广东省和海南省象耳豆根结线虫的鉴定

运用线虫比较形态学、结合同工酶、mtDNA-PCR、rDNA-IGS-PCR技术,对采自中国广东和海南2个省的根结线虫进行鉴定.在海南省定安的木豆(Cajanus cajan)、海南省海口的木豆和番石榴(Psidium guaja-va)、广东省番禺的辣椒(Capsicum annuum)和南瓜(Cucrbita mosechata)及广东省遂溪的豇豆(Vigna sinensis)上发现象有耳豆根结线虫(Meloidogyne enterolobii).这是首次在海南省外发现象耳豆根结线虫,同时还发现该线虫的2个新寄主,即木豆和南瓜.     

福建省象耳豆根结线虫的鉴定及分子检测

从福建省闽南地区的胡萝卜、辣椒和空心菜根系发现一种线虫,通过形态鉴定,结合ITS1-5.8S-ITS2 r DNA区、28S D2-D3区、COⅡ/IrRNA线粒体基因和线粒体DNA 63 bp重复区序列分析等分子生物学方法,将其鉴定为象耳豆根结线虫;采用特异性引物Me-F/Me-R对不同田块的象耳豆根结线虫种群进行进一步检测,结果表明,空心菜为象耳豆根结线虫的新寄主;受侵染的番石榴可能是闽南地区蔬菜象耳豆根结线虫病的重要初侵染源.由此说明,象耳豆根结线虫已经成为福建省蔬菜上的重要病原物,对蔬菜产业发展具有潜在重大威胁.     

甘薯根结线虫病病原——象耳豆根结线虫的鉴定

自福建省泉州市发生严重根结线虫病的甘薯地采集线虫样本,经形态学观察发现该线虫与象耳豆根结线虫(Meloidogyne enterolobii)原始描述相符;rDNA-ITS序列分析表明,其与GenBank中象耳豆根结线虫同区域序列的相似性达99%以上;利用象耳豆根结线虫特异性引物进行PCR扩增,得到236 bp的特异性片段,据此确定所采集的甘薯根结线虫为象耳豆根结线虫.这是首次在福建省甘薯上发现象耳豆根结线虫.     

基于转录组测序番茄抗南方根结线虫相关基因的挖掘

[目的]筛选番茄抗南方根结线虫侵染相关基因,为其克隆及番茄抗病育种提供参考依据.[方法]用Illumina HiSeqTM4000对南方根结线虫侵染和未侵染番茄抗性材料F5样本的转录组进行测序,基于差异表达基因本位数据库(G0)和Pathway显著性富集(KEGG)分析,挖掘参与抗南方根结线虫的相关基因.[结果]筛选到...     

象耳豆根结线虫对7个品种番茄生长的影响

【目的】探究象耳豆根结线虫 Meloidogyne enterolobii 对番茄品种的最低接种数量,以及接种量对7个番茄品种致病力及生长的影响.【方法】 通过温室大棚盆栽番茄,将孵化的象耳豆根结线虫二龄幼虫悬浮液制成10个不同浓度,通过灌根的方法将悬浮液接种至番茄根部,60 d后,测定番茄植株高度、地上部分鲜质量、根结数量、卵块数量和根内幼虫总数量,比较致病力差异.【结果和结论】象耳豆根结线虫二龄幼虫最低接种量为0.08条·cm^-3,与其他不同种类的根结线虫相比,具有更强的致病力.象耳豆根结线虫强致病力对番茄抗性和易感病品种均造成严重伤害.     

