橘蚜传播柑橘衰退病毒的研究进展

就橘蚜传播柑橘衰退病毒（CTV）的传毒特性，传毒率，影响传毒率因素，与柑橘衰退病流行的关系，对混合株系的虫传分离作用以及带毒橘蚜的分子生物学检测等研究进展作一综述，橘蚜传播CTV的方式为非循回型半持久式，其从甜橙和墨西哥莱檬植株上传播CTV的效率高于棉蚜，橘二叉蚜和乡线菊蚜等蚜虫，橘蚜对CTV不同株系的传毒率有所差异，对重型株系的传毒率较轻型株系高，影响传毒率的因素有蚜虫发育虫态，毒源植物，接毒植物和环境条件等，对橘蚜与酸橙衰退病的发生与流行，特别是衰退型强株系衰退病的发生与流行有密切相关性，它是甜橙衰退病发生与流行的最主要传播介体，橘蚜对CTV具有分离株系的作用，通过单虫传播，可以将混合感染状态的CTV不同株系分离而获得纯化株系，检测橘蚜携带CTV的分子生物学反转录－聚合酶链式反应技术已建立，并已应用于检测橘蚜等蚜虫的单虫带毒情况，讲座认为，不同发育虫态，毒源植物，接毒植物和环境条件等因素对橘蚜传播CTV的影响，特别是毒源植物和温度条件对橘蚜传毒率的影响，及利用橘蚜单虫传播分离CTV株系等方面的研究有等进一步加强。     

褐色橘蚜中柑橘衰退病毒实时荧光定量 RT-PCR检测方法的建立与应用

【目的】建立SYBR Green I实时荧光定量RT-PCR方法,测定褐色橘蚜（Toxoptera citricida）中柑橘衰退病毒（Citrus tristeza virus,CTV）含量。【方法】根据CTV CP25保守序列,设计特异性引物HD-F/R,通过优化得到最佳反应条件建立橘蚜中CTV实时荧光定量RT-PCR,并进行灵敏性、重复性检验,评价该方法的可行性。应用该方法测定单头橘蚜中CTV含量。【结果】该实时荧光定量RT-PCR方法最低检测限为9.0拷贝/μL,其灵敏度是常规RT-PCR的100倍。标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,相关性系数为0.998,扩增效率达104.7%。批内和批间变异系数均小于3.24%,表明该方法重现性好。获毒24 h单头橘蚜中CTV最低含量为2.5×103拷贝,最高含量为1.24×106拷贝。【结论】本研究建立的实时荧光定量RT-PCR检测方法能够准确检测褐色橘蚜中的CTV,可用于研究褐色橘蚜-CTV-寄主互作关系及CTV的流行。     

橘蚜传播柑橘衰退病毒的研究进展

就橘蚜传播柑橘衰退病毒 (CTV)的传毒特性、传毒率、影响传毒率因素、与柑橘衰退病流行的关系、对混合株系的虫传分离作用以及带毒橘蚜的分子生物学检测等研究进展作一综述 .橘蚜传播 CTV的方式为非循回型半持久式 ,其从甜橙和墨西哥莱檬植株上传播 CTV的效率高于棉蚜、橘二叉蚜和绣线菊蚜等蚜虫 .橘蚜对 CTV不同株系的传毒率有所差异 ,对重型株系的传毒率较轻型株系高 .影响传毒率的因素有蚜虫发育虫态、毒源植物、接毒植物和环境条件等 .橘蚜与酸橙砧甜橙衰退病的发生与流行 ,特别是衰退型强株系衰退病的发生与流行有密切相关性 ,它是甜橙衰退病发生与流行的最主要传播介体 .橘蚜对 CTV具有分离株系的作用 ,通过单虫传播 ,可以将混合感染状态的 CTV不同株系分离而获得纯化株系 .检测橘蚜携带 CTV的分子生物学反转录 -聚合酶链式反应技术已建立 ,并已应用于检测橘蚜等蚜虫的单虫带毒情况 .讨论认为 ,不同发育虫态、毒源植物、接毒植物和环境条件等因素对橘蚜传播 CTV的影响 ,特别是毒源植物和温度条件对橘蚜传毒率的影响 ,及利用橘蚜单虫传播分离 CTV株系等方面的研究有待进一步加强     

