牛不同生长发育时期卵泡酶活性及定位

应用组织化学方法观察牛卵巢卵泡中葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-P酶)和碱性磷酸酶(AP)在不同发育时期的活性变化及其在卵泡内的定位。旨在探讨这两种酶的活性同卵泡生长发育的关系。结果表明：不同发育时期的卵泡数量与AP和G-6-P酶活性阳性反应呈极显著正相关。其中酶活性阳性反应有腔卵泡数量多于腔前卵泡；但G-6-P酶活性阴性反应卵泡显著多于阳性卵泡，说明AP活性强于G-6-P酶。腔前卵泡酶活性位置主要在颗粒细胞和卵母细胞上，而有腔卵泡酶活性位置主要在内膜细胞上。     

高、低产双黄蛋高邮鸭卵巢组织差异分析

本试验以高邮鸭为研究对象,选择双黄蛋高、低产组高邮鸭各6只,颈动脉放血致死后立即采集下丘脑、垂体、肝脏、输卵管及卵巢组织,将采集的卵巢组织通过组织切片、HE染色观察卵巢形态结构,并对双黄蛋高、低产组高邮鸭卵巢中等级卵泡进行统计对比;进行特异性标记蛋白卵泡刺激素受体（FSHR）免疫组化染色,观察两组高邮鸭卵巢阳性细胞表达情况及卵巢颗粒细胞分布;同时提取下丘脑、垂体、肝脏、输卵管及卵巢组织RNA,采用实时荧光定量PCR技术检测FSHR基因的表达。结果显示,双黄蛋高产和低产组高邮鸭卵巢在组织结构及卵泡发育上存在明显差异,高产组卵巢上的卵泡繁密且发育良好,密布着众多小黄卵泡、大白卵泡及小白卵泡,各级卵泡大小差异明显;而低产组卵巢上的卵泡稀疏且发育较为迟缓,小黄卵泡、大白卵泡及小白卵泡数量较少。实时荧光定量PCR检测结果表明,高产组高邮鸭下丘脑、垂体、肝脏及输卵管中的FSHR基因表达量极显著高于低产组（P<0.01）,而卵巢中FSHR基因表达量在两组中差异不显著（P>0.05）。本试验结果表明,双黄蛋高、低产组高邮鸭的卵巢结构及卵泡发育存在显著差异,卵巢上的微环境可能是影响高邮鸭双黄蛋产蛋性能的影响因素。     

高、低产双黄蛋高邮鸭卵巢组织差异分析

本试验以高邮鸭为研究对象,选择双黄蛋高、低产组高邮鸭各6只,颈动脉放血致死后立即采集下丘脑、垂体、肝脏、输卵管及卵巢组织,将采集的卵巢组织通过组织切片、HE染色观察卵巢形态结构,并对双黄蛋高、低产组高邮鸭卵巢中等级卵泡进行统计对比;进行特异性标记蛋白卵泡刺激素受体(FSHR)免疫组化染色,观察两组高邮鸭卵巢阳性细胞表达情况及卵巢颗粒细胞分布;同时提取下丘脑、垂体、肝脏、输卵管及卵巢组织RNA,采用实时荧光定量PCR技术检测FSHR基因的表达。结果显示,双黄蛋高产和低产组高邮鸭卵巢在组织结构及卵泡发育上存在明显差异,高产组卵巢上的卵泡繁密且发育良好,密布着众多小黄卵泡、大白卵泡及小白卵泡,各级卵泡大小差异明显;而低产组卵巢上的卵泡稀疏且发育较为迟缓,小黄卵泡、大白卵泡及小白卵泡数量较少。实时荧光定量PCR检测结果表明,高产组高邮鸭下丘脑、垂体、肝脏及输卵管中的FSHR基因表达量极显著高于低产组(P0.01),而卵巢中FSHR基因表达量在两组中差异不显著(P0.05)。本试验结果表明,双黄蛋高、低产组高邮鸭的卵巢结构及卵泡发育存在显著差异,卵巢上的微环境可能是影响高邮鸭双黄蛋产蛋性能的影响因素。     

超排前有腔卵泡数对青年和牛体内胚胎生产效率的影响

为提高和牛体内胚胎生产效率,优化供体牛筛选标准,本实验选取68头青年黑毛和牛为供体,超排处理前使用B超检查两侧卵巢上直径为3～5 mm的有腔卵泡数,以卵泡总数10和20为临界值将其分为3组,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组有腔卵泡数分别为<10、10～19、≥20个,以CIDR+FSH+PG法进行超排处理后人工授精,比较不同组间胚胎生产效率。结果表明:Ⅲ组黄体数(15.44)、回收胚胎数(13.13)及可用胚胎数(9.56)均显著高于其他2组(P<0.05),Ⅱ组黄体数、回收胚胎数及可用胚胎数显著高于Ⅰ组(P<0.05),即随着供体牛超排前有腔卵泡数增多,回收胚胎数及可用胚胎数随之增多;Ⅲ组胚胎可用率显著低于Ⅰ组,退化率显著高于Ⅰ组和Ⅱ组(P<0.05)。综上,有腔卵泡数对和牛胚胎生产效率有影响,可以作为供体牛筛选标准之一。     

