免疫试纸条结合RT-PCR法快速检测马铃薯Y病毒

利用马铃薯Y病毒(PVY)免疫试纸条,对PVY进行了快速检测,结果表明,试纸在2 min内,可特异性检出PVY,而健康的叶片无反应.刮下试纸条上显示的检测带,进行RT-PCR,能扩增到与预期大小相同的DNA条带,是对快速检测试纸条检测结果的验证.     

同时快速检测马铃薯X病毒、Y病毒和S病毒试纸条的研制

为实现在马铃薯种薯生产田现场同时快速检测马铃薯X病毒(PVX)、Y病毒(PVY)和S病毒(PVS),采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液,利用抗体与胶体金相结合的特性制备金原子与PVX、PVY和PVS抗体结合物(简称金标抗体),通过三维划膜喷金仪将金标抗体喷射于玻璃纤维上作为金标垫,将PVX抗体、PVY抗体和PVS抗体分...     

抗虫蛋白快速检测试纸条问世

面对名目繁多的抗虫棉种，如何快速检测棉种的抗虫质量，购买到真正放心的抗虫棉种子，为此中国农科院生物所成功研制出“抗虫蛋白快速检测试纸条”，主要用于快速、定性地检测植物样本中是否含有抗虫蛋白，这一技术适用于抗虫农作物的种子质量检测、田间现场快速筛查。     

五氯酚钠胶体金快速检测试纸条的研制

[目的]研制五氯酚钠胶体金快速检测试纸条。[方法]利用胶体金免疫层析技术,研制一种快速检测猪肉、鸡肉、鱼、虾、水质中五氯酚钠的试纸条。[结果]经测试,该试纸条对猪肉、鸡肉、鱼、虾的检测限为1μg/kg,对水质的检测限为2μg/kg,检测时间为15 min,假阳性率和假阴性率均为0。[结论]该方法准确、可靠,使用简便,适合大量样品的现场检测。     

从快速检测禽流感病毒抗原的试纸条看禽流感防控工作

禽流感是由正粘病毒科流感病毒属A型流感病毒引起的禽类的一种烈性传染病,被世界动物卫生组织规定为A疫病,并被我国列为1类传染病。该病由于呈爆发性和以突然死亡及高死亡率为特征,因     

从快速检测禽流感病毒抗原的试纸条看禽流感防控工作

禽流感是由正粘病毒科流感病毒属A型流感病毒引起的禽类的一种烈性传染病,被世界动物卫生组织规定为A疫病,并被我国列为1类传染病。该病由于呈爆发性和以突然死亡及高死亡率为特征,因     

从快速检测禽流感病毒抗原的试纸条看禽流感防控工作

禽流感是由正粘病毒科流感病毒属A型流感病毒引起的禽类的一种烈性传染病,被世界动物卫生组织规定为A疫病,并被我国列为1类传染病。该病由于呈爆发性和以突然死亡及高死亡率为特征,因     

快速检测联苯菊酯的胶体金层析试纸条研制

[目的]采用免疫胶体金技术,建立一种快速检测联苯菊酯的试纸条方法。[方法]利用有机合成方法制备了联苯菊酯半抗原,并与载体蛋白偶联得到免疫抗原,利用人工免疫的方法获得其单克隆抗体,通过酶联免疫法对制备的单克隆抗体的性能进行了验证。联苯菊酯胶体金层析试纸条是利用单克隆抗体标记胶体金,并将联苯菊酯抗原与羊抗鼠Ig G分别喷制到硝酸纤维膜上,与样品垫、吸水垫组装在PVC衬板上制备而成。[结果]联苯菊酯胶体金层析试纸条检测限为500~800μg/kg,具有速度快、简单等优点。此外,该试纸条与大部分的拟除虫菊酯没有明显的交叉反应,利用该试纸条可实现对苋菜中联苯菊酯添加试验的准确判定。[结论]胶体金试纸条方法具有前处理简单、检测速度快、可以肉眼判断结果等优点,该试纸条有望实现对果蔬中联苯菊酯残留的快速筛查。     

应用RT-PCR法快速检测马铃薯X病毒

根据马铃薯X病毒的外壳蛋白基因序列 ,设计合成了 1对寡核苷酸引物 ,从感染PVX的马铃薯病叶组织中提取出病毒的RNA ,进行cDNA合成和PCR扩增 ,得到一条长度约为0 .72kb的特异性PCR扩增产物 ,与理论设计的外壳蛋白基因大小一致。在基因水平上为PVX的检测提供了一种快速、灵敏、简便的新方法 ,为PVX的防治提供了有效手段。     

