化的影响.结果表明:下胚轴外植体胚性愈伤诱导效果以BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L为好,而子叶外植体则以BA 2.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L或更高激素浓度条件为宜;外植体胚性愈伤诱导能力以下胚轴最强,子叶与幼根外植体次之,上胚轴最弱.5个供试柑桔品种下胚轴胚性愈伤诱导能力“本地早蜜桔”最强,其次是“四季桔”、“南丰蜜桔”,再次为“刘本橙”,“罗浮金弹”最弱.     

柑桔胚性细胞系的建立

将乙烯作用的专化抑制剂——硝酸银应用于柑桔胚珠培养中,通过交替继代处理和不断选择,成功地建立起能供给原生质体分离并具有良好再生能力的胚性愈伤组织.     

柑桔染色体倍性操纵与育种

柑桔绝大多数品种为二倍体.通过染色体倍性操纵进行品种改良的工作近些年有较大发展.作者从技术角度概述了柑桔倍性操纵的途径.以培养三倍体无核品种为目标的育种工作开展得较为系统,并育出了三倍体商业品种.原生质体融合为培育异源多倍体柑桔提供了一条新途径,获得了一批异源四倍体.胚乳培养获得三倍体的研究有新的突破.     

荔枝体胚发生过程中的细胞学观察

以荔枝三月红胚性愈伤组织为材料,采用改良的石蜡切片法观察荔枝胚性愈伤组织结构及体胚发生过程,结果显示荔枝的体胚发生经历球形、心形、鱼雷形、子叶形4个过程;荔枝在胚性细胞分裂发育形成体胚之前,出现与周围细胞明显不同的界限,形成细胞间隔离;比较荔枝胚性愈伤组织与非胚性愈伤组织的细胞学特性,发现胚性愈伤组织具有核大、质浓、染色深、细胞排列紧密等特点,与非胚性愈伤组织明显不同。通过系统观察荔枝胚性愈伤组织结构以及胚性细胞分裂、生长方式和体胚发生过程,为胚性愈伤组织的利用提供细胞组织学依据。     

枣愈伤组织培养及其应用研究进展

愈伤组织是进行植物离体培养与生物技术研究的常用材料。近年来，枣愈伤组织培养及其应用研究取得了重要进展。对枣茎段、叶片、花药和胚等不同组织的愈伤诱导培养体系及其在植株离体再生、多倍体诱导、遗传转化、悬浮细胞系建立、原生质体培养等领域的应用研究进展进行了综述，对今后的相关研究工作进行了展望，以期为枣愈伤组织培养的技术优化和科学利用提供借鉴和参考。     

甜菜原生质体培养再生植株的研究

以栽培甜菜的未授精胚珠成胚为外植体，在ＭＳ附加ＮＡＡ和ＢＡ的培养基上诱导愈伤组织，选择胚性愈伤组织进行继代培养，从该愈伤组织分离原生质体并以液体浅层法或半固体琼脂糖法培养在一系列培养基上，植板率为０．０１％－１．２％。再生愈伤组织形成后，转入固体培养基（ＭＳＢ）上培养，再转入分化培养基上分化出苗，分化率可达２．５％，由愈伤组织上切下分化苗在生根培养基上很容易诱导生根。     

柑桔原生质体分离及再生植株的研究

用0.3％的果胶酶和0.3％的纤维素酶处理锦橙(Citrus sinensis Osbeck)胚性愈伤组织16小时,得到91.2％具有活性的原生质体。培养4天时,出现第一次细胞分裂,二个月时,再生出胚状体。胚状体转入加有赤霉素和硫酸腺嘌呤的培养基中一个月,再生成完整的植株。原生质体再生出的胚状体中,没有发现有染色体数目的变异。锦橙非胚性愈伤组织的原生质体能分裂形成细胞团,但没有再生出植株。对这种原生质体的再生和利用作了讨论。     

菠萝非胚性愈伤组织的类型及其器官发生

以菠萝[Ananas comosus(L.)Merr.]非胚性愈伤组织为材料,利用离体培养及组织细胞学等方法研究了其在增殖、分化过程中的特性和再生规律。在增殖培养基上经过3次以上继代培养后,非胚性愈伤组织形态上逐渐表现出一定差异。根据其形态结构、分化能力和组织细胞学特征,可把非胚性愈伤组织分为节瘤状组织、薄壁组织团、致密深层愈伤组织和表面疏松愈伤组织4种类型;在增殖培养基MS+3.0mg/LBA+2.0mg/LNAA上,一种类型的非胚性愈伤组织通常只会生长出同类型的非胚性愈伤组织,但通过改变培养基配方等方法可使不同类型之间发生转换。同时,增殖继代过程中的器官发生现象很常见,通常是在薄壁愈伤组织表面细胞分化成具有分生能力的细胞,然后进行不定芽的分化。4类非胚性愈伤组织都可以通过拟原球茎、多芽体以及不定芽的形式进行器官发生;也可以经胚性诱导由体细胞胚发生途径再生成植株,其中拟原球茎产生体细胞胚的能力最强,多芽体其次。生长素及细胞分裂素对非胚性愈伤组织的形态结构、分化途径以及增殖能力有很大的影响。