甲基营养型芽孢杆菌Z21发酵条件优化及抑菌活性分析

[目的]芽孢杆菌Z21发酵液对黑曲霉、康氏木霉等真菌有拮抗性,探究Z21菌抑菌活性物质稳定性及抑菌活性分析,可为开发天然防腐剂提供参考.[方法]通过牛津杯法,以康氏木霉为指示菌,优化Z21菌产抑菌活性物质的发酵条件,探讨不同温度、紫外线、pH、作用时间、酶和金属离子对Z21菌抑菌活性物质稳定性的影响;测定硫酸铵沉淀法提...     

枯草芽孢杆菌B-916胞外抗菌蛋白质的性质

用硫酸铵分级沉淀枯草芽孢杆菌B-916胞外抗菌蛋白质,共获得8个蛋白质粗提物,其中硫酸铵饱和度为40%~50%和50%~60%提取的粗蛋白质具有较强的抑菌活性,研究结果表明:硫酸铵饱和度40%~50%和50%~60%提取的粗蛋白质浓度分别为17.261μg/m l和18.899μg/m l,上述两者对水稻纹枯病菌和水稻恶苗病菌有较强的抑菌活性,对马铃薯晚疫病菌则没有抑菌活性;当温度高于40℃时抑菌活性均降低,但在120℃时仍有部分抑菌活性;对pH值适应范围较宽,但在pH值为13.6时抑菌活性均丧失;经蛋白酶K、蛋白酶E、胃蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶处理后,抑菌活性均下降。SDS-PAGE电泳结果表明枯草芽孢杆菌B-916能分泌多种蛋白质,其中硫酸铵饱和度40%~50%和50%~60%提取的粗蛋白质中相对分子质量为48 000的蛋白质可能为抗菌蛋白质。硫酸铵饱和度40%~50%和50%~60%提取的粗蛋白质经Sephadex G-100层析后检测到4个蛋白质吸收峰。     

鱼腥草内生放线菌的分离及杀菌活性研究

[目的]探索鱼腥草内生放线菌的杀菌生物活性。[方法]以新鲜鱼腥草为材料,从其根、茎和叶部共分离得到7株内生放线菌。采用抑制菌丝生长速率法和抑制孢子萌发法对7株内生菌发酵产物进行杀菌活性筛选。[结果]这7株内生放线菌均具有一定抑制活性。其中,编号为K3和K15的2株内生菌发酵液对玉米纹枯病菌、玉米小斑病菌、黄瓜枯萎病菌和禾谷镰刀菌等4种植物病原真菌均有较强抑菌活性,其抑制率均在70%以上,对玉米小班病菌孢子萌发的抑制率在90%以上。进一步研究K15和K3菌株的抑菌活性可知,K15和K3菌株发酵液对玉米小斑病菌的孢子萌发的EC50值分别为3.71和14.97 mg/ml;盆栽和田间试验结果均表明K15和K3菌株发酵液对小麦白粉病有较好的防治效果,对小麦白粉病的盆栽保护和治疗效果均高于70%,田间防治效果分别为77.46%和66.55%。[结论]K15和K3菌株发酵产物具有广谱的杀菌活性,特别对小麦白粉病菌有很好的田间防治效果。     

甲基营养型芽孢杆菌Z21抑菌活性物质对圣女果的保鲜效果

【目的】评估甲基营养型芽孢杆菌Z21发酵液的抑菌活性物质对圣女果的保鲜效果,为开发食品的天然防腐剂或天然保鲜剂提供依据。【方法】采用Z21抑菌活性物质处理无伤、接种腐败菌的有伤圣女果后,对果实的失重率、质构、色泽和蛋白质、可溶性糖、抗坏血酸、丙二醛水平以及霉菌A-3的生长速度进行了测定。【结果】无伤处理下,Z21抑菌活性物质能显著降低果实的失重率,延缓果实软化进程,保持果实较好的感官品质;有伤处理下,Z21抑菌活性物质能显著抑制霉菌A-3的生长速度,降低果实营养物质的消耗速度,保持果实品质,延长贮藏期。【结论】Z21抑菌活性物质可应用于圣女果的贮藏保鲜,且不同含量的处理效果不同。     

