牛GDF9和BMP15基因遗传变异与双胎性状的关系研究

以生长分化因子9(Growth differentiation factor 9,GDF9)基因和骨形态发生蛋白15(Bone morphogenet-ic protein 15,BMP15)基因作为牛双胎性状的候选基因,研究了它们在鲁西牛、秦川牛、南阳牛和中国荷斯坦牛4个品种中的遗传变异,并在鲁西牛群体中研究了其多态位点与双胎性状的关系。结果表明:在鲁西牛中GDF9基因的3′UTR发现缺失突变,而其它3个品种中没有发现该突变。对鲁西牛群体中该多态位点与单、双胎性状之间进行卡方显著性检验表明,单胎牛群体与双胎牛群体基因型分布有极显著的差异(P=0.006),双胎牛群体的B等位基因频率明显大于单胎牛群体。通过生物信息学分析表明,突变体mRNA的二级结构与野生型相比总自由能值差异不大,但突变体mRNA翻译起始位点的二级结构稳定性明显大于野生型。在鲁西牛、南阳牛和秦川牛的BMP15基因中发现编码区第759~762位有GAAA 4个碱基存在缺失突变,但没有检测到突变纯合个体,中国荷斯坦牛中没有检测到该突变。卡方显著性检验表明单胎牛群体和双胎牛群体在该位点基因型组成差异不显著(P=0.947)。     

猪水泡病病毒主要抗原蛋白基因在大肠杆菌中的表达

将编码猪水泡病病毒（ＳＶＤＶ）主要抗原蛋白的基因片段克隆到大肠杆菌表达载体ｐＢＶ２２０的ＰｒＰ１串联启动子的下游,分别构建了重组质粒ｐＢＶ２２０－ＶＰ３（０．６ｋｂ）及ｐＢＶ２２０－ＶＰ３－ＶＰ１（约１．６ｋｂ）,表达的蛋白经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ及Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测,结果表明,表达的ＶＰ３蛋白只与猪水泡病病毒ＶＰ３特异性亚单位抗血清反应,而ＶＰ３－ＶＰ１蛋白未能成功表达。该实验为ＳＶＤＶ疫苗研究奠定了基础。     

猪瘟病毒Erns和E2蛋白重组表达及抗体间接ELISA检测方法的建立

本研究将CSFV Erns和E2基因的主要抗原区进行克隆,构建pET32a-Erns和pET32aEK-E2重组质粒,将其转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达和纯化,以纯化的rErns、rE2重组蛋白为包被抗原,经条件优化,分别建立CSFV rErns和rE2抗体间接ELISA检测方法.SDS-PAGE结果显示,...     

日粮营养成分对动物基因表达的调控

本文综述了近年来有关日粮营养成分影响动物基因表达的研究报道。大量证据表明 ,日粮中的常量养分 ,如碳水化合物、蛋白质、脂肪以及某些微量养分均可在一定程度上影响动物基因的表达 ,这种作用可以发生在转录水平 ,也可以发生在转录后水平 ,进而影响机体的整个代谢过程。上述事实使人们试图通过改变日粮养分组成来达到调控动物生产的愿望变得日益可行。     

饲粮能量水平对乌金猪脂肪组织脂类分解代谢相关基因表达的影响

本试验旨在研究饲粮不同能量水平对乌金猪脂肪组织脂类分解代谢相关基因表达的影响.选取体重约15 kg的乌金猪54头,随机分为3组,每组3个重复,每个重复6头猪,分别饲喂消化能为11.74(低能组)、12.89(中能组)和14.22 MJ/kg(高能组)的饲粮,在体重30、60和100 kg时屠宰取皮下脂肪组织,提取总RN...     

饲粮能量水平对乌金猪脂肪组织脂类合成代谢相关基因表达的影响

本试验旨在研究不同饲粮能量水平对乌金猪脂肪组织脂类合成代谢相关基因表达的影响.选取体重约15 kg的乌金猪54头,随机分为3组,每组3个重复,每个重复6头猪,分别饲喂消化能为11.74(低能组)、12.89(中能组)和14.22 MJ/kg(高能组)的3种饲粮.分别在体重为30、60和100kg时屠宰,测定胴体脂肪率,...     