麦长管蚜在3个小麦品种上取食行为的EPG比较

 【目的】研究不同抗性水平的小麦品种苗期对麦长管蚜的抗蚜机制。【方法】用EPG技术对麦长管蚜在3个小麦品种苗期的取食行为进行检测。【结果】麦长管蚜在品种Ww2730上口针开始接触叶面时间显著晚于小偃22和Batis,第1次持续刺探前的刺探次数显著多于小偃22和Batis,开始刺入叶面后第1次刺探的持续时间极显著短于小偃22和Batis;在Ww2730和小偃22上的PdⅡ-1的平均时间显著长于Batis;Ww2730上C波阶段2个Pd波间的间隔平均时间显著大于另外2个品种;在Ww2730木质部取食（G波）的次数和时间显著大于其它2个品种;Batis上的点G波的次数极显著地高于Ww2730,而平均持续时间极显著短于小偃22和Ww2730;在Batis和小偃22上E1波的总时间,E1波的最大值、跟随E2波的E1波的平均时间均显著大于Ww2730;3个品种间第1次E1波持续的时间差异不显著,但Ww2730和小偃22上其它E1波持续的时间极显著少于Batis;3个品种上其它波形参数,包括F波的次数和总时间、E2波的次数和总时间没有差异。【结论】Ww2730抗麦长管蚜机制可能在于表皮有取食抑制因子,叶肉细胞壁较厚,韧皮部存在次生物质和(或)营养不平衡。小偃22苗期的抗蚜机制为叶肉部细胞壁较厚,细胞密度大。麦长管蚜适应Ww2730抗性的策略可能是在第2次取食时采取了减少在有毒次生物中的暴露时间。     

柑橘衰退病毒株对两种橘蚜不同翅型取食行为的影响

为明确感染柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)的柑橘对不同翅型橘蚜取食行为的影响,通过刺探电位图谱技术(electrical penetration graph,EPG)对褐色橘蚜和棉蚜在感染CTV植株上的取食行为进行持续记录,与健康植株进行比较分析。结果表明,褐色橘蚜无翅型在感病植株的参数均与有翅型无显著差异;棉蚜无翅型在感病植株上的非刺探波(no penetration,np波)和路径波(C波)的总持续时间、电势落差(potential drops,pd波)的次数均显著小于有翅型,C波和刺探的次数均极显著小于棉蚜有翅型。褐色橘蚜无翅型在感病植株上的pd波的次数和韧皮部分泌唾液波(E1波)的平均持续时间显著小于棉蚜无翅型;褐色橘蚜有翅型在感病植株上的C波的次数和总持续时间、刺探的次数、pd波的次数和总持续时间均极显著小于棉蚜有翅型,韧皮部被动吸食波(E2波)的总持续时间和平均持续时间均极显著大于棉蚜有翅型。褐色橘蚜无翅型在感病植株上的刺探和pd波的次数均显著高于健康植株,但总刺探时间相反,np波、C波和非韧皮部阶段的总持续时间极显著高于健康植株,E2波的总持续时间极显著短于健康植株。表明柑橘感病状态对无翅型和有翅型的影响是相似的;柑橘感染CTV对褐色橘蚜无翅型的取食行为影响明显,且偏好健康植株,从而促进病毒的传播。     

玉米蚜在8个玉米品种（系）上取食行为的比较分析

【目的】明确玉米蚜（Rhopalosiphum maidis）在8个玉米品种（系）上的取食行为,筛选出合适的刺吸电位（EPG）参数作为对不同玉米品种（系）进行抗蚜性分类的指标,为抗性玉米材料的筛选提供借鉴。【方法】利用直流型刺吸电位仪（DC-EPG Giga-4）记录玉米蚜在8个玉米品种（系）上的取食行为并进行比较分析,8个品种（系）分别为浚单20、郑单958、良玉88、先玉335、濮改340-1-1、旱21、87-1和齐319;以不同EPG参数为指标,对供试玉米品种（系）的抗蚜性进行分类,并与田间抗蚜性鉴定结果进行比较,之后选择合适的EPG参数,建议其可作为利用EPG技术筛选抗蚜性玉米材料的指标。【结果】玉米蚜在玉米上的EPG波形主要有Np、C、Pd、E1、E2和F波,其中Np、F、E1和E2波与玉米品种（系）的抗蚜性有关。到达韧皮部前：玉米蚜在抗性材料浚单20上的第1次刺探持续时间明显长于感性材料齐319,可能在浚单20叶片表皮上存有阻碍玉米蚜取食的因子;此外,玉米蚜在抗性材料浚单20、郑单958和良玉88上取食时,其F波总时间及平均持续时间显著长于或长于其他玉米品种（系）,说明玉米蚜取食这3个玉米品种时,其口针遇到的机械阻力较大。到达韧皮部后：玉米蚜在抗性材料浚单20和郑单958这两个玉米品种上的第1次E1波出现时间晚,持续时间长,表明这两个品种在韧皮部层次上对玉米蚜的抗性水平较其他玉米品种（系）高;玉米蚜在感性材料齐319和旱21上的E2波总时间及持续吸食时间相对较高,显著大于良玉88,说明玉米蚜喜好取食感性材料齐319和旱21的韧皮部汁液。此外,以各取食波形平均持续时间为指标对各玉米品种（系）进行聚类分析,可把供试玉米品种（系）划分为3类,其抗性强弱为：第Ⅰ类（浚单20、郑单958和良玉88）>第Ⅲ类（濮改340-1-1、旱21和87-1）>第Ⅱ类（先玉335和齐319）。【结论】玉米蚜在不同玉米品种（系）上的取食行为有一定差异,高抗玉米品种浚单20和郑单958在叶片表面和韧皮部层次上对玉米蚜存有一定的抗性。以E和Np波平均持续时间为指标,对各玉米品种（系）抗蚜性进行排序,其结果与笔者课题组前期田间调查结果基本一致。因此,在利用EPG技术筛选抗蚜性玉米材料时,建议以E和Np波作为评价抗性强弱的指标。     