植物罹病组织中象耳豆根结线虫的LAMP快速检测方法

【目的】建立一种基于环介导等温扩增（Loop-mediated isothermal amplification,LAMP）技术,从植物罹病组织中直接检测象耳豆根结线虫（Meloidogyne enterolobii）的快速检测方法,为象耳豆根结线虫的监测和防治提供技术支持。【方法】根据象耳豆根结线虫与其它根结线虫ITS序列差异设计LAMP特异性引物,通过对LAMP反应条件中的Mg2+、dNTPs、甜菜碱和反应时间进行优化,同时对检测体系的特异性和灵敏度进行验证,建立一种从罹病植物组织中检测象耳豆根结线虫的LAMP快速检测方法。【结果】象耳豆根结线虫LAMP检测体系优化结果表明在Mg2+的浓度为5.0 mmol•L-1、dNTPs的浓度为2.4 mmol•L-1、不添加甜菜碱、反应时间为45 min的条件下,扩增效率最优。本研究建立的LAMP检测方法能够从11个植物线虫种群中特异检测出象耳豆根结线虫,检测灵敏度为1/200000头线虫DNA,比普通PCR灵敏100倍,能够直接从植物根结中检测出象耳豆根结线虫,准确度为100%。【结论】本研究以rDNA-ITS序列为靶基因建立象耳豆根结线虫LAMP快速分子检测方法,具有特异性强、灵敏度高、简单、快速、经济等特征,能够从罹病植物组织中快速准确地检测出象耳豆根结线虫,具有极高的实践应用价值。     

番茄响应南方根结线虫侵染相关转录因子的初步分析

为明确番茄接种根结线虫后基因种类和表达量在转录水平的变化规律，利用RNA-seq对未接种及接种南方根结线虫2龄幼虫6、12、24和48 h的番茄进行转录组测序，探究番茄响应南方根结线虫侵染相关的关键转录因子，并采用qRT-PCR方法对测序结果进行验证。结果显示，接种南方根结线虫后6、12、24和48 h分别有350、390、580、1 154个基因差异表达，其中差异表达转录因子分别为11、11、19、50个。这些转录因子属于15个家族，其中数量最多的为MYB家族和bHLH家族（均为20个），其次是ERF家族19个、WRKY家族15个、bZIP家族9个。南方根结线虫侵染过程差异表达最明显的主要为ERF、WRKY、MYB和bHLH家族转录因子，其中Solyc03g005520、Solyc02g094270和Solyc09g066350显著上调，接种后48 h log₂FC分别为 9.16、6.49和6.33；Solyc02g079280、Solyc12g100140 和Solyc04g072460显著下调，接种后48 h log₂FC分别为-2.60、-1.72和-1.70。qRT-PCR验证结果显示，6个随机选取基因的表达趋势与测序结果基本一致。以上结果表明，ERF、WRKY、MYB和bHLH家族转录因子可能参与番茄与南方根结线虫互作，在番茄响应南方根结线虫侵染反应中发挥着重要的调控作用。     

海南岛茄果类蔬菜根结线虫种类鉴定

应用形态学、同工酶分析及mtDNA分析等鉴定方法对采自海南岛12个市县的14个茄果类根结线虫进行鉴定,结果发现14个种群中,6个样本为象耳豆根结线虫(Meloidogyne enterolobii),2个样本为象耳豆根结线虫(M.enterolobii)和南方根结线虫(M.incognita)的混合种群,另外6个样本为常见的南方根结线虫(M.incognita)。所有14个种群中象耳豆根结线虫的数量跟南方根结线虫的种群数量相同,证明象耳豆根结线虫种群已得到进一步扩散,其对海南冬季瓜菜生产特别是茄果类蔬菜的危害日趋严重,应引起广泛注意。     

中国北方稻田及其周边环境中根结线虫种类鉴定

【目的】了解我国北方稻田及其周边环境中根结线虫的种类,为进一步制定水稻根结线虫病的防治策略提供参考。【方法】2020和2021年春季从我国河南、山东、宁夏、北京、吉林、黑龙江、新疆、甘肃、河北、辽宁、山西、陕西和内蒙古13个省（直辖市/自治区）的连片稻田、周围田埂、旱地等采集了1 032份土样,每份土样与灭菌河沙混合后平均分成3等份分别放入花盆中,盆中一半播水稻一半播番茄,50 d后检测水稻或番茄根系是否有根结产生。挑取阳性样品根结中的雌成虫,制作会阴花纹玻片,对根结线虫种类进行形态鉴定;同时利用我国常见6种根结线虫特异性引物对土样中的根结线虫种类进行分子鉴定。【结果】生物测定结果显示,有119 份土样能够引起水稻或番茄幼苗产生根结,总检出率为11.53%,其中宁夏回族自治区土样检出率最高,为33.33%。在根结线虫种类鉴定中发现,拟禾谷根结线虫（Meloidogyne graminicola）为北方水稻产区优势种,占鉴定样品的96.83%;花生根结线虫（M.arenaria）、北方根结线虫（M.hapla）、南方根结线虫（M.incognita）、象耳豆根结线虫（M.enterolobii）和爪哇根结线虫（M.javanica）分别占鉴定样品的84.13%,52.38%,31.75%,15.87%和3.17%。受1,2,3,4,5和6种根结线虫侵染的土样比例分别为11.11%,28.57%,28.57%,28.57%,3.18%和0%。其中最常见的为拟禾谷根结线虫、南方根结线虫、花生根结线虫和北方根结线虫混合侵染（23.81%）,其次为拟禾谷根结线虫和花生根结线虫混合侵染（22.22%）,再次为拟禾谷根结线虫、花生根结线虫和北方根结线虫混合侵染（15.87%）,其他不同种类根结线虫混合侵染的田块比例不超过10.00%。【结论】根结线虫广泛分布于我国北方稻田及其周边环境中,其中拟禾谷根结线虫为优势种,象耳豆根结线虫也已适应低温由南向北扩散,今后应加大研究根结线虫在北方露地低温环境下的适应能力及扩散和危害风险,制定相应的防治措施。     

