RNA干扰不同类型TLR基因对罗氏沼虾免疫相关基因表达的影响

本研究探讨了罗氏沼虾三种Toll样受体基因（Toll-like receptors,TLRs）的生理功能,为罗氏沼虾的免疫研究提供基础。实验通过对罗氏沼虾注射0.4μg/g、0.8μg/g和1.2μg/g（siRNA/体质量）三种剂量小干扰RNA（Short-interfering RNAs,siRNA）将MrTLR1、MrTLR2和MrTLR3三种TLR基因分别沉默。并采用荧光定量PCR技术对这三种Toll样受体基因在注射siRNA后0h、6h、12h、24h和48h鳃组织中的相对表达量进行分析,结果显示1.2μg/g组为最适干扰剂量。选取注射1.2μg/g siRNA后0h、24h以及48h鳃样品,结果显示在沉默MrTLR1后,罗氏沼虾体内髓样分化因子88基因（MyD88）、甲壳素基因（Crustin）和抗脂多糖因子基因（ALF）的相对表达量均出现显著下降,相反MrTLR2的相对表达量出现了上升;将MrTLR2沉默之后,MyD88以及Crustin的相对表达量明显下降;而在沉默MrTLR3后,免疫缺陷同系物基因（IMD）以及ALF的表达量显著上升,此外三种TLR基因的沉默对酚氧化酶原基因（proPO）的表达没有影响。研究结果表明MrTLR1和MrTLR2可调控MyD88以及抗菌肽的表达;而MrTLR3不仅参与Toll信号通路,也可能影响IMD信号通路。     

猪源Toll样受体家族(TLRs)及其在抗病育种中的应用

Toll样受体(toll like receptors, TLRs)作为模式识别受体,不仅能够对机体特异性配体进行识别,并通过多种信号传导通路(由髓样分化蛋白88或由β-干扰素TLR结构域衔接蛋白介导)启动信号传导继而引发特异性的免疫应答,同时还在一些由支原体、病毒、细菌等感染引起的免疫应答过程中发挥了重要的调控功能。因为其重要的免疫调控作用,Toll样受体家族已成为近些年研究的热点,对畜禽抗病育种工作也具有重要的科学意义和应用前景。文章综述了猪源TLRs的种类、功能、遗传变异以及介导的信号通路,并重点介绍了猪源TLRs在抗病育种中的应用,旨在为猪Toll样受体家族基因功能研究及有效遗传标记的筛选提供参考依据。     

接头分子在TLRs信号传导中的作用研究进展

接头分子在Toll样受体(Toll like receptors,TLRs)识别病原相关分子模式或损伤相关分子模式、发动和调节先天与后天免疫反应的信号传导网络中发挥着重要的生物学作用,与Toll样受体相结合后,其下游激酶和转录因子传导信号,激活细胞内核转录因子调控作用元件。TLRs接头分子的共同特征是含有TIR结构域,不同TLRs家族成员可依赖于一个或多个接头分子传导信号。对目前已确认的MyD88、MAL/TIRAP、TRIF、TRAM和SARM 5种接头分子在TLRs信号传导途径中的调控作用进行综述,以期为研究接头分子在TLRs信号传导中的作用机制提供参考。     

TLR4–MyD88信号转导途径介导仙人掌多糖免疫调节的机制研究

为研究仙人掌多糖(ODPs)对Toll样受体4(TLR4)及其转导的MyD88依赖性信号途径中下游重要元件髓样分化因子88(MyD88)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)、IκB激酶β(IKKβ)mRNA和蛋白表达的影响,体外培养小鼠腹腔单核巨噬细胞(RAW264.7),用ODPs干预24 h,收集细胞,分别采...     