应用改进的DAS-ELISA法快速检测马铃薯病毒

试验分别用改进DAS-ELISA法和常规DAS-ELISA法对马铃薯4种主要病毒PVX、PVY、PVS、PLRV进行检测,其检测结果完全一致,且灵敏度也基本相同。改进法比常规法操作简便、节省时间,表明改进DAS-ELISA法是一种直观、实用、快速、准确可靠的检测方法,适合种薯生产中大量样品的多种主要马铃薯病毒的快速检测。     

烟草中甲霜灵残留快速检测试纸条研制

为开发快速检测烟草(Nicotiana tabacum L.)中的甲霜灵残留方法,以自制抗原、抗体为材料,研制一种胶体金免疫层析检测试纸条,并以甲霜灵原料合成半抗原,进一步制备抗原免疫后制备甲霜灵单克隆抗体。结果表明,纸条检测限对干烟草为1.5 mg/kg,鲜烟叶为1.0 mg/kg,与其他药物无交叉反应,且与色谱法比较符合率为98%,假阳性率为2.3%。甲霜灵残留试纸条检测烟草时样品处理简单、检测时间短、无需专业人员、经济适用等特点,能够实现烟草快速、准确、批量检测,可为烟草中甲霜灵残留检测提供技术支持。     

应用 RT-PCR 法快速检测马铃薯卷叶病毒

根据马铃薯卷叶病毒的外壳蛋白基因序列,设计合成了一对寡核苷酸引物,从感染ＰＬＲＶ的马铃薯病叶组织中提取出病毒的ＲＮＡ,进行ｃＤＮＡ合成及ＰＣＲ扩增,得到一条长度约６２０ｂｐ的特异ＰＣＲ扩增产物,与理论设计的外壳蛋白基因大小一致。建立了快速灵敏简便的ＰＬＲＶ检测的新方法,其灵敏度要比ＰＬＲＶ的血清学检测方法高１０＾４倍,在基因水平上为ＰＬＲＶ的检测提供了更新手段,并在农业部植物检疫实验所马铃薯病毒检     

莱克多巴胺胶体金免疫层析快速检测试纸条的研制

应用胶体金免疫层析技术建立了一种快速检测莱克多巴胺的方法.采用柠檬酸钠还原法制备胶体金颗粒,标记莱克多巴胺单克隆抗体并喷于玻璃纤维上,莱克多巴胺偶联OVA抗原和羊抗鼠IgG分别结合于硝酸纤维膜上,依次将样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水纸组装切割成莱兜多巴胺胶体金免疫层析快速检测试纸条.试验结果表明,陔快速检测试纸条的灵敏度为5 ng/mL,检测时间为5 min,批内和批问重复性为100%,假阳性率和假阴性宰均为0.     

马铃薯卷叶病毒的RT-PCR快速检测

根据马铃薯卷叶病毒的外壳蛋白基因序列,设计合成了一对寡核苷酸引物。从感染马铃薯卷叶病毒(PLRV)的马铃薯叶片中提取出病毒RNA,进行cDNA合成并运用RT-PCR技术进行体外扩增,得到一条长度约627bp的特异PCR扩增产物,与理论设计的外壳蛋白基因大小一致,而对照未得到任何产物。从而建立了快速灵敏的PLRV检测方法,为PLRV的防治及检测提供了有效手段。     

检测猪瘟病毒胶体金和量子点试纸条的初步研制

为建立快速、简便检测猪瘟病毒(CSFV)抗体的方法,本研究采用胶体金和量子点免疫层析技术,将纯化的重组CSFV E2蛋白作为捕捉抗原,以纯化的抗CSFV E2蛋白多克隆抗体和HRP兔抗猪IgG分别包被于硝酸纤维素膜上,作为质控线(C线)和检测线(T线),优化反应条件,制备免疫层析试纸条,用于临床检测。结果表明,制备的2种试纸条都可用于检测CSFV标准阳性血清,使用不同批次试纸条进行检测,结果无差异。2种试纸条与CSFV阳性血清反应呈阳性,与伪狂犬病毒(PRV)、猪乙型脑炎病毒(JEV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和圆环病毒2型(PCV2)反应呈阴性;胶体金试纸条在临床样品中阳性检出率为84.38%(81/96),与CSFV抗体检测ELISA试剂盒检测阳性符合率为92.05%(81/88);量子点试纸条阳性检出率为87.50%(84/96),与ELISA试剂盒检测阳性符合率为95.45%(84/88)。本研究制备的2种试纸条都具有较好的特异性、敏感性、重复性和稳定性。     

