原核表达梅花鹿IGF-1成熟多肽对鸡CEF和CEK细胞增殖的影响

本实验利用原核表达载体pET-30a对梅花鹿胰岛素样生长因子-1(Insulin Growth Factor,IGF-1)成熟多肽基因进行诱导表达与纯化,经羟胺裂解和复性后获得重组梅花鹿IGF-1成熟多肽蛋白。再通过MTT法检测重组蛋白IGF-1对鸡胚成纤维细胞(Chick Embryo Fibroblast,CEF)及鸡胚肾细胞(Chicken Embryo Kidney,CEK)增殖的影响。MTT法检测结果发现不同浓度的重组IGF-1成熟多肽皆能促进鸡胚成纤维细胞的增殖,其中,在48 h、终浓度为200 ng/m L时对鸡胚成纤维细胞增殖的影响最显著。但不同浓度的重组IGF-1成熟多肽以及不同处理时间对鸡胚肾细胞增殖均无显著影响。本研究结果说明原核表达的IGF-1成熟多肽可显著促进鸡胚成纤维细胞的增殖,但对鸡胚肾细胞的增殖影响不显著。     

Roscovitine同期化供核细胞对猴—猪异种核移植胚胎发育的影响

[目的]探讨Roscovitine同期化供核细胞对食蟹猴—猪异种体细胞核移植胚胎体外发育的影响,为提高灵长类的核移植效率奠定基础.[方法]活体采集4岁雄性食蟹猴的耳组织,经组织块培养获得纯化的食蟹猴耳成纤维细胞,细胞经固定、染色后用流式细胞仪分析细胞周期分布.以不同同期化方法处理的食蟹猴耳纤维细胞为供体细胞,以体外成熟、去核的猪卵母细胞为受体细胞,利用电融合法构建食蟹猴—猪异种核移植胚胎,观察异种核移植重构胚胎的体外发育情况.[结果]以15 μmol/L Roscovitine处理食蟹猴耳成纤维细胞24、48、72 h获得的G0/G1期细胞比率分别为76.51％、89.69％和90.49％,其中处理48和72h的G0/G1期细胞比率显著高于对照组（P＜0.05）.血清饥饿、接触抑制72 h同期化获得的G0/G1期细胞比率分别为91.12％和90.46％.Roscovitine同期化处理食蟹猴耳成纤维细胞48 h可有效提高食蟹猴—猪异种核移植重构胚胎的囊胚形成率（15.05％）,显著高于血清饥饿同期化处理和接触抑制同期化处理的效果（P＜0.05）.[结论]Roscovitine可有效同期化食蟹猴耳成纤维细胞在G0/G1期,最终提高食蟹猴—猪异种核移植重构胚胎的囊胚形成率.     

流式细胞仪分析法检测黑熊成纤维细胞周期同步化处理效果

分离培养黑熊皮肤成纤维细胞 ,传 3代 ,分别经血清饥饿 2～ 6 d和 10 g/ L Nocodazole处理 2 4 h后 ,用流式细胞仪分析 2个处理组和对照组细胞的周期相 ,以研究黑熊成纤维细胞同步化处理后的细胞周期时相的变化 ,探讨核移植供体细胞的细胞周期对核移植胚胎发育的影响。结果显示 ,血清饥饿组、Nocodazole处理组及对照组的 G0 +G1 期成纤维细胞的百分率分别为 (85 .0 5± 7.0 0 ) % ,(4 5 .9± 3.7) %和 (5 9.3± 6 .7) % ;G2 / M期细胞的百分率分别为 (10 .4± 6 .8) % ,(4 6 .3± 4 .2 ) %及 (2 3.0 5± 1.0 5 ) %。表明血清饥饿法能较好地使黑熊成纤维细胞同步于 G0 和 G1 期 ;Nocodazole处理可以使细胞较大程度同步于 G2 和 M期。     

麋鹿皮肤成纤维细胞的细胞周期同步化研究

为给体细胞核移植提供更多的G0/G1期供体细胞以提高克隆的成功率,本试验采用不同的接触抑制和血清饥饿时间及含羞草酸(mimosine)不同浓度和时间3种方法对麋鹿皮肤成纤维细胞进行同期化处理,然后利用流式细胞仪分析细胞周期.结果表明,接触抑制24 h G0/G1期比例可达91.95%;血清饥饿24 h有89.42%的细胞处于G0/G1期,当处理时间超过144 h细胞凋亡和异常聚集的比例会增加;适宜浓度(0.4 mmol ·L-1)的含羞草酸处理24 h能使麋鹿成纤维细胞同步化至G0/G1期,但易引起细胞损伤.     