Toll样受体在鱼类中的研究进展

Toll样受体是鱼类Toll信号传导途径的一个重要组成成员,对激活鱼类机体对入侵病原微生物的先天免疫应答起着十分重要的作用。对鱼类Toll样受体的结构、组织分布、功能及Toll信号传导途径进行了概述,并对鱼类Toll样受体的研究前景进行展望。     

Toll样受体在家畜繁殖性疾病中的作用

Toll样受体是天然免疫系统中的一种重要模式识别受体,可选择性识别病原微生物而启动天然免疫,在宿主天然免疫和获得性免疫中具有重要作用。此外,大量研究表明,Toll样受体基因的多态性与多种动物的细菌、病毒和寄生虫性疾病密切相关,说明通过Toll样受体基因的研究可为动物分子标记辅助选育研究提供依据。本文就Toll样受体家族的基本情况及其在家畜繁殖病理中的主要作用进行了综述。     

雷帕霉素对大肠杆菌诱发的大鼠乳腺上皮细胞炎症反应的影响

[目的]阐明雷帕霉素(Rapa)对大肠杆菌诱发的乳腺感染的保护作用机制,为临床上寻找乳腺炎防控新方法提供理论依据。[方法]原代培养大鼠乳腺上皮细胞,待细胞贴壁后,试验组采用100 nmol·L~(-1)的Rapa处理4 h后,细胞经感染比(MOI)为10的大肠杆菌处理2 h后用细胞刮刀刮取细胞,收集细胞上清液,用于Toll样受体4(TLR-4)及髓样分化因子(MyD88)蛋白、促炎性细胞因子表达及活性氧(ROS)释放检测。[结果]大肠杆菌刺激原代培养的乳腺上皮细胞后,TLR-4和MyD88蛋白表达显著升高;而Rapa预处理可降低MyD88蛋白表达;同时,大肠杆菌刺激后,乳腺上皮细胞中促炎性细胞因子,如肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)的表达及ROS的释放均显著升高。雷帕霉素能下调促炎性细胞因子的释放,显著降低ROS的释放量。[结论]Rapa抑制MyD88信号通路后可减轻大肠杆菌诱导的大鼠乳腺炎症反应。     

猪精子核酸识别Toll样受体的表达特性

[目的] Toll样受体(Toll like receptors, TLRs)作为天然免疫系统中重要的模式识别受体,在抵御病原微生物感染方面发挥着重要作用.研究猪精子核酸识别TLR的表达和分布情况,为精子TLR信号通路相关功能和抗微生物特性的研究奠定基础.[方法] 采用RT-PCR技术检测公猪精子TLR3、7、8和9 ...     

Toll受体及其配体Spatzle研究进展

Toll是一种与脊椎动物白介素-1受体同源的一种跨膜蛋白,它的首次发现是在果蝇胚胎发育背腹轴分化过程中的作用。同时Toll作为一种病原识别受体,在固有免疫中通过对病原体相关的分子模式的识别发挥作用,通过刺激信号的级联反应导致细胞因子的产生和协同刺激因子的表达。Spatzle作为无脊椎动物发育中的神经生长样信号传导因子新家族中的一员,是Toll的重要配体,在这两条通路中,通过不同的激活途径与Toll结合,诱导信号的产生。     

黄芪多糖对犬血清中白介素水平及肠道Toll样受体信号通路的影响

【目的】研究黄芪多糖(APS)对犬血清中白介素(IL)水平及肠道Toll样受体信号通路的影响,探索APS发挥免疫调节效应的作用及机制。【方法】将18只比格犬平均分为对照组(基础日粮)、APS低剂量组(基础日粮+质量分数1%的黄芪多糖)和APS高剂量组(基础日粮+质量分数2%的黄芪多糖),饲喂2周。于试验0,7,14 d采集血清,ELISA法检测血清中IL-2、IL-4和IL-6水平;第14天,解剖全部犬,采集十二指肠,用RT-qPCR、免疫组化(IHC)和Western Blots等技术检测TLR4信号转导途径相关蛋白(TLR4、TLR7、MyD88、TRAF-6和AP-1)的表达。【结果】试验7和14 d时,与对照组相比,APS低剂量组犬血清中IL-2、IL-4和IL-6水平显著(P0.05)或极显著(P0.01)升高,APS高剂量组犬血清中IL-2、IL-4和IL-6水平均极显著升高(P0.01)。与对照组相比,APS低剂量组犬肠道组织中TLR4、TLR7、MyD88、TRAF-6和AP-1蛋白表达光密度值、蛋白及其mRNA相对表达量显著升高(P0.05),APS高剂量组显著(P0.05)或极显著(P0.01)升高,APS低剂量组与高剂量组之间差异不显著(P0.05)。【结论】黄芪多糖可显著提高犬血清中IL-2、IL-4和IL-6水平,并通过调节Toll样受体通路蛋白表达增强犬机体免疫力。     

