柰嫩芽总RNA的提取与纯化

以嫩芽为材料，对Trizol法进行改进提取总RNA，试验结果表明，加入10％PVPP与材料共研磨，并在Trizol提取液中加入1％β-巯基乙醇，可以完全排除酚类物质、色素等杂质的干扰；采用在匀浆液中加入终浓度为20％乙醇沉淀多糖、在裂解液抽提的上相中加入终浓度为3mol／L LiCl沉淀RNA、在RNA的粗提液中加入适量的3mol／LNaAc(pH5．2)和低浓度的无水乙醇沉淀多糖等方法相结合，可以有效地去除多糖的干扰，获得纯净、完整的RNA样品，用它为模板进行RT-PCR反应，获得PPO基因保守区约600～800bp的cDNA条带；而单独采用在匀浆液中加入终浓度为20％乙醇沉淀多糖的方法，不能将样品中的多糖去除干净，这些残留的多糖会抑制逆转录酶的活性，导致逆转录反应的失败。     

(木奈)基因组DNA的提取与纯化

以(木奈)嫩芽为材料,对Dellaporta等用CTAB制备植物基因组DNA的方法进行改良,结果表明,加入质量分数ω=10% PVPP与材料充分研磨,将提取缓冲液的β-巯基乙醇体积分数降低为1%,能有效地去除材料中的多酚类物质;用氯仿/异戊醇(24∶ 1)抽提裂解液2次所获得的上相,加入1/10体积的65 ℃的NaCl/CTAB溶液混匀,再用氯仿/异戊醇(24∶ 1)连续抽提2次,并在DNA粗提液中加入适量高浓度NaCl和无水乙醇沉淀DNA,可以有效地去除多糖的干扰,获得比较纯净的DNA样品;PCR特异性扩增的结果表明,以改良法的DNA为模板可获得PPO基因保守区约600～800 bp特异条带,且扩增条带较亮、无引物二聚体出现.     

(木奈)结果习性的研究

(木奈)为我省名特优果树之一,有青(木奈)(包括油(木奈))和花(木奈)2个系统。其结果枝以花束状果枝和短果枝为主。(木奈)自交能实,其花繁果少、单产较低的主要原因之一是花期遇低温阴雨。(木奈)的生理落果可分2期。果实发育曲线呈双S型,早期与后期果实膨大迅速,中期(胚发育期)膨大较缓慢。     

龙眼组织总RNA提取与纯化方法的研究

针对龙眼组织富含多糖、单宁、色素及酚类物质的特点,采用改良的SDS法和CTAB法进行龙眼顶芽、叶片和茎皮3种组织总RNA的提取与纯化研究。结果表明。两种方法提取的总RNA均具有28、18、5S3条清晰、完整的条带,且无降解现象;A260／A280均介于1．8-2．0之间。A260／A230均大于2．0。说明改良的SDS法和CTAB法提取的总RNA具有很高的纯度。可以满足后续分子生物学研究的要求。     

豚鼠牙齿组织总RNA的提取研究

[目的]研究对RNA丰度值低、硬度大、处理困难的牙齿组织总RNA的提取和纯化技术。[方法]采集10只Hartley豚鼠的切齿和臼齿,分别对其进行了总RNA的提取和纯化,对所提纯的总RNA进行了琼脂糖凝胶电泳鉴定,以及浓度和纯度的测定。[结果]切齿和臼齿总RNA均可见明显的28S、18S和5S三条带,RNA浓度均大于100 ng/μl,A260/A280值均在1.7～2.0之间,A260/A230值在0.1～0.7之间,总RNA的提纯效果较好。[结论]为动物硬组织总RNA的提取提供了技术参考。     

辣椒叶片总RNA快速提取

采用改良的Trizol法对辣椒(Capsicum annuum)叶片的总RNA进行了提取,利用琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法、RT-PCR进行RNA纯度、完整性检测.结果表明,Trizol法提取可获得较高质量的辣椒叶片总RNA,能满足后续的研究需要.     