麋鹿皮肤成纤维细胞的细胞周期同步化研究

为给体细胞核移植提供更多的G0/G1期供体细胞以提高克隆的成功率,本试验采用不同的接触抑制和血清饥饿时间及含羞草酸(mimosine)不同浓度和时间3种方法对麋鹿皮肤成纤维细胞进行同期化处理,然后利用流式细胞仪分析细胞周期.结果表明,接触抑制24 h G0/G1期比例可达91.95%;血清饥饿24 h有89.42%的细胞处于G0/G1期,当处理时间超过144 h细胞凋亡和异常聚集的比例会增加;适宜浓度(0.4 mmol ·L-1)的含羞草酸处理24 h能使麋鹿成纤维细胞同步化至G0/G1期,但易引起细胞损伤.     

大泷六线鱼鳍、吻端和肾脏组织原代培养的研究

应用组织块培养法,研究了大泷六线鱼Hexagrammos otakii鳍、吻端和肾脏细胞在含有体积分数为20％胎牛血清(FBS)的L-15、DMEM和DMEM/F12 3种培养基中的生长情况,以及人碱性成纤维细胞(bFGF)、硫酸软骨素、Ⅰ型胰岛素样(IGF-Ⅰ)3种生长因子对细胞贴壁率和迁出率的影响.结果表明:大泷六线鱼鳍、吻端和肾脏细胞适宜的体外培养体系为DMEM/F12培养基+20％ FBS,pH为7.2,温度为25℃;在最适培养基中分别添加5.0 ng/mL bFGF、20 μg/mL硫酸软骨素、40 ng/mL IGF-Ⅰ时,3种组织的贴壁率和细胞迁出率均最高;鳍、吻端和肾脏组织分别经培养21、15、18 d后长满单层,主要为成纤维样细胞;采用低渗滴片法制备染色体,3种组织原代细胞的染色体数目为48条.本研究为大泷六线鱼鳍、吻端和肾脏组织细胞系的构建和生物学特性的研究奠定了基础.     

bFGF和IGF-1细胞生长因子对欧洲鳗鲡胸鳍传代细胞生长的影响

为建立一种欧洲鳗鲡病毒性疾病分离、鉴定的细胞模型,深入了解鳗鲡病毒性疾病流行与传播的情况,本试验在欧洲鳗鲡胸鳍传代细胞体外培养的最适条件下,通过添加碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和胰岛素样生长因子1(IGF-1)等可能的传代细胞促长因子,并在限定的时间内收集细胞、进行细胞计数、绘制胸鳍细胞的生长曲线,分析其对欧洲鳗鲡胸鳍细胞生长速率的影响。试验结果提示:在10%FBS L-15全价培养基的条件下,bFGF对欧洲胸鳍细胞的生长有明显的促进作用,最佳效应浓度为10μ.L-1;IGF-1(5～50μg.L-1)不利于欧洲鳗鲡胸鳍细胞的生长。     

抗TGF-β2抗体对青光眼滤过泡瘢痕成纤维细胞周期的影响

目的观察抗转化生长因子-β2抗体(抗TGF-β2抗体)对体外培养的滤过泡成纤维细胞(FB)周期的影响。方法利用手术修复青光眼小梁切除术后失败滤过泡时切除下来的瘢痕组织进行原代细胞培养,获得FB。将浓度为0、0.01、0.1、1mg/L的抗TGF-β2抗体作用于FB 24h以及用半数抑制率(IC50)0.14mg/L作用0、24、48、72h,通过流式细胞仪(FCM)检测抗TGF-β2抗体对细胞周期的影响。结果随着抗TGF-β2抗体浓度增大及作用时间的延长,FBG1期细胞百分数增多,而S、G2期的细胞含量逐渐减少,FB增殖指数呈下降趋势(P<0.05)。结论抗TGF-β2抗体能阻断FB从G1进入S期,使细胞停滞在G1期,从而抑制细胞的增殖过程。     

人羊膜上皮细胞对于生长因子和ORFV的敏感性研究

研究人羊膜上皮细胞(hAEC)在不同生长因子存在时生长速度差异性及在羊口疮病毒(ORFV)作用下形态学变化特征。采用胶原酶-胰蛋白酶联合消化法分离获取hAEC并进行原代培养。分别向培养液中添加40 ng·mL-1表皮生长因子(EGF)和10 ng·mL-1的碱性成纤维细胞生长因子(bFGF),倒置显微镜观察细胞生长和增殖情况,以选择最适宜hAEC原代培养方法。体外实验用ORFV感染hAEC并记录。获得大量hAEC细胞。细胞培养时添加bFGF,hAEC生长和增殖速度显著加快。病毒感染出现明显细胞病变。胶原酶-胰蛋白酶联合消化及培养液中添加10 ng·mL-1的bFGF是hAEC较为适宜的原代培养方法;hAEC对于ORFV具有敏感性。     