麦蚜取食行为特殊刺探电位波形图(EPG)研究初报

研究了麦长管蚜(Sitobionavenae.Fab.)、禾谷缢管蚜(RhopalosiphumPadi)在不同小麦上的刺探行为,发现了一些特殊的刺探电位波形(EPG),即点G波,E0波和两种F波,并就其可能的生物学意义进行了探讨。初步认为,点G波是蚜虫在刺探途径阶段(C波阶段)的试探性主动吸食过程;E0波是蚜虫口针即将到达韧皮部时短暂的判断、休息和适应过程;一种F波是蚜虫在木质部主动吸食受阻的一种过渡波;另一种F波与蚜虫口针在植物组织中遇阻后的重复回撤与刺探行为有关。结果表明,EPG波形不仅有其稳定性,同时也有其多样性。     

利用EPG技术分析西花蓟马在4种寄主植物上的取食行为

采用直流刺吸电位仪EPG(direct current electrical penetration graph, EPG)技术分析西花蓟马Frankliniella occidentalis雌雄虫在4种寄主植物上的取食行为,探讨西花蓟马雌雄虫取食行为差异及与寄主适合性的相关性。结果表明: (1)西花蓟马在辣椒上的非取食刺探次数显著少于其他寄主植物。雌虫在辣椒、番茄、曼陀罗和矮牵牛上的非取食刺探分别为2311,3289,3610和3044次,雄虫在辣椒、番茄、曼陀罗和矮牵牛上的非取食刺探分别为1527,2772,2214和1968次。西花蓟马在矮牵牛上的短取食刺探显著高于番茄,雌虫在番茄和矮牵牛上的短取食分别为688和1444次,雄虫在番茄和矮牵牛上的短取食分别为159和809次。西花蓟马在矮牵牛上的长取食刺探次数少于在其他寄主植物。(2)雌虫比雄虫产生更多的非取食刺探和短取食刺探,雄虫的长取食刺探显著高于雌虫。在矮牵牛上,雌虫的非取食刺探次数和非取食刺探总时间为雄虫的15倍。在番茄上,雌虫的短取食次数和短取食总时间分别为雄虫的4倍和2倍;雄虫的长取食次数和长取食总时间分别为雌虫的2倍和7倍。由此可见,西花蓟马的取食行为与寄主适宜性之间无显著的相关性。     