蓝萼香茶菜叶与茎乙醇提取物的抑菌活性研究

[目的]研究蓝萼香茶菜叶和茎乙醇提取物的抑菌活性。[方法]通过生长速率法和滤纸片法,分别测定蓝萼香茶菜叶和茎乙醇提取物对2株蝴蝶兰茎腐病疑似病原镰刀菌的EC50和对3株细菌的抑菌效果。[结果]在0～50mg／ml的较低浓度时,叶和茎乙醇提取物的抑菌效果均不显著;在50～200mg／ml的较高浓度时,叶提取物对G^＋菌枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌均有较强抑菌活性,而茎提取物对二者仅具有微弱的抑菌效果,叶和茎提取物对G^-菌大肠杆菌均无抑菌效果。蓝萼香茶菜叶和茎提取物对2种疑似病原镰刀菌M14和M5均具有一定的抑制效果,对M4、M5的EC50值分别为22．72、18．27mg/ml和43．33、42．57mg／ml。[结论]蓝萼香茶菜叶和茎提取物对革兰氏阳性菌具有较好的抑菌作用,对革兰氏阴性菌无抑菌作用,而对镰刀菌则有较强的抑菌效果,这对更好开发和利用该天然药物具有一定的参考价值。     

苏云金芽胞杆菌Vip3Aa11定点突变对棉铃虫杀虫活性的影响

为了寻找苏云金芽胞杆菌Vip3Aa11中对杀虫活性有重要影响的氨基酸,为杀虫机理研究和改造杀虫蛋白提供理论依据,通过序列比对,利用PCR方法对Vip3Aa11中7个氨基酸位点进行定点突变,对各突变蛋白杀棉铃虫的生物活性进行测定。结果表明,获得的Vip3Aa11突变体I358V、I362M、K553I、I663T对棉铃虫的杀虫活性明显降低,而突变体I706N对棉铃虫的杀虫活性有所提高,各突变体对胰蛋白酶敏感性基本一致。说明第358位、362位、663位异亮氨酸及553位赖氨酸对Vip3Aa11杀棉铃虫活性有重要影响。     

E26防治植物根癌病的效果及其稳定性初步研究

选取不致病的葡萄土壤杆菌（Agrobacterium vitis)E26菌株，以HLB－2和K84菌株做对照，对不同来源的36株根癌菌进行室内及温室条件下的抑菌及防治效果试验，结果表明：室内抑菌检测中，E26的抑菌谱要广于HLB－2和K84，对36株根癌菌中的30株有拮抗作用，抑菌率为83．3％，在温室防治检测中，生防菌与根癌菌1：1混合接种指示植物向日葵 时，E26对85．7％的试菌株有防治效果；与对照生防菌比，尤以防治葡萄根癌病最为有效。菌东研究表明，E26后代菌株与初始菌在产素及生产速度方面均无显著差异，表明E26菌株细菌素的产生是一个比较稳定性的性状。     

新狼毒素B抑菌活性构效关系的进一步研究

【目的】进一步研究新狼毒素B的抑菌活性构效关系。【方法】以新狼毒素B为原料,合成了7″-甲氧基(A2-1)、7,7″-二甲氧基(E3)和7,7,″4-三甲氧基(E1)3个新狼毒素B甲醚化产物及4-亚甲基新狼毒素B(D3),利用ESI-MS1、H NMR和13C NMR对其结构进行了表征。选择金黄色葡萄球菌(S.aureas)、无乳链球菌(S.agalactiae)、大肠杆菌(E.coli)和沙门氏菌(Samonellal)为供试菌,采用药敏纸片法对新狼毒素B及其4种衍生物进行了抑菌活性测定。【结果】4种修饰物对所有供试菌的抑菌活性均小于新狼毒素B;3种甲醚化产物在质量浓度为0.625~5mg/mL时,对沙门氏菌没有抑菌活性;对于其他3种供试菌,各供试物的抑菌活性次序为新狼毒素B≈D3>A2-1>E3>E1。【结论】新狼毒素B分子中,7-OH和7-″OH是其主要抑菌活性基团,4′-OH和4-OH对抑菌活性的贡献较小,4-羰基不是主要抑菌活性基团。     