2种根结线虫Cg-1及其同源基因的克隆和序列分析

采用同源克隆的方法,首次从能克服Mi-1抗性的象耳豆根结线虫(Meloidog yne enterolobii)中克隆了Cg-1同源基因,同时克隆了一个爪哇根结线虫无毒种群的Cg-1及其同源基因.基因序列比较结果显示,象耳豆根结线虫中不存在Cg-1基因,即象耳豆根结线虫中只具有不包含CAATGA片段的Cg-1同源序列,进一步表明Cg-1可能是一个无毒基因.对Cg-1基因序列分析的结果表明,Cg-1基因可能是通过其第三个开放阅读框(ORF)编码的多肽或结构性mRNA或两者共同行使生物学功能.     

海南省番石榴根结线虫病病原的种类鉴定及其寄主范围的测试

对源白海南省3地侵染番石榴的9个根结线虫群体进行了形态观察和同工酶分析，对4个代表性群体在10种常见经济作物15个品种上的繁殖力进行了测试。同工酶鉴定结果表明，病原线虫为象耳豆根结线虫（Meloidogyne enterolobii）。生物测试发现或证实：携带Mi基因的抗性番茄以及菜豆、豇豆、茄子、黄瓜、西瓜、辣椒、烟草为供试象耳豆根结线虫群体的高度适宜寄主，大豆为低度适宜寄主，棉花为非寄主。寄主范围的测试结果提示，象耳豆根结线虫可潜在地对农业生产造成巨大的经济损失。     

基于转录组测序筛选鸡蛋绿壳性状相关基因

【背景】绿壳蛋深受消费者喜爱,蛋壳绿色的深浅在市场上是影响绿壳蛋定价销售的重要参考指标。绿壳蛋的形成受多基因共同调控,蛋壳绿色深浅不一,其分子机理尚不清楚。通过对赤水乌骨鸡蛋壳腺组织进行转录组测序,挖掘其调控绿壳蛋蛋壳颜色深浅的候选基因以及关键信号通路,探究影响蛋壳颜色遗传性,以期发展绿壳蛋的选种选育和提高经济效益。【目的】探讨赤水乌骨鸡的遗传基础,并通过SLCO1B3基因分型对其进行鉴定和筛选,以期通过分子标记在青壳鸡育种规划中提供新的见解,并在后期的选择策略中帮助控制和提高赤水乌骨鸡蛋壳品质的同质性。【方法】以纯系的280日龄赤水乌骨鸡为研究对象,屠宰产浅绿色蛋（QL）和深绿色蛋（SL）的母鸡各3只,采集蛋壳腺以RNA-seq技术检测分析,筛选与蛋壳颜色密切相关的差异表达基因（differentially expressed genes, DEGs）,并对这些DEGs进行GO和KEGG富集分析。利用qRT-PCR技术检测与蛋壳颜色相关的6个候选基因的转录水平变化以验证转录组数据可靠性。【结果】在深绿组与浅绿组中共筛选到93个显著DEGs,有59个基因在深绿组中显著上调,34个显著下...     