油茶总RNA及mRNA的分离与纯化

利用改良的CTAB法，从富含本分类糖类等次生物质油茶叶片中分离出总RNA，并从总RNA中，通过两次过Oligo(dT）柱分离纯化得到mRNA。实验结果证明：所提取的RNA和mRNA完整，质量较高，并应用到油茶cDNA文库的构建。     

丹尼斯凤梨叶片总RNA提取方法的比较

以丹尼斯凤梨(Guzmania‘Denise’)叶片为材料,利用Trizol试剂快速提取法、异硫氰酸胍法、苯酚法和CTAB法提取丹尼斯凤梨总RNA,通过RNA的产率、纯度、电泳图等分析来确立适用于丹尼斯凤梨总RNA分离的方法。结果表明,Trizol法提取的RNA具有28SrRNA、18SrRNA和5SrRNA3条较清晰的条带,很少有降解,具有较高的纯度,其他3种方法获得的RNA纯度较低、降解严重,有较多小分子和盐存在,RNA无明显条带出现,而是以小分子RNA弥散状分布。     

非洲菊不同组织总RNA提取

以非洲菊为材料,采用Trizol试剂法、改良的异硫氰酸胍法、CTAB法和尿素—氯化锂法,提取非洲菊的花、花蕾、叶、花梗和根的总RNA。所得RNA经1%琼脂糖凝胶电泳以及紫外分光光度计分析,结果表明Trizol法和改良的异硫氰酸胍法适用于花和根组织,尿素-氯化锂法对花蕾和叶组织RNA有较好的提取效果,而花梗组织RNA最好采用CTAB法。     

番茄叶片及果实总RNA提取方法的比较

以番茄品种Moneymaker(MM)为材料,比较了试剂盒法、Trizol法和Trizol改良法3种方法对番茄叶片及果实不同时期总RNA的提取效果,分别采用核酸蛋白检测仪及琼脂糖凝胶电泳,测定了提取样本总RNA的浓度、纯度及完整性.结果表明,就番茄叶片而言,3种方法提取的总RNA纯度均较好;其中Trizol改良法是提取...     

柰基因组DNA的提取与纯化

以榇嫩芽为材料．对Dellaporta等用CTAB制备植物基因组DNA的方法进行改良，结果表明，加入质量分数ω=10％PVPP与材料充分研磨，将提取缓冲液的β-巯基乙醇体积分数降低为1％，能有效地去除材料中的多酚类物质；用氯仿／异戊醇(24：1)抽提裂解液2次所获得的上相．加入1／10体积的65℃的NaCl／CTAB溶液混匀，再用氯仿／异戊醇(24：1)连续抽提2次，并在DNA粗提液中加入适量高浓度NaCl和无水乙醇沉淀DNA，可以有效地去除多糖的干扰．获得比较纯净的DNA样品；PCR特异性扩增的结果表明，以改良法的DNA为模板可获得PPO基因保守区约600～800bp特异条带．且扩增条带较亮、无引物二聚体出现。     

李细菌性黑斑病病菌侵染过程研究

为培育和筛选Nai李抗病品种提供理论依据，对Nai李细菌性黑斑病病菌侵染Nai李的过程和组织病理解剖进行了研究。结果表明：病原细菌从伤口、气孔和皮孔侵入Nai李果实、叶片和枝梢：病斑深达中果皮数层细胞，自果皮向果心可分为3层，第2层被大量细菌定殖，第3层下缘呈扩散状，接近内果皮；电镜观察表明病原细菌定殖于细胞间隙，使细胞膜和细胞壁离解，叶绿体受损。     

(木奈)幼胚胚性愈伤组织诱导的研究

试验以油（木奈）幼胚为材料，研究外植体大小、低温处理、基本培养基类型、碳源、培养基中的2，4-D浓度、AgNO3的添加与否对胚性愈伤组织诱导的影响，结果表明，长轴为5—7．9mm低温处理18h的幼胚，诱导胚性愈伤组织的效果最好；使用山梨醇（浓度为3％）为碳源、含氮量低的WPM培养基，胚性愈伤组织的诱导效果优于蔗糖为碳源、含氮量高的MS培养基；幼胚胚性愈伤组织诱导的最适2，4-D浓度为2．0mg／L，培养基中附加5．0mg／LAgNO3有助于提高胚性愈伤组织的诱导率。     