免疫组织化学方法检测牛海绵状脑病(BSE)和羊痒病(Scrapie)

按照本实验室建立的牛海绵状脑病免疫组织化学方法，将自制单克隆抗体4C11与PK酶消化处理的牛海绵状脑病阳性切片和羊痒病阳性切片进行反应，发现单抗4C11不仅能与牛海绵状脑病阳性切片发生强烈的免疫反应，而且也能与羊痒病阳性切片发生强烈的免疫反应。从阳性切片和阴性切片的实验来看，单克隆抗体4C11没有非特异性染色反应，并且也没有背景染色。用瑞士进口单抗6H4进行的对照实验获得了同样的结果。因此，可以用自制的单克隆抗体4C11替代昂贵的进口单抗6H4来监测我国的牛海绵状脑病和羊痒病。     

羔羊不同超排方法的筛选及其对卵母细胞体外成熟的影响

旨在比较不同超排方案对羔羊超数效果及其对卵母细胞体外成熟的效果，筛选最佳幼畜超排方案。试验以1～2月龄绵羔羊为研究对象，分为3组，其中2组(方案I和方案II注射激素)为试验超排组，1组为对照组(未注射激素),探究不同超排方法对绵羔羊卵巢的反应性、卵巢的大小及卵母细胞体外成熟的影响。结果表明，6次×12 h间隔、注射总剂量180 U促卵泡素(FSH)的超排方案Ⅱ效果优于4次×12 h间隔、注射总剂量200 U FSH的超排方案Ⅰ,超排方案Ⅱ获得发育卵泡数(348.00±8.25)枚/只优于超排方案Ⅰ发育卵泡数(265.00±6.32)枚/只；体外培养卵母细胞24 h后，超排方案Ⅱ卵母细胞成熟率45.4%优于超排方案Ⅰ卵母细胞成熟率32.2%。研究筛选出6次×12 h间隔、注射总剂量180 U FSH,第1次注射FSH时同时肌内注射330 U PMSG的超排方案为最佳幼畜超排方案。本试验结果为绵羔羊扩展体外受精所需卵子的来源，缩短世代间隔，产生大量优秀后代，加速育种进程等方向的研究奠定一定的理论基础。     

趾长伸肌肌动球蛋白腺苷三磷酸酶与氧化还原酶染色的相关性分析

哺乳动物骨骼肌的肌纤维可根据肌动球蛋白腺苷三磷酸酶(ATP酶)染色,分成Ⅰ型为红肌纤维又称慢缩纤维,ⅡA型为浅红肌纤维又称中间快缩纤维,ⅡB型为白肌纤维又称快缩纤维,分别适应不同的生理功能[1]。Peter[2]依据肌纤维的代谢特征将其分别归属于琥珀酸脱氢酶反应区分的慢缩氧化型(SO型)、快缩氧化糖酵解型(FOG型)和快缩糖酵解型(FG型)。烟酰胺腺嘌呤二核苷酸四唑氧化还原酶染色技术也是国外学者用于区分骨骼肌纤维结构的重要方法之一[3],该方法简便易行,能够依据骨骼肌纤维的形态特征、生理生化、功能代谢以及组织化学反应,也可将其分…     

Ⅰ型鸭肝炎病毒间接免疫酶染色检测方法的建立

以蔗糖密度梯度离心提纯的Ⅰ型鸭肝炎病毒（DHV—Ⅰ）免疫兔制备兔抗DHV—Ⅰ抗体，建立了检测石蜡组织切片中DHV—Ⅰ抗原的间接免疫酶染色（indirect immunoperoxidase staining，ⅡS）方法，并对DHV—Ⅰ强毒人工感染死亡或濒死雏鸭的各个组织器官进行了检测。结果表明，ⅡS与DHV—Ⅰ感染死亡或濒死雏鸭的肝等呈现阳性反应，与鸭瘟病毒、鸭疫里默氏杆菌、大肠杆菌、沙门菌、多杀性巴氏杆菌感染发病和死亡雏鸭的肝以及健康雏鸭的肝呈现阴性反应。感染DHV—Ⅰ死亡或濒死雏鸭的肝、脾、肾、心、胸腺、腔上囊、胰腺、十二指肠、盲肠、空肠、回肠、直肠的免疫组织化学检测呈阳性或强阳性，DHV—Ⅰ抗原主要分布于感染细胞的细胞质。该ⅡS法具有良好的特异性，可用于DHV—Ⅰ在感染雏鸭组织细胞中的亚细胞定位、DHV—Ⅰ感染雏鸭的实验室诊断、甲醛固定组织的回顾性诊断。     