猪流感病毒血凝素基因原核表达及其在间接ELISA中的初步应用

利用RT-PCR方法扩增猪流感病毒A/Swine/Henan/11/2005(H1N1)血凝素(HA)基因,克隆于pMD18-T载体进行测序。以pMD18-HA为模板、利用带酶切位点的引物再次扩增HA基因的开放阅读框(ORF),克隆到表达载体pET32a中,经双酶切、测序及PCR鉴定得到阳性重组表达质粒pET-HA,将质粒转化到表达宿主菌BL21(DE3)中,经终浓度为1 mmol/L的IPTG诱导,SDS-PAGE结果显示,HA蛋白获得了高效表达,经Western-blot检测证实表达产物具有良好的免疫学活性,在间接ELISA中的初步应用表明具有良好的抗原反应性。本研究为以重组HA蛋白为抗原建立H1亚型猪流感抗体的ELISA检测方法奠定了基础。     

猪肌生成抑制素C末端80氨基酸编码基因的合成及其原核表达

将猪肌生成抑制素编码序列下游883～1 126 bp按大肠杆菌嗜好密码子进行优化,将优化后序列双链分成12个单链片段(F1、F2、F3、R6、R5、R4、F4、F5、F6、R3、R2、R1),采用化学合成方法合成,每对相邻互补片段之间有20 bp序列交叉重叠.F1长38 bp,R1长36 bp,其他片段均40bp长,F1和R1片段两端分别加上限制性内切酶Nco I和Xho I的识别位点序列.经PCR扩增出254 bp片段,该片段与pMD18-T载体连接,转化JM109感受态细胞,所得阳性克隆进行测序分析,得到的克隆序列与设计的序列完全一致,表明成功地获得了猪肌生成抑制素下游编码序列克隆载体.从阳性细菌中提取质粒,经Nc0 I和Xho I酶切,回收254 bp目的片段,定向克隆到pET28a中,转化DH5.受体菌,提取质粒,再转化到BL21(DE3)中,成功筛选出阳性克隆.阳性菌经IPTG诱导,通过SDS PAGE,检测出猪肌生成抑制素的表达.     

猪IL-18基因原核表达载体的构建及表达

以含新兴猪IL-18基因的真核质粒pcDNA3.1-pIL18为模板,扩增出新兴猪IL-18基因,将其定向克隆至原核表达载体pET32c和pET41c的SacⅠ和KpnⅠ位点,构建了原核表达载体pET32c-pIL18和pET41c-pIL18。经酶切和PCR鉴定,表明所构建的重组质粒为特异性新兴猪IL-18基因原核表达质粒。将该重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3)细胞,筛选的阳性菌落经SDS-PAGE分析及Western-blotting分析,表明成功构建了表达重组猪IL-18的大肠埃希菌基因工程菌株。蛋白的可溶性分析表明,重组蛋白呈不可溶表达,在菌体内以不溶性的包涵体形式存在。     

猪瘟病毒Erns基因的克隆及原核表达

从猪瘟病毒石门株血液样品中提取总RNA,通过R-PCR对Erns基因进行cDNA扩增,获得了696 bp的片段.将该片段克隆于T-easy载体后进行序列分析,确认PCR产物为猪瘟病毒Erns基因,从阳性克隆中提取质粒,经Bam H Ⅰ和Hin d Ⅲ双酶切,回收产物亚克隆到pET-32a表达载体中,提取质粒后转化BL21(DE3)感受态细胞,并筛选出阳性克隆,经IPTG诱导后通过SDS-PAGE检测出Erns基因的表达.     

猪生物医学模型研究进展

猪与人不仅在体重、生理特点、器官形成和疾病的发生方面都有高度的相似性,而且二者在基因组序列和染色体结构上有很高的同源性,所以猪已被作为人类研究中最主要的哺乳动物模型.目前,小型猪已被广泛应用于皮肤烧伤、肿瘤、免疫学、心血管病、糖尿病、畸形学和产期生物学、牙科、药理学等多方面的模式研究,以及对黑色素瘤和感染性疾病的基因组学研究中.在控制猪繁殖与呼吸系统综合征发生中的一些可行的基因组学方法,将为人类相似的病毒感染性疾病研究提供重要的参考.     

四翅滨藜AcDREB2转录因子编码基因的克隆及其表达

脱水应答元件结合蛋白(DREB)在植物响应盐和干旱胁迫中发挥重要作用。为研究DREB在耐盐碱耐干旱的先锋植物四翅滨藜(Atriplex canescens)中的功能及其应用前景,本研究设计了一对简并引物,通过PCR扩增和RACE法克隆得到四翅滨藜DREB转录因子编码基因AcDREB2。该基因cDNA全长为867 bp,共编码242个氨基酸。序列BLAST比对与同源性分析结果表明,该基因与其他植物的DREB具有较高的同源性。利用RT-PCR方法进行表达模式分析发现,AcDREB2在四翅滨藜叶中高丰度表达,且其表达受NaCl和渗透胁迫处理的快速诱导,表明AcDREB2参与了四翅滨藜的抗逆响应。     