山橙内生真菌的抑菌活性初步研究

[目的]从山橙(Melodinus suaveolens Champ.ex Benth)中分离对植物病原真菌具有拮抗活性的内生真菌,为研发新型高效生物农药提供理论依据.[方法]采用组织培养法对山橙进行内生真菌的分离与纯化,结合菌种形态学和18S rDNA序列比对对其内生真菌进行鉴定;采用平板对峙法和菌丝生长速率法测定内生真菌对香蕉枯萎病4号小种、香蕉炭疽病菌和火龙果溃疡病菌等13株供试植物病原真菌的抑菌活性.[结果]从山橙的根、枝和叶中分别分离得到4、5和11株共20株内生真菌,平板对峙测定结果显示其中的菌株M4对白腐盾壳霉菌、向日葵霜霉病菌、禾谷镰刀菌、茄子黄萎病菌、水稻稻瘟病菌和火龙果溃疡病菌等6株植物病原真菌的抑制率均在30.00%以上,表现出较好的抗菌活性.结合形态特征与18S rDNA序列分析鉴定,确定菌株M4为Phanerochaete sp.,其菌株发酵液在20 mg/mL浓度下对马铃薯黄萎病大丽轮枝菌、马铃薯黑白轮枝菌、禾谷镰刀菌、茄子黄萎病菌、西瓜枯萎病菌、马铃薯立枯丝核菌和香蕉枯萎病4号小种等7株病菌均具有一定的抑制作用,其中对禾谷镰刀菌的抑制效果最佳,抑制率为40.92%,显著高于对其他病原菌的抑制率(P<0.05).[结论]山橙内生真菌富含抑菌活性菌株,蕴藏着潜在的抑菌活性物质,具有良好的应用前景.     

淫羊藿内生真菌的分离及抑菌活性研究

从淫羊藿根、茎、叶分离出23株内生真菌,对分离出的真菌利用琼脂块法进行初选与滤纸片法进行复选,并以金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、大肠埃希菌(Escherichia coli)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、灰霉病菌(Botrytis cinerea)4种微生物为指示菌对分离到的内生真菌进行抗菌活性检测。结果发现,分离得到的内生真菌中有10株菌株具较好的抑菌活性。对大肠埃希菌抑菌效果最好的为标号K7的菌株,抑菌圈直径为18.0 mm;对枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌抑菌效果最好的均为标号B3的菌株,其抑菌圈直径分别为18.0、15.0 mm;而对灰霉病菌抑菌效果最好的为标号K6的菌株,其抑菌圈直径达到12.0 mm。     

乳链菌肽产生菌的筛选及其鉴定

乳链菌肽产生菌中乳链菌肽编码基因、乳链菌肽抗性基因和蔗糖发酵基因紧密连锁.根据该原理,在添加乳链菌肽、蔗糖及溴甲酚紫的M17选择培养基上,从新鲜牛奶样品中定向筛选到6株能在选择培养基上生长的菌株,通过细菌生理生化指标鉴定、16S rDNA序列测定,以及发酵产物的抑菌试验,获得了两株产乳链菌肽的乳酸乳球菌和两株只对乳链菌肽具有抗性但不产生乳链菌肽的乳酸乳球菌.     