阿苯达唑和奥芬达唑对猪体内囊尾蚴作用酶组织化学观察

目的　采用酶组织化学技术半定量观察阿苯达唑和奥芬达唑对猪体内囊尾蚴发育过程中乳酸脱氢酶(LDH)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、谷氨酸脱氢酶(GDH)、三磷酸腺苷酶(ATPase)、酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、6-磷酸葡萄糖酶(G6Pase)、黄嘌呤氧化酶(XOD)、脂酶(FE)活性变化的影响。方法　以用药组与不用药对照组猪体内囊尾蚴周围肌组织冰冻切片测各种酶的活性。结果　表明阿苯达唑和奥芬达唑作用后,各种酶活性均出现显著性升高,随后逐渐降低。结论　揭示药物作用后,由于虫体能量代谢障碍,导致物质分解代谢和物质转运代谢代偿性增强,随后由于代谢体系被破坏而酶活性逐渐降低。     

马骨硷性磷酸酶的提纯和性质的研究

用正丁醇抽提、DEAE纤维素(DE—52)和Con.A—Sepharose 4B柱层析等方法从马骨中分离提取硷性磷酸酶(ALP)同工酶。提纯倍数为24倍。从DE—52柱层析中得到两个有部分交叠的酶活性峰。经等电聚焦电泳鉴别其pI值分别为4.22(酶峰Ⅰ)和4.18(酶峰Ⅱ)。两酶峰的热稳定性较差,于56℃作用10min,活性降低60％以上。作用于磷酸苯二钠的km值分别为25mM(酶峰Ⅰ)和6.67mM(酶峰Ⅱ)。尿素对酶活性的影响随着浓度的增高而加强,3M尿素对酶峰Ⅰ抑制达86％,对酶峰Ⅱ达71％。一定浓度的Mg~(2+)对酶有显著激活作用。Zn~(2+),Ca~(2+)激活不明显,高浓度时却有抑制作用。两峰对Ca~(2+)浓度变化有明显的不同反应。EDTA对酶抑制作用显著,Zn~(2+)、Ca~(2+)在一定浓度下对此抑制有轻度逆转作用。上述结果表明,马骨ALP至少有两种同工酶成分。它们不同的等电点、热稳定性差及对尿素敏感等特性,为临床检测马血清中的骨ALP提供了实验依据。     

Leptin Immunohistochemical Staining in the Porcine Ovary

This study aimed to investigate leptin immuno‐staining of the porcine ovary in different reproductive stages. Ovaries from 21 gilts were collected from slaughterhouses. The ovarian tissue sections were incubated with a polyclonal anti‐leptin as a primary antibody. The immuno‐staining in ovarian tissue compartments was calculated using imaging software. Leptin immuno‐staining was found in primordial, primary, preantral and antral follicles. Leptin immuno‐staining was expressed in the oocyte and granulosa and theca interna layers in both preantral and antral follicles. In the corpora lutea, leptin immuno‐staining was found in the cytoplasm of the luteal cells. The leptin immuno‐staining in the granulosa cell layer of preantral follicles did not differ compared to antral follicles (90.7 and 91.3%, respectively, P > 0.05). However, the leptin immuno‐staining in the theca interna layer of preantral follicles was lower than antral follicles (49.4 and 74.3%, respectively, P < 0.001). There was no difference in leptin immuno‐staining in the granulosa cell layer between follicular and luteal phases (92.4 and 89.7%, respectively, P > 0.05). However, the leptin immuno‐staining in the theca interna layer of follicular phase was greater than that in the luteal phase (72.7 and 51.0%, respectively, P < 0.001). These findings indicated that leptin exists in different compartments of the porcine ovary, including the oocyte, granulosa cells, theca interna cells, corpus luteum, blood vessel and smooth muscles. Therefore, this morphological study confirmed a close relationship between leptin and ovarian function in the pig.     

Staining of glycosaminoglycans of intervertebral disc tissue.

Intervertebral discs of six species were stained with Alcian blue and PAS methods to identify glycosaminoglycans. The polyanions are most concentrated in 'ring-like' pericellular areas and in material lying between individual lamellae and bundles of collagen. A slight increase occurs early in life and towards the disc centre. The concentration of glycosaminoglycans cannot be correlated with species which are known to suffer from clinical disc disease, though there appears to be a higher concentration in the discs of the cat and dog than in other species studied.     