日粮蛋白质水平对松辽黑仔猪生长性能的影响

选用80±3日龄、体重为22.7±1.1kg的松辽黑仔猪27头,随机分为3个处理,每个处理3个重复,每个重复3头仔猪。通过测量日增重、日采食量、料肉比、腹泻程度及日粮蛋白质消化率,分析日粮蛋白质水平对松辽黑仔猪生长性能的影响。实验表明,在日采食量方面3组日粮无显著差异。日增重方面,1周和2周时对照组与实验组有差异,在整个实验期3组日粮无显著差异。料肉比方面,1周时对照组与实验组有差异,在整个实验期3组饲料的料肉比无显著差异。腹泻方面,17.7%组和14.7%组的腹泻情况优于对照组。蛋白质消化率方面,1d、2周、3周时对照组与实验组有差异,在整个实验期3组日粮差异不显著。实验表明,当日粮蛋白含量为17.7%时松辽黑仔猪有较低的腹泻率和较好的生长性能及蛋白质消化率,并能较好的体现松辽黑猪的种质特性。     

日粮蛋白质水平对奶牛产后卵巢机能恢复及生殖激素的影响

[目的]本试验旨在探讨不同蛋白质水平日粮对奶牛产后卵巢机能恢复及生殖激素的影响,以确定奶牛日粮适宜蛋白质水平.[方法]采用单因素对比实验设计,根据生理状况和泌乳性能相近原则将72头中国荷斯坦牛,随机分成3组,每组24头,分别在围产期和泌乳盛期饲喂9.8%(A1)和13.8%(A2)、12.6%(B1)和16.2%(B2...     

日粮蛋白质水平对奶牛乳尿素氮浓度及氮利用率的影响

采用4×4的拉丁方试验设计,将体重、奶产量和泌乳天数接近的4头经产荷斯坦牛饲喂四种等能量水平不同蛋白质水平(13.2%,14.1%,15.0%和16.2%,干物质基础)的日粮,来研究奶牛乳尿素氮浓度及氮利用率的变化情况。整个试验期共56d,每期14d,1-10d为调整期,11-13d为粪尿收集期。结果发现,随着日粮蛋白质水平的增加,乳尿素氮浓度极显著升高(P<0.01),而氮的利用率随着蛋白质水平的增加而显著下降(P<0.05);乳尿素氮和氮利用率间存在显著的二次曲线关系(P<0.01)。乳尿素氮可以作为反映奶牛日粮蛋白质水平变化的指标,也有可能作为估测奶牛氮利用率的指标发挥作用。     

非洲猪瘟病毒结构蛋白p54的原核表达与反应原性鉴定

p54蛋白为非洲猪瘟病毒(ASFV)的主要结构蛋白之一,参与病毒对靶细胞的吸附与进入。为深入研究p54结构蛋白的抗原性,根据GenBank序列号(MK128995)对应的E183L基因序列,设计1对特异性引物扩增其整个CDS区,并克隆至pET-30a(+)载体,构建了表达p54蛋白的重组质粒pET-30a(+)-p54。用BL21(DE3)转化该质粒,经IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE电泳,可见重组质粒表达出1条分子量约为20 kDa的特异性条带,且重组表达蛋白以融合表达蛋白形式存在于上清。进一步通过His亲和层析法纯化目的蛋白,用ASFV阳性血清进行蛋白质免疫印迹反应,发现表达的重组p54蛋白能与ASFV阳性血清产生特异性反应,表明p54蛋白表达成功。本研究为ASFV抗体ELISA检测方法的建立奠定了基础。     

猪ADAR1基因cDNA全长克隆、序列信息及组织表达分析

旨在克隆猪作用于RNA的腺苷脱氨酶1基因(ADAR1)cDNA全长序列,检测该基因在大白猪不同组织及不同日龄背膘中的表达情况。本研究利用RACE(rapid-amplification of cDNA ends)克隆大白猪ADAR1基因mRNA全长序列,并对其进行生物信息学分析;采用荧光定量PCR方法检测ADAR1在不同组织中的表达水平,并探究不同日龄背膘中ADAR1的表达规律。结果表明,猪ADAR1基因cDNA全长6259bp,编码1145个氨基酸,与人、黑猩猩、猕猴、长臂猿、黄牛、山羊和绵羊的氨基酸序列一致性均不低于85%。该基因编码的蛋白具有2个Zα结合结构域,3个双链RNA结合结构域和1个脱氨酶结构域。ADAR1在心、肝、脾、肺、肾、脑、肌肉、小肠和背部脂肪组织以及7、60、120和180日龄个体背膘组织中均表达,其表达量总体上表现出随个体发育先下降后上升的趋势。综上所述,本研究成功克隆了猪ADAR1基因cDNA全长序列,发现其在猪体内广泛表达,并且在不同日龄猪背膘组织中表达水平存在差异,为今后深入研究ADAR1的功能奠定了理论基础。