水稻温敏黄转绿突变体v5的鉴定和基因定位

通过对粳稻品种‘日本晴’进行60Coγ射线诱变,从M2中筛选到一个温度敏感的黄转绿突变体v5(virescent5)。突变体植株在较低温度(20～24℃)下叶色表现为黄色,而植株在较高温度(26～30℃)下叶色几乎表现为绿色。对叶绿素含量的测定显示出低温条件下突变体叶绿素含量显著低于野生型植株;对相关农艺性状考察显示出突变体单株产量显著低于野生型。遗传分析表明,该突变表型受一对隐性核基因控制,利用F2群体(v5/Kasalath)将OsV5基因定位于第9染色体长臂,在BAC AP005838上标记STS1与BAC AP005702上标记STS5312之间166.5 kb的区段上。     

甲基对硫磷水解酶的随机突变和分子对接模拟

甲基对硫磷水解酶(MPH)能高效降解甲基对硫磷,并能够降解杀螟松、乙基对硫磷和毒死蜱,但降解效率依次降低。为提高MPH对毒死蜱的降解活性,采用易错PCR的方法对MPH进行随机突变,筛选到2株突变体A291V和K173R,并对其进行原核表达,结果表明K173R对毒死蜱的降解活性比MPH提高了41.55%。通过同源建模及与毒死蜱的分子对接对酶的结构和功能进行初步分析,结果发现氨基酸残基R72在酶与毒死蜱的结合中起着重要作用。结合口袋和关键氨基酸的变化可最终导致K173R酶活性的提高。     

抗菌肽MagaininⅡ的原核表达与抗菌活性分析

根据MagaininⅡ氨基酸序列,选用大肠杆菌偏爱密码子,化学合成了2个DNA片段,利用重叠区互补PCR法得到MagaininⅡ的基因序列.构建了融合表达载体pET21 b-MagaininⅡ,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE分析,在5.1 kD处可见目的蛋白条带,...     

鸭抗菌肽Cathelicidin的衍生物设计及抑菌机制研究

鸭抗菌肽Cathelicidin分子[Cath(1-20)]富含疏水性氨基酸及正电荷,通过人工方法设计合成Cath(1-20)的截短肽衍生物,筛选新型安全Cath(1-20)衍生肽,探讨其作用机制。结果表明,与母肽Cath(1-20)相似,三种衍生肽Cath(5-20)、Cath(4-20)、Cath(3-20)均具有明显广谱抑菌活性,MIC值在1~8μmol·L~(-1)范围内,但仅Cath(5-20)溶血及细胞毒性明显降低,治疗指数达19.5,显著高于Cath(1-20)、Cath(4-20)及Cath(3-20)。Cath(1-20)及其衍生肽可破坏E.coli UB1005的内膜完整性,产生去极化作用,并存在时间和剂量依赖效应;透射电镜结果显示Cath(1-20)及Cath(5-20)可破坏细菌细胞膜。研究证实氨基端的色氨酸对鸭抗菌肽Cath(1-20)溶血及细胞毒性起关键作用,其作用靶点主要为细菌细胞膜。     

沿淮地区玉米干物质和氮磷钾积累研究

[目的]研究沿淮地区玉米（Zea maysL.）干物质和氮磷钾吸收积累的规律。[方法]于玉米出苗后20（拔节期）、32（大喇叭口期）、43（抽雄期）、59（抽雄后15 d）、74（抽雄后30 d）、104 d（收获期）共6个时期采集植株样品,测定干物质及氮磷钾含量。[结果]玉米地上部分（包括籽粒）最大干物质积累量为19 395.0 kg/hm2,籽粒产量为9 225.0 kg/hm2。出苗后21~74 d是玉米干物质的主要积累时期。氮磷钾的最大吸收量分别为189.4、141.6和324.6 kg/hm2,每生产100 kg籽粒吸收的N、P2O5、K2O分别为2.05、1.53、3.52 kg。[结论]从玉米氮磷钾的吸收量和吸收进程来看,在沿淮地区,肥料管理上要施足基肥,早追氮肥,这对该区玉米的合理施肥和提高玉米产量有重要的指导意义。     