Antibody Testing Against Canine Coronavirus by Immunoperoxidase Plaque Staining

The application of the immunoperoxidase (IP) plaque staining procedure (IP test) to the diagnosis of canine coronavirus (CCV) infection was investigated. The IP test did not react with sera from either 15 specific pathogen-free (SPF) dogs or 7 SPF dogs immunized with a multivalent vaccine, including canine parvovirus type 2, canine distemper virus, canine adenovirus type 2, and canine parainfluenza virus. To compare the IP test with the neutralizing test (NT), sera from 240 healthy dogs and from 3 experimentally CCV-infected dogs were examined. All 60 sera positive for NT antibody were positive for IP antibody, and all 180 sera negative for NT antibody were negative for IP antibody in the healthy dogs. The IP titres showed similar changes with time after CCV inoculation to those of the NT titres in the experimentally infected dogs. These findings indicate that the IP test specifically detected anti-CCV antibodies. When the IP test and NT were compared in dogs with diarrhoeic signs. 2.1% of 48 sera and 20.3% of 74 sera, which were all negative for NT antibody, were positive for IP antibody in the dogs of under one year of age and at least one year of age, respectively. The difference between the IP and NT titres (log₁₀ [reciprocal of IP titre] – log₁₀ [reciprocal of NT titre]) for the diarrhoeic dogs of under one year of age (2.350±0.931) was significantly larger than that for the healthy dogs (0.982±0.447) (p<0.0001), the NT titre being negative or very low, despite a high IP titre in many diarrhoeic dogs. Hence, the IP test is more able to detect anti-CCV antibodies, especially in dogs showing clinical signs. The IP-positivity rate was significantly higher in the diarrhoeic dogs of under one year of age (48.7%) than in the healthy dogs (25.0%) (² = 19.844, p<0.0001), suggesting that CCV may contribute to diarrhoea in many juvenile dogs.     

不同荧光染料对苜蓿原生质体染色效果的研究

以紫花苜蓿品种甘农4号(Madicago sativa L.‘Gannong No. 4’)愈伤组织酶解的原生质体为材料,采用FDA、罗丹明B、罗丹明6G、吖啶橙和DAPI共5种荧光染料对原生质体进行染色效果比较,以期为原生质体活力测定、细胞核计数及原生质体融合过程的观察提供参考。结果表明:FDA、罗丹明B、罗丹明6G和吖啶橙均可使紫花苜蓿原生质体清晰染色,可用于细胞融合时亲本原生质体的标识。FDA是检测原生质体活力的理想染料;吖啶橙和DAPI可对细胞核进行特异性染色,可用于融合时细胞核的观察和计数,前者还可用于检测融合细胞的活力。通过对异源融合体的鉴别及其活力的测定,为摸索融合条件和融合细胞的培养提供了理论依据。     

用特殊染色法对猪附红细胞体病的诊断研究

为了筛选出比较理想的诊断猪附红细胞体的染色方法,本试验对患附红细胞体病猪的血液涂片,采用常规的瑞氏、吉-瑞氏染色法和两种特殊染色法,即过碘酸-雪夫氏(PAS)和古德帕斯彻(Goodpas-ture)染色法进行了鉴别比较。结果表明,特殊染色法可将附红细胞体染成乳白色,不论在红细胞的表面还是存在于血浆中均易被检出,而且涂片上没有类似的杂质,不易造成误诊。因此,特殊染色法可用于猪附红细胞体病的临床诊断。     

四种活体染色法评定家禽精子形态的研究

精子形态学检测是预测精子功能最有价值的指标之一,形态异常精子越多受精率越低。用4种伊红-苯胺黑活体染色法(Blom、Bakst、Morisson、Jaskowski)评价三黄鸡和贵妃鸡的精子形态,结果表明:染色方法显著影响精子形态,但不影响精子活率,染液对精子自然形态的保持至关重要。Blom染色法导致精子头部膨胀,畸形精子显著增多(P≤0.01),Bakst、Morisson和Jaskowski染色法均可作为评定家禽精子形态的实用方法,其中Jaskowski染色方法最简便经济,值得在家禽生产中推广应用。     

PAGE凝胶电泳银染方法的改进

为改良DNA聚丙烯凝胶电泳（PAGE）银染方法,采用PCR方法扩增鸡基因组微卫星DNA序列后,经PAGE分离扩增产物和pBR322 DNA/BsuRI标准分子质量,利用2种银染法对微卫星位点进行检测,分析其灵敏度和可行性。结果表明,2种方法都能染出Marker的所有条带,灵敏度均为25 ng,但在染色所需时间和可操作性方面,改进的染色方法优于Sanguinetti等所建立的方法。改进的银染方法染色过程较快,仅需25 min左右,且染色液和显影液可回收利用。该方法能显著提高检测分辨率,在实际应用中提高了染色效率。