柞蚕免疫系统相关基因ApTOLL1的克隆及两种蚕微孢子虫感染下的诱导表达

[目的]鉴定柞蚕的免疫相关TOLL样受体家族基因,以期为进一步探讨柞蚕的免疫机制奠定基础。[方法]克隆了柞蚕免疫系统相关TOLL样受体家族基因,并进行序列和系统进化分析,同时,利用两种蚕微孢子虫侵染柞蚕,检测TOLL样受体相关基因的表达差异,分析不同病原微孢子虫感染柞蚕后所引起的免疫应激差异。[结果]通过cDNA克隆测序获得一个可能与柞蚕免疫相关的基因片段,序列及系统进化分析显示它与家蚕Toll信号通路中的Toll1基因最为同源,将其命名ApTOLL1基因。进一步对柞蚕蛹分别注射家蚕微孢子虫和柞蚕微孢子虫后,通过实时荧光定量PCR技术分析显示,注射家蚕微孢子虫2 h后蚕蛹内ApTOLL1大量表达,而注射柞蚕微孢子虫11 h后蛹内该基因才开始表达,这表明柞蚕Toll信号通路针对不同病原微孢子所诱导产生的免疫响应时间有所差异。[结论]该研究结果首次克隆了柞蚕ApTOLL1基因,并为进一步研究柞蚕的免疫机制提供了帮助。     

Toll样受体2激动剂在疫苗研发中的研究进展

Toll样受体2(TLR2)是Toll样家族中识别配体范围最大的一类Toll样受体(TLR),能够识别包括脂蛋白、脂肽等成分在内的多种配体。通过这些配体激活后的TLR2可以在免疫系统中发挥重要作用,引发特异性免疫反应。通过简要综述近年来对TLR2配体激动剂作为潜在的疫苗佐剂及免疫类药物方面的研究,发现其在免疫反应过程中的优势将为解决疫苗研发中的多种挑战发挥至关重要的作用。     

抹茶对高脂饮食诱导的小鼠肝脏脂质积累和炎症反应的保护作用及机制

本研究比较分析了4个茶树品种抹茶主要化学成分含量的差异,并选取‘茂绿’品种抹茶对高脂饮食诱导的C57BL/6J肥胖小鼠模型进行0.1%、0.5%、1.0%3种剂量的膳食补充。结果表明,抹茶能够在不影响摄食量的情况下改善高脂饮食导致的体质量增长、血糖水平升高和肝脏脂质积累,且效果呈现出浓度依赖性。进一步对小鼠肝脏功能、氧化应激水平和炎症反应情况进行检测,发现膳食添加1.0%的抹茶能够显著抑制高脂饮食诱导的肝脏谷丙转氨酶（alanine aminotransferase, ALT）和谷草转氨酶（aspartate aminotransferase, AST）活性异常升高,提升抗氧化酶活性,降低炎症因子表达水平,并下调Toll样受体4(Toll-like receptor 4, TLR4)和下游My D88基因的表达。综上所述,抹茶能够有效改善食源性肥胖和高脂饮食诱发的肝脏脂肪性病变与炎症反应,对TLR4/MyD88信号通路的抑制是其潜在的作用机制。     