不同比例蚓粪对玉米生长以及土壤肥力特性的影响

在实验室条件下,将不同比例的蚓粪施用于果园土和菜园土,研究蚓粪对玉米Zea mays生长和土壤肥力特征的影响.结果显示:施用蚓粪能够显著增加玉米株高、地上部和地下部的干质量、叶绿素SPAD值、植株地上部和地下部的全氮和全钾含量(P<0.05);施入10%蚓粪时,2种土壤中的玉米株高均达到最高水平;果园土和菜园土中分别施入5%和10%蚓粪时玉米干物质质量最大.施入20%蚓粪时,2种土壤植株地上部的全氮和全钾含量最多,地下部的全氮含量最多;蚓粪施入能够有效调节土壤pH;随着蚓粪比例的增加,2种土壤的有机质、碱解氮、有效磷以及速效钾的含量明显增高(P<0.05).主成分分析结果显示:2种土壤中,20%蚓粪处理土壤肥力综合特征均显著区别于对照处理(P<0.05).蚓粪可以作为一种环境友好肥料应用于作物生产和土壤培肥,根据不同土壤特征,利用多种农业有机废弃物生产蚓粪,并选择适宜的蚓粪比例进行农业生产,有利于农业的可持续发展.     

山西沁州黄小米基地土壤养分现状及施肥建议

根据沁州黄优质小米典型种植区不同的地形、土壤属性、肥力水平,确定21个监测点,取0～20 cm和20～40 cm深土壤,对其中的主要营养元素状况进行研究,结果表明,沁州黄优质小米产地土壤相对贫瘠,综合肥力水平中等偏低,特别是对谷子的品质和产量影响比较大的有效锌和有效硼含量低下,建议在当地习惯施肥的基础上,增施有机肥,调整氮、磷配比为1∶(0.6～0.7),每公顷增施150 kg钾肥、7.5 kg锌肥和7.5 kg硼肥。     

La3+对拟南芥体内SOD、POD酶活性及养分吸收的影响

以不同浓度La3+对拟南芥进行处理,研究La3+对SOD酶、POD酶活性及N、P、K含量的影响,并分析La3+浓度与N、P、K的含量、SOD酶、POD酶之间相关性。结果表明:La3+浓度为5 mg/L的时候,拟南芥地上部分N、P、K的含量与SOD酶的活性均达到最大值;POD酶活性在La3+浓度为5～20 mg/L时均低于对照;La3+浓度在0、5、10、15、20 mg/L 5个处理下所对应的N、P、K的含量与SOD酶、POD酶的活性之间均存在显著相关性。     

鸭β-防御素2基因的克隆、表达和表达产物的生物学特性分析

 【目的】从鸭组织中克隆鸭β-防御素（AvBD）2基因,在大肠杆菌中高效表达,检测重组鸭AvBD2蛋白的生物学特性。【方法】应用RT-PCR技术从鸭胰腺组织中扩增鸭AvBD2基因,根据已发现的禽β-防御素和部分哺乳类动物β-防御素-2的氨基酸序列构建系统进化树,将该基因克隆到大肠杆菌原核表达载体pGEX-6p-1上进行原核表达,对该重组蛋白进行纯化,测定体外抗菌活性与理化特性。【结果】鸭胰腺组织中克隆出鸭AvBD2基因的cDNA大小为195 bp,编码64个氨基酸。同源性分析表明,鸭AvBD2与其它物种AvBD2同源性较高。凝胶电泳结果显示重组鸭AvBD2蛋白在原核高效表达（分子量约为32 kD）,对多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽胞杆菌有较高抗菌活性,对大肠杆菌与猪霍乱沙门氏菌的抗菌活性较弱。重组鸭AvBD2蛋白对上述细菌的最小抑菌浓度为15.25～125 μg?ml-1,对猪霍乱沙门氏菌最小抑菌浓度大于400 μg?ml-1。重组鸭AvBD2蛋白在-20～100℃或pH 3～12条件下处理30 min后仍有抗金黄色葡萄球菌作用。【结论】克隆并表达了鸭AvBD2基因,表达产物具有抗菌活性,对温度和酸碱度有较高的稳定性。