基于EPG技术的烟粉虱两个品系取食行为的比较

【目的】Cardinium是烟粉虱（Bemisia tabaci）体内的一种次生内共生菌。有研究表明Q型烟粉虱Cardinium品系（C⁺品系）与未感染品系（C^-品系）的寄主适合度有很大差异,但其产生差异的行为机制尚不明确。论文旨在研究两个Q型烟粉虱品系的取食行为差异,以期从行为学角度揭示两个品系适合度差异的原因。【方法】应用刺吸电位技术（electrical penetration graph, EPG）记录Q型烟粉虱C⁺品系和C^-品系在棉花与番茄上6 h的取食波形,然后对取食波形进行分类统计,共选取19个参数（非韧皮部参数11个,韧皮部参数8个）进行数据分析,比较这两个品系在非韧皮部和韧皮部的取食行为差异。【结果】共获得118个有效记录,其中在棉花上58个（C^-品系28个,C⁺品系30个）,在番茄上60个（C^-品系31个,C⁺品系29个）。在取食棉花的非韧皮部阶段,烟粉虱C⁺品系刺探的总持续时间和路径波（C波）总持续时间显著高于C^-品系（P<0.05）,C⁺品系第一次E波后非刺探时间显著低于C^-品系（P＜0.05）;在韧皮部阶段,两个品系分泌唾液（E1波）和吸食汁液（E2波）的相关参数无显著差异（P＞0.05）,6 h能到达韧皮部阶段的烟粉虱比例也无显著差异（P＞0.05）。在取食番茄的非韧皮部阶段,烟粉虱C⁺品系的刺探总次数和第一次E波前的刺探次数均显著高于C^-品系（P＜0.05）,C⁺品系从第一次刺探到第一次持续取食的时间显著长于C^-品系（P＜0.05）,但刺探的平均持续时间显著短于C^-品系;在韧皮部阶段,两个品系在与分泌唾液和吸食汁液相关的参数均无显著差异（P＞0.05）,6 h能到达韧皮部阶段的烟粉虱比例也无显著差异（P＞0.05）。总体上,烟粉虱C⁺品系和C^-品系在韧皮部的取食行为参数无显著差异;在非韧皮部C⁺品系较C^-品系具有更长的刺探时间和更多的刺探总次数。【结论】烟粉虱C⁺品系和C^-品系在寄主植物韧皮部的取食行为没有差异,在非韧皮部存在显著差异。在非韧皮部的取食行为差异可能与其适合度差异有关。     

烟碱对B型和Q型烟粉虱取食行为的影响——基于EPG和液体饲囊技术体系

【目的】明确烟碱对Ｂ型和Ｑ型烟粉虱取食行为的影响,并据此建立一套研究次生物质对烟粉虱取食行为影响的利用刺吸电位（electrical penetration graph,EPG）结合液体饲囊（liquid diet sac,LDS）（EPG+LDS）指标体系。【方法】利用EPG技术测定烟粉虱对不同成分LDS的取食行为,定量研究不同浓度烟碱对烟粉虱取食行为的影响。【结果】利用植物作对照,比较5%、10%和15%蔗糖溶液对烟粉虱取食波形的影响,结果表明10%蔗糖浓度下烟粉虱EPG波形的相对振幅、频率与其在植物上的行为最为相近。在10%蔗糖溶液中加入烟碱,随着烟碱浓度的升高,烟粉虱取食波形的持续时间呈现逐渐减少的趋势,且0.001%的烟碱浓度即可显著延长烟粉虱的刺探时间并显著抑制E1波和E2波的持续时间。高浓度烟碱条件下,E2波被完全抑制。虽然B型和Q型烟粉虱在多个刺探过程的EPG指标上差异不显著,但与吸食相关的几个指标差异显著,Q型烟粉虱E2波持续时间无论在无烟碱环境下还是较低烟碱环境下都显著长于B型烟粉虱。【结论】在EPG波形指标上,C波持续总时间、E1波持续总时间及E2波持续总时间等是EPG+LDS技术体系较为重要的行为指标;对于LDS指标,10%的蔗糖溶液更适合用于不同生物型烟粉虱取食行为的EPG研究;烟碱明显抑制烟粉虱2种生物型的取食行为,Q型烟粉虱对烟碱具有更强的适应能力。     

EPG Comparison of Sitobion avenae （Fab.） Feeding Behavior on Three Wheat Varieties

This article was to study the potential resistance mechanism of three different wheat varieties （Ww2730, Xiaoyan 22 and Batis） in the seedling stage to Sitobion avenae. The aphid feeding behavior was ascertained by stylet penetration activities monitoring using the electrical penetration graph （EPG） technique. When the aphids feed on Ww2730 seedlings, the time for the 1st duration probing was later than that on Xiaoyan 22 and Batis significantly, and the number of interrupted probing before the 1st duration probing was more than that on Xiaoyan 22 and Batis significantly, and the 1st duration probing was shorter than that on Xiaoyan 22 and Batis significantly. The durations of the stylet pierce from the extra- to the intra-cellular （pd Ⅱ-1） on Ww2730 and Xiaoyan 22 were longer than those on Batis significantly. The duration of the potential drop （pd） in C wave on Ww2730 was longer than that on Xiaoyan 22 and Batis significantly. The times and duration of the G wave （ingestion in xylem） on Ww2730 were more and longer than those on Xiaoyan 22 and Batis significantly. The times of spot G wave on Batis was more than that on Ww2730 significantly, but the duration of spot G was shorter than that on Xiaoyan 22 and Ww2730 significantly. The total time of E1 wave, the longest duration of E1 fractions, and the mean duration time of E1 fractions that followed E2 wave on Xiaoyan 22 and Batis were all significantly longer than those on Ww2730. There was no difference of the mean duration of the 1st E1 wave on the 3 varieties, but the mean durations of other E1 wave on Ww2730 and Xiaoyan 22 were shorter than those on Batis significantly. The other wave parameters, including times and durations of F and E2 were all not different on the 3 wheat varieties. It is suggested that the resistance mechanism of wheat variety Ww2730 to S. avenae is a restriction factor of feeding in epidermis, the thicker cell wall in mesophyll, and secondary metabolites or nutrition unbalance in phloem in the seedling phase. The re     