泥鳅鳍细胞系的构建及特性分析

采用组织块培养法对泥鳅Misgurnus anguillicaudatus鳍组织细胞进行原代培养,并采用胰蛋白酶消化法传代,目前已传63代。原代培养和早期传代培养所用培养基为DMEM/F12,并添加体积分数为20%的胎牛血清(FBS)、10 ng/mL人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、20 ng/mLⅠ型胰岛素样生长因子(IGF-Ⅰ)和10μg/mL硫酸软骨素。30代以后所用培养基为20%FBS-DMEM/F12,在CO2培养箱(5%,25℃)中培养,培养的鳍细胞形态为成纤维细胞样,群体倍增时间为56.85 h,特征染色体数目为50条;细胞经液氮冷冻保存30 d,解冻复苏后,存活率为81.31%±1.46%。病毒敏感性试验结果表明,泥鳅鳍细胞系对鲤春病毒血症病毒(SVCV)敏感,病毒滴度为105.62TCID50/mL,而对鱼类诺达病毒(YGNNV)不敏感。泥鳅鳍细胞系的建立丰富了鱼类细胞系的种类,并为泥鳅毒理学、病毒学的研究提供了科学依据。     

基于空间栅格技术的丽江烟区植烟生态评价

 着重介绍了基于空间栅格的定量评价方法,并应用GIS的空间栅格技术、空间插值及空间分析技术,以及层次分析法AHP,选取气象、土壤、地形环境方面9项指标,对丽江市全景范围进行了植烟生态的适宜性定量化评价,就定量化评价结果给出丽江烟草种植的发展建议     

构成分子机器的一种新的结构单元: 三联吡啶盐的二醇合成

2－（羟乙氧在）乙基－4，4’联吡啶与a,a’－二（溴甲基）－2，2’联吡啶在乙腈中，油浴50℃反应三天，得到标题化合物，产率为45％，中间体（1）可以通过2-(羟乙氧基）乙基磺酸酯或碘化物与4，4’－联吡啶反应得到。前者具有较高的反应活性。     

中国草本花卉DUS测试现状

为促进新品种权审查提速,尽早实现"快保护",基于DUS测试实践及来源于农业农村部的数据分析,对我国草本花卉DUS测试现状进行总结。草本花卉的新品种权审批由农业农村部植物新品种保护办公室负责,农业系统具有相对完善的测试机构,拥有一支高素质的测试队伍,采用的是官方测试为主,现场考察为辅的实质审查方式。根据我国草本花卉DUS测试机构、测试指南、品种权申请与授权情况和DUS测试基本情况,归纳DUS测试中的常见问题,并提出提高DUS测试质量的建议。面对我国的丰富花卉资源保护重任,草本花卉DUS测试任重而道远。     

3种无公害药剂防治美国白蛾试验

应用3.6%烟碱·苦参碱乳油、25%阿维.灭幼脲悬浮剂、棉铃虫核型多角体病毒3种无公害药剂防治美国白蛾幼虫,结果表明：3.6%烟碱·苦参碱乳油3000倍液，喷药9d后防治效果达100%；25%阿维.灭幼脲悬浮1000倍液和1500倍液，喷药15d后防治效果均达到98%以上，生产上应选择1500倍液；以2.50×106PIB/ml、4.25×106PIB/ml 和1.25×107PIB/ml棉铃虫核型多角体病毒喷洒美国白蛾1-3龄幼虫，15d后防治效果均达到91%以上。核型多角体病毒对鱼虾安全，可在鱼虾养殖等水域美国白蛾防治中大面积应用推广。     

堇菜属Viola植物资源的园林开发前景探讨

介绍了中国堇菜属野生植物的资源数量、分布及观赏特性,并分析了堇菜属植物的园林开发前景。     

Cu^2＋、Zn^2＋、Cd^2＋对罗氏沼虾幼虾的毒性作用

研究了铜、锌、镉三种金属对罗氏沼虾幼虾的毒性作用和积累作用.得到了Cu2+、Cd2+对罗氏沼虾幼虾(L=0.88±0.12cm,W=8.7mg)的24h、48h、72h、96h LC50及安全浓度,两者对罗氏沼虾的毒性Cd2+＞Cu2+.当0.01mg/L≤Cu2+≤0.10mg/L、0.002mg/L≤Cd2+≤0.008mg/L、0.05mg/L Zn2+≤0.85mg/L时,幼虾处在各重金属的各浓度试液中经过20d(Cu2+、Cd2+)和14d(Zn2+)的饲养,均遭受了程度不等的毒性作用,幼虾体长、体重增长率与成活率均不同程度的降低,试验虾体内的Cu2+绝对积累量随着重金属浓度的升高而增加,Zn2+≤0.45mg/L时,幼虾对其绝对积累量随着重金属浓度的升高而增加.受试幼虾对三种重金属积累倍数随着浓度的上升而下降.     