类志贺邻单胞菌感染对杂交鲟脾脏转录组的影响

为探究类志贺邻单胞菌感染杂交鲟脾脏转录组的变化情况,以常见病原菌类志贺邻单胞菌接种约1年龄杂交鲟,于接种后24 h采集杂交鲟脾脏组织样本,提取组织总RNA,采用Ilumina HiSeq 4000^TM进行转录组测序,筛选杂交鲟脾脏差异表达免疫应答基因并进行GO功能分类和KEGG信号通路分析。结果表明：与正常对照组相比,感染组杂交鲟脾脏差异表达基因为14 069个,其中上调基因为10 099个,下调基因为3 970个;GO分析发现,差异表达基因显著富集到免疫效应过程、小分子代谢过程、防御反应、肽链内切酶活性、G蛋白偶联受体活性、肽酶活性、胞外区、胞外区组成部分和细胞骨架等;KEGG分析发现,差异表达基因显著富集在RIG-I样受体信号通路、神经活性配体-受体相互作用、细胞外基质受体相互作用、Toll样受体信号通路、细胞黏附分子、细胞因子-细胞因子受体相互作用、精氨酸生物合成、蛋白质消化吸收、细胞溶质DNA传感途径等,其中直接参与免疫应答的信号通路为RIG-I样受体信号通路、Toll样受体信号通路和细胞溶质DNA传感途径。这一研究为深入探究杂交鲟抵御细菌感染的分子机制提...     

人工感染禽腺病毒血清1型对SPF鸡天然免疫反应的影响

试验旨在探究禽腺病毒血清1型（Fowl adenovirus serotype 1,FAdV-1）感染SPF鸡后产生的天然免疫反应及免疫调控机制。结果表明,感染FAdV-1后,观察组、感染组、对照组SPF鸡均无明显发病和死亡,剖检肌胃和腺胃可见轻微病变。感染初期小肠组织中Toll样受体2(Toll-like receptor 2,TLR2)、5、7、21;禽β-防御素5(Avian β-defensins 5,AvBD5)、8;白细胞介素8(Inter leukin-8,IL-8)、18;MyD88(Myeloid differentiation factor 88,MyD88)、C-Rel及p65基因表达量显著升高（P<0.05）。TLR2、TLR5、AvBD8、IL-8、MyD88、C-Rel和p65在感染后36 h(hour post-infection,hpi)表达趋势一致。感染后期,部分组织中TLR15、AvBD10、AvBD12、IL-8基因表达量显著上调（P<0.05）。试验说明SPF鸡感染FAdV-1初期的先天免疫应答是小肠中通过TLR2、5-MyD88途径...     

昆虫Toll与IMD信号通路研究进展

昆虫抗菌肽是昆虫体液免疫产生的天然免疫因子,受Toll信号通路和IMD信号通路的调控.Toll信号通路主要是昆虫细胞对革兰氏阳性菌和真菌的免疫应答,而IMD信号通路主要参与细胞对革兰氏阴性菌的免疫反应.Toll和IMD信号通路中存在多种调节免疫反应的正、负反馈信号因子.两条信号通路都始于信号通路上游的模式识别受体识别病...     

藏猪与杜长大三元猪免疫器官和组织中 Toll 样受体与抗菌肽基因的表达差异分析

【目的】在哺乳动物中,Toll样受体和抗菌肽基因是先天免疫系统的重要组成部分,在对抗病原体侵袭过程中起至关重要的作用。针对藏猪和杜长大三元猪的Toll样受体和抗菌肽基因在不同免疫器官或组织中的表达差异进行探索,以揭示这些基因对于抗病能力和免疫反应的潜在贡献,为筛选抗病分子标记提供理论支撑。【方法】通过qPCR对6月龄藏猪和杜长大三元猪肺脏、肠系膜淋巴结、腹股沟淋巴结、颌下淋巴结和脾脏中Toll样受体基因（TLR1～TLR9）和两种抗菌肽基因（PBD-1和PR-39）的mRNA丰度进行检测。【结果】在藏猪的免疫器官或组织中Toll样受体与抗菌肽基因的m RNA表达大多数显著高于杜长大三元猪。其中,肺脏中TLR1、TLR2的m RNA表达量均提高50%左右,PR-39提高2.6倍;肠系膜淋巴结中TLR4的表达提高40%,TLR1、PR-39的表达分别提高88%和3倍;腹股沟淋巴结中TLR1、TLR2的表达提高约2倍,TLR9、PR-39的表达提高70%,PR-39的表达更是提高了7倍多;颌下淋巴结中TLR1、TLR2、TLR4、TLR7的表达均高出2倍以上,PR-39的表达也高出近7倍,它...     