四种杀虫剂LC25对Q型烟粉虱成虫取食行为的影响

[目的]利用刺吸电位技术(electronic penetration graph,EPG)研究Q型烟粉虱(Bemisia tabaci)成虫对吡虫啉、吡蚜酮、螺虫乙酯和溴氰虫酰胺4种杀虫剂LC25处理24 h番茄苗的取食行为,探明内吸性杀虫剂亚致死剂量对烟粉虱成虫取食行为的影响.[方法]以无农药暴露史的Q型烟粉虱成虫...     

赣南柑橘产区衰退病毒外壳蛋白基因初步分析

[目的]对江西赣南柑橘果园感染衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)样品的外壳蛋白(CP)基因进行克隆及序列遗传信息分析,为利用弱毒株交叉保护法预防该地区CTV的蔓延奠定基础.[方法]运用RT-PCR扩增样品的CP基因并测序,应用软件检测CP序列基因重组,分析碱基含量,再将所测序列与10个外国CTV分离株计算核苷酸遗传距离,比对序列同源性及构建系统发育树.[结果]214份柑橘样品中有78份感染了CTV,发病率为36.4％.78个样品中仅有一个存在基因重组现象;78个CTV分离株CP基因全长序列均为672 bp,无碱基缺失、插入等现象,CP基因平均GC含量为52.8％,AT(U)为47.2％;所有样品核苷酸遗传距离在0～0.072,与10个已知CTV分离株CP基因核苷酸遗传距离在0～0.106.78个样品的CP基因核苷酸及其推导氨基酸序列同源性分别为89.1％～100.0％和92.3％～100.0％,与10株已知CTV分离株的同源性分别为76.5％～98.9％和73.6％～99.5％.系统进化分析结果表明,78个分离样品与10株已知CTV分离株可聚为四大类群,第Ⅰ类群包含49个分离样品和7个症状不同的已知CTV分离株(6个强毒型和1个弱毒型);第Ⅱ类群包含21个样品,国外强毒株系Qaha和引发茎陷点、速衰症状的Mexico-ctv株系聚于此类群;第Ⅲ类群仅由采自瑞金的CRJ14组成;第Ⅳ类群包括一个国外强毒株系HA16-5和采自江口、宁都的样品.[结论]赣南柑橘产区CTV分离株的CP基因保守性较高,序列存在一定程度的变异;各分离株间亲缘性较高但关系复杂,大部分样品与强毒型和茎陷点型分离株相关.     

Evaluation of the Resistance of Different Tea Cultivars to TeaAphids by EPG Technique

In order to investigate the resistance of tea plant to tea aphid, the feeding behavior of tea aphids on six different tea cultivars was monitored by (EPG) technique. The result showed that the duration of E1, E2 as well as (E1+E2) which was feeding waveforms of Toxoptera aurantii (Boyer) in tea phloem was significantly different by variance analysis (P<0.05) and so did the duration of the probing of T. aurantii in all the tea tissues. And the six tea cultivars were classified into three groups with cluster analysis, based on the six major parameters which were durations of np, C, E1, E2, F, and G waveforms, then the six major parameters of these three groups were detected by variance analysis, and the rank of six different tea cultivars’ resistance to T. aurantii from strong to weak was Zhongcha 108, Sucha 1, Anjibaicha, Longjing 43, Xicha 5, and Sucha 120. As this result was in accord with the investigation into the tea field, we concluded that EPG technique was one of the most important means to examine tea plant resistance to T. aurantii and the durations of waveform E1, E2 and (E1+E2) were important parameters for evaluating resistance of tea plants to tea aphids.