UV、H2O2、UV/H2O2法对水体中萘普生降解效果的研究

萘普生为水体中普遍存在的新型非甾体药物,属于典型PPCPs污染物。采用UV、H2O2、UV/H2O2为处理方法,HPLC为检测方法,研究低浓度萘普生废水的降解效果。结果发现,pH值对萘普生光解效果有直接影响,最佳pH值为4;在最佳pH值条件下,UV/H2O2协同系统对萘普生降解效果最为明显,120 W汞灯为光源照射50 min时,降解效果达到99%;UV法对萘普生降解有一定效果,300 W汞灯为光源照射40 min时,降解效果达到97.6%;H2O2对于萘普生的降解效果并无影响。     

Cu^2＋、Zn^2＋、Cd^2＋对罗氏沼虾幼虾的毒性作用

研究了铜、锌、镉三种金属对罗氏沼虾幼虾的毒性作用和积累作用.得到了Cu2+、Cd2+对罗氏沼虾幼虾(L=0.88±0.12cm,W=8.7mg)的24h、48h、72h、96h LC50及安全浓度,两者对罗氏沼虾的毒性Cd2+＞Cu2+.当0.01mg/L≤Cu2+≤0.10mg/L、0.002mg/L≤Cd2+≤0.008mg/L、0.05mg/L Zn2+≤0.85mg/L时,幼虾处在各重金属的各浓度试液中经过20d(Cu2+、Cd2+)和14d(Zn2+)的饲养,均遭受了程度不等的毒性作用,幼虾体长、体重增长率与成活率均不同程度的降低,试验虾体内的Cu2+绝对积累量随着重金属浓度的升高而增加,Zn2+≤0.45mg/L时,幼虾对其绝对积累量随着重金属浓度的升高而增加.受试幼虾对三种重金属积累倍数随着浓度的上升而下降.     

离子色谱法同时快速测土壤中的F-,Cl-,NO-2,Br-,NO-3,HPO2-4,SO2-4

建立了离子色谱-抑制型电导检测方法同时快速测定风干土壤中的F-,Cl-,NO-2,Br-,NO-3,HPO2-4,SO2-4,分离柱选用Metrohm A supp 4(4×250 mm),淋洗液浓度选择2.5 mmol/L Na2CO3+1.7 mmol/L NaH-CO3,在最佳流速0.8 ml/L条件下洗脱.在优化条件下该方法各种离子检测限对应为0.001 6,0.003 2,0.004 7,0.007 4,0.007 6,0.011 5,0.008 6 mg/L,土壤样品各离子测定相对标准偏差为1.24%～4.08%(n=6),加标回收率为88.9%～102.8%.该方法快速,样品前处理简单,检出限低,精密度高,测定结果可靠.     

马铃薯施用Mg·N·P_2O_5·K_2O肥优化数学模型研究

采用二次回归正交旋转组合设计方法研究Mg、N、P2O5、K2O施用量与马铃薯生产成本、纯收入及产投比的关系,建立了马铃薯生产成本、纯收入及产投比与Mg、N、P2O5、K2O施用量间的优化数学模型。在对模型进行深入分析的基础上,作了计算机模拟试验,提出了2套马铃薯高产、高效栽培的施肥模型:纯收入高于9 000元/hm2,产投比高于2.21时的施肥量为Mg肥(MgSO2)15.697 5～18.742 5kg/hm2,N肥(纯N)35.100 0～45.137 5 kg/hm2,磷肥(P2O5)97.47～155.52 kg/hm2,K肥(K2O)125.685～149.445 kg/hm2。纯收入高于10 000元/hm2,产投比高于3.0施肥量为Mg肥(MgSO2)16.485～27.765 kg/hm2,N肥(纯N)9.552 5～44.697 5 kg/hm2,磷肥(P2O5)63.585～129.915kg/hm2,K肥(K2O)为102.802 5～173.947 5 kg/hm2。