海南省番石榴根结线虫病病原的种类鉴定及其寄主范围的测试

对源自海南省3地侵染番石榴的9个根结线虫群体进行了形态观察和同工酶分析,对4个代表性群体在10种常见经济作物15个品种上的繁殖力进行了测试.同工酶鉴定结果表明,病原线虫为象耳豆根结线虫(Meloidogyne enterolobii).生物测试发现或证实:携带Mi基因的抗性番茄以及菜豆、豇豆、茄子、黄瓜、西瓜、辣椒、烟草为供试象耳豆根结线虫群体的高度适宜寄主,大豆为低度适宜寄主,棉花为非寄主.寄主范围的测试结果提示,象耳豆根结线虫可潜在地对农业生产造成巨大的经济损失.     

大庆温室黄瓜根结线虫病原鉴定

[目的]明确大庆温室黄瓜根结线虫的种类,为黄瓜根结线虫病的防治提供理论依据。[方法]从大庆市让湖路区温室采集感染根结线虫的黄瓜根部和根际土壤,分别采用直接剥离法和贝尔曼法分离获得线虫卵囊和雄虫,并由卵囊孵化培养得2龄幼虫,采用显微形态观察结合分子生物学方法对其进行鉴定。[结果]形态学观察表明采集的样本线虫与象耳豆根结线虫(Meloido-gyne enterolobii)特征基本相符;rDNA-ITS序列分析表明,与GenBank中象耳豆根结线虫的序列相似度为98%～100%,采用邻接法构建系统发育树,大庆根结线虫M229、M230和M231与登录号为KF418368.1和JF309154.1等5个象耳豆根结线虫(Meloidogyne enterolobii)处于同一分类地位。[结论]从大庆让湖路区温室采集的黄瓜根结线虫为象耳豆根结线虫。     

耐根结线虫瓜类砧木的筛选

本试验以8份南瓜及1份西瓜为试材,进行了耐根结线虫砧木的筛选。结果表明,砧木1号、砧木2号母本2份材料较耐根结线虫,栗南瓜易感根结线虫。根结线虫的侵染降低了砧木材料地上部的生物量,并对根系生长有影响。耐根结线虫材料根系SOD值在侵染后显现出升高趋势,表明其表达量与耐根结线虫有关。     

根结线虫的致病机理和防治研究进展

综述了根结线虫对植物、根区土壤的影响及防治方法,指出了根结线虫-植物-根区土壤三者间的复杂关系,提出今后根结线虫致病机理的研究应从植物自身和植物根区土壤两方面着手进行,根结线虫的防治还应考虑如何改善根区土壤微生态环境、恢复土壤质量。     

基于Illumina平台转录组测序筛选牛卵泡发育调控基因

运用超声波监测技术,采集母牛发情期出现偏差前的第一大卵泡PDF1和出现偏差后的第二大卵泡ODF2,分别分离卵泡颗粒细胞(GCs),构建RNA文库,用Illumina2000测序;测序结果经数据库搜索和差异表达筛选,采用DAVID软件GO和KEGG pathway分析,经Genecards功能查询,筛选牛卵泡发育相关基因。结果表明:数据库搜索共获得35 325个基因,其中有意义的表达基因15 645个,从中筛选获得差异表达基因608个;GO分析表明,608个差异表达基因中参与生物过程的基因占60.46%,细胞组分的基因占20.08%,分子功能的基因占11.46%;KEGG pathway分析表明,608个差异表达基因通过9条信号通路参与牛卵泡发育调控(P0.05),经Genecards功能筛选,共获得11个与牛卵泡发育密切相关的调控基因——SESN3、COL3A1、CCNE1、CAV1、CACNA1H、ITPR1、PIK3R3、MYC、PTGFR、CDK6、GAPDH,它们直接参与细胞增殖分化及信号通路调节。     

基于转录组测序解析甜玉米耐低温发芽的相关基因

[目的]通过转录组测序分析低温下萌发能力不同的甜玉米自交系,鉴定甜玉米耐低温萌发的相关基因.[方法]利用低温萌发能力强的甜玉米自交系Scil-H7th为供体构建近等基因系,获得不同低温萌发能力的材料,通过生理指标测定、转录组分析和qRT-PCR,筛选分析与低温萌发相关的基因.[结果]对自交系在不同萌发时期和同一萌发时期...