幼胚胚性愈伤组织诱导的研究

试验以油幼胚为材料,研究外植体大小、低温处理、基本培养基类型、碳源、培养基中的2,4-D浓度、AgNO3的添加与否对胚性愈伤组织诱导的影响,结果表明,长轴为5~7.9 mm低温处理18 h的幼胚,诱导胚性愈伤组织的效果最好;使用山梨醇(浓度为3%)为碳源、含氮量低的WPM培养基,胚性愈伤组织的诱导效果优于蔗糖为碳源、含氮量高的MS培养基;幼胚胚性愈伤组织诱导的最适2,4-D浓度为2.0 mg/L,培养基中附加5.0 mg/L AgNO3有助于提高胚性愈伤组织的诱导率。     

油木奈 果实生长发育机制初步研究

以成年油（木奈）树为材料,对其果实生长发育过程中果实的生长发育模式、可溶性碳水化合物的流入与内源CTKs、ABA的关系进行了研究.结果表明,可溶性碳水化合物（果糖、葡萄糖、蔗糖和山梨醇）在油（木奈）实中累积依果实不同的生长发育阶段而呈有特征性的变化并与之密切相关.随着果实进入第一换期讯速生长期,其含量尤其果糖和葡萄糖亦显著上升,而在硬核期,其含量又有所下降.在硬核期的后期,可溶性碳水化合物再次大量累积;随着油（木奈）实生长速率的上升,其含量迅速下降;当果实进入第二讯速生长期直至向成长期转变时,可溶性碳水化合物亦快速累积.内源CTKs、ABA的研究表明,ZRs、ABA与果实的第一期迅速膨大及可溶性碳水化合物的累积密切相关;[diH]ZRs、ZRs与启动果实的第二次迅速膨大有关;ABA与果实的第二次迅速膨大及可溶性碳水化合物在果实中的累积呈正相关.文中就油（木奈）果实生长以及品质发育及其内源CTKs、ABA的调控机制进行了讨论.     

油果实中查尔酮合成酶基因PsCHS的克隆表达分析及其启动子的分离

从成熟果实均一化全长cDNA文库中分离了编码CHS基因的全长cDNA序列,命名为PsCHS,根据其序列设计引物,采用Genome Walking方法从基因组DNA中分离获得PsCHS基因上游的调控序列,命名为PsCHSp,PsCHS基因全长1 442bp,其中ORF 1 176bp,编码392个氨基酸;采用APA-Walking技术,获得该基因的5ˊ端调控区,经在线软件预测,启动子序列含有典型的结构特征元件TATA-box和CAAT-box,还包含光响应元件、厌氧诱导元件、胚乳表达相关元件、MYB结合位点以及激素响应元件;RT-PCR结果显示,PsCHS基因在果实发育的前期表达量较高,花后40d表达量最高,随后开始下降,果实成熟期表达量较低。分离获得的PsCHS基因属于查尔酮合成酶基因家族成员之一,查尔酮合成酶(Chalcone synthase,CHS,EC 2.3.1.74)是类黄酮合成途径中的一个重要酶,该基因可能对类黄酮的合成起到调控作用。     

中国李基因组DNA提取方法的优化

3种常用的植物基因组DNA提取方法在中国李上的实验，结果表明：改良陈大明法提取的DNA纯度高，产率高。为满足植物样品较少时提取DNA的需要，将该法进一步优化的结果表明，不使用液氮研磨而是在低温条件下将组织捣碎的微量法同样提取出了产率高、纯度高的DNA，完全满足RAPD扩增的需要。裂解缓冲液中NaCl的浓度以1．1mol／L提取DNA的产率最高，且DNA的质量与其他浓度之间没有明显差异。     

胭脂李多酚纯化工艺及其黄嘌呤氧化酶抑制活性

比较4种不同极性大孔树脂对胭脂李果实多酚的静态吸附和解吸性能,筛选最佳纯化树脂;优化动态吸附与解吸条件参数,分析纯化前后多酚的黄嘌呤氧化酶抑制活性。结果表明:最佳纯化大孔树脂为HP-20,其静态吸附6h达到饱和,静态解吸2h后基本达到平衡;动态纯化最佳工艺条件为上样浓度1.0mg·mL~(-1),上样速度2.0mL·min~(-1),80%乙醇溶液作为洗脱剂,洗脱流速2.0 mL·min~(-1);纯化后胭脂李多酚纯度由25.47%提高至74.89%,黄嘌呤氧化酶抑制活性IC50从179.21μg·mL~(-1)降到72.35μg·mL~(-1),黄嘌呤氧化酶抑制活性提高了2.47倍。