畜禽疫病快速诊断试纸条面市

畜禽疫病快速诊断试纸条,由河南省农业科学院副院长张改平研究员主持,由畜牧兽医研究所生物技术研究室研究人员协作完成.这一产品具有特异、敏感、快捷、简便等特点,检测的时候只需把诊断试纸插入待检样中几秒钟,就可以在1分钟内以直观的方式显示出结果.它可以用于临床确诊、疫情监测、流行病学调查和抗体水平检测,也可以为各种卫生检疫提供简便、快速、特异的技术手段,可满足农村饲养户、大中小型饲养场、兽医站、防疫站以及专业化验室等各层次的需求,具有广阔的推广应用前景,对我国控制和消灭重大疫病、保障畜牧业健康发展有重要的意义.     

猪瘟胶体金快速诊断试纸条的研制

采用柠檬酸钠还原法制备胶体颗粒,用猪瘟(CSF)抗体标记纯化,并包被在玻璃纤维膜上,另外将纯化的CSF抗体和羊抗鼠抗体包被在硝酸纤维膜上,组装成CSF快速检测条,对猪瘟病毒进行检测.结果表明:使用所研制的CSF快速检测条检测收集的70份待检样品,共检出猪瘟阳性病例26例,而经病毒分离鉴定阳性病例有28例,阳性符合率达92.8%;将5份阳性猪瘟病毒稀释后用试纸条和ELISA方法进行敏感性实验,结果表明,诊断试纸条的敏感性较高,用试纸条对鸽新城疫病毒、鸡减蛋综合症病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪繁殖与呼吸障碍综合症病毒进行检测,无交叉反应.     

快速检测生鲜乳中玉米赤霉醇试纸条的研制及其应用

[目的]采用免疫胶体金技术,建立了一种快速检测玉米赤霉醇的试纸条方法。[方法]利用有机合成方法,研制了一种玉米赤霉醇半抗原,将其载体蛋白偶联得到免疫抗原,并通过人工免疫的方法获得单克隆抗体。通过酶联免疫法对制备的单克隆抗体的性能进行了验证。玉米赤霉醇层析试纸条是利用单克隆抗体标记胶体金,其原理是玉米赤霉醇抗原和羊抗鼠Ig G分别喷到自制的膜(硝酸纤维)上,然后将样品垫、吸水垫分别放置在PVC板上,再制成试纸条。[结果]试纸条检测限可达0.5~1.0μg/kg,具有速度快、简单等优点。此外,该试纸条与大部分的玉米赤霉醇没有明显的交叉反应。[结论]利用该试纸条可实现对生鲜乳中玉米赤霉醇添加试验的准确判定。该试纸条有望实现对生鲜乳中玉米赤霉醇残留的快速筛查。     

胶体金免疫层析试纸条法快速检测动物性食品中的氨苯砜

本研究以硝酸纤维素膜为固相载体,包被氨苯砜-OVA偶联物为检测带(T带),酶标羊抗兔二抗为质控带(C带)。依据免疫竞争法原理,建立了胶体金渗滤式试纸条快速检测动物性食品中氨苯砜的方法,最低检出限为20μg/L。样品前处理方法简单,在10min内即可目测判断结果。经高效液相色谱法验证,该方法可用。该方法操作简便、快速,适用于大批量临场动物性食品中氨苯砜残留的快速定性检测。     

PCR－核酸试纸条法快速检测鸽子源性成分

[目的]提高动物源性成分检测效率,建立PCR-核酸试纸条快速检测技术体系。[方法]针对物种特异性DNA序列,设计并标记引物;建立并优化PCR反应体系;利用通用核酸试纸条进行结果判读。[结果]试验表明,PCR-核酸试纸条特异性高;绝对灵敏度为0.001 3 ng/μL,混合样品,实际灵敏度为0.01%;加工处理样品,实际灵敏度为0.1%;最低检测限检出率为100%,稳定性良好。[结论]综上,PCR-核酸试纸条方法是一种既有PCR反应的高灵敏度,又具有免疫学检测的特异性好的特点,同时操作简便的快速检测方法。