大菱鲆(Scophthalmus maximus L.)tlr3基因的鉴定及其在病原感染前后的表达

Toll样受体(Toll like receptor,TLR)是非常重要的病原体模式识别受体,它通过识别微生物特异性分子模式来控制针对病原体的宿主免疫应答,在先天免疫和获得性免疫中起重要作用.迄今为止,已经在动物中发现脊椎动物TLR的22个主要家族成员.尽管以前的研究已经鉴定了几个大菱鲆的Toll样受体基因(tlr2,...     

乌鳢感染鰤诺卡氏菌的转录组反应（英文）

利用转录组技术对鰤诺卡氏菌（Nocardia seriolae）感染的乌鳢（Channa argus）进行分析与比较,以揭示可能的免疫机制,尤其在Toll样受体和Nod样受体的免疫反应．从乌鳢的头肾提取总RNA,采用lllumina HiSeqTM2500进行测序和de novo转录组分析．乌鳢感染鰤诺卡氏菌后,对照组和试验组的clean reads分别是33556284（93.79%）和34202766（93.52%）．利用Trinity软件对unigenes进行注释,从133999条unigenes里,一共106319条unigenes得到注释,占79.34%;NR(NCBI non-redundant protein database)注释54886(40.97%)条unigenes;39795(29.69%)的Swiss-Prot注释;5885(4.39%)条unigenes被KEGG(Kyoto encyclopedia of genes and genomes)注释到335条通路;5753条(4.29%)被注释到GO（Gene ontology）里.3912条unigenes表达差异,其中1552条表达上调(39.67%)和2360条表达下调(60.33％).Toll样受体和Nod样受体的免疫信号通路分别有28和13条差别表达基因发现有调制,12和3个上调,11和6个下调,5和4个unigenes没有显著的变化.经过转录组测序分析显示,乌鳢感染鰤诺卡氏菌后的转录复杂程度高,导致感染个体重诱导表达的基因产品的验证发现,尤其在非特异性免疫系统方面．     

多子小瓜虫感染后草鱼TLR信号通路基因 的表达动态

[目的]明确草鱼Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)信号通路基因在防御多子小瓜虫(Ichthyophthirius multifiliis)感染过程中的免疫作用,为有效防控鱼类多子小瓜虫感染提供理论参考.[方法]以多子小瓜虫感染草鱼后,采用实时荧光定量PCR检测分析在不同时间点(感染后6 h、12 h、1 d、2 d、3 d、5 d和7 d)草鱼部分TLRs基因(TLR1、TLR2、TLR4、TLR9、TLR20和TLR21)、接头蛋白基因(MyD88和TRIF)、信号转导分子(IRAK4和IRAK1)及细胞因子(IL-1β、TNF-α和IFN)在其皮肤和脾脏中的表达动态变化.[结果]草鱼感染多子小瓜虫后,TLR1、TLR2、TLR9、TLR20和TLR21基因在皮肤和脾脏中的表达主要呈上调趋势,TLR4基因在皮肤中主要呈上调表达,在脾脏中则主要呈下调表达;TLR信号通路接头蛋白基因MyD88和TRIF的表达变化趋势明显不同,其中,MyD88基因的表达在感染后第1~3 d均呈显著上调趋势(P<0.05,下同),而TRIF基因的表达在整个试验过程中绝大多数时间点与对照组无显著差异(P>0.05);IRAK4和IRAK1在皮肤和脾脏中的表达也主要呈上调趋势,但在脾脏中IRAK4在感染后第1 d和IRAK1在感染后第6 h的表达呈显著下调趋势;IL-1β和TNF-α在绝大多数时间点均显著上调,但IFN的表达基本没有变化.[结论]草鱼TLR信号通路中的部分TLRs基因(TL1、TLR2、TLR4、TLR9、TLR20和TLR21)、接头蛋白基因(MyD88)、信号转导分子(IRAK4和IRAK1)及下游细胞因子(IL-1β和TNF-α)均参与防御多子小瓜虫感染的免疫反应,尤其是在感染早期和中期发挥关键作用.