改良CTAB法和高盐低pH值法提取花生DNA的效果

采用改良CTAB法和高盐低pH法提取花生总DNA,结果表明,高盐低pH法提取的花生DNA分子量略小,DNA有一定程度的降解,但得率大大高于CTAB法,按我们稍有改动的实验方法,每克鲜重的叶片,可提取1000μg以上的DNA。两种方法提取的DNA均可酶切完全,RAPD-PCR扩增,结果相同。高盐低pH值法廉价、步骤少、易掌握,是提取花生DNA较好的方法。     

抗草甘膦转基因大豆利弊

自1996年抗农达转基因大豆正式上市以来,有关转基因大豆问题就展开了争论.13年的实践表明,抗农达大豆得到了迅速应用,产生了巨大的经济效益,对大豆产业的发展和农民增收起了积极作用.减少了除草剂使用量和二氧化碳排放,加速了免耕技术的推广,也产生了巨大的社会效益和生态效益.抗农达大豆也有负而影响,主要表现在单位面积产量可能降低,出现了13种抗农达杂草.已采取了一系列应对措施,开发出了新一代转基因产品,这项技术正在新的起点上不断改进和提高.     

抗草甘膦转基因大豆及加工品LAMP检测研究

将环介导的等温核酸扩增技术应用于转基因大豆及加工品检测.针对抗草甘膦Roundup Ready转基因大豆及加工品外源基因EPSPS设计2对特异性引物进行扩增,成功建立起定性检测转基因大豆及加工品的LAMP检测方法.优化LAMP反应条件,反应温度为65℃,反应时间为1h.结果表明:该体系能快速、灵敏、有效地检测转基因大豆及加工品中整合的EPSPS基因,检测限为0.01%,低于国际现行最低检测量0.5%的要求.检测EPSPS基因操作简单,成本低、特异性强、灵敏度高.LAMP检测结果可信,稳定性好,可对目前批准的抗草甘膦RoundupReady转基因大豆及加工品进行定性检测.     

试纸条法和PCR法检测抗草甘膦转基因大豆的外源基因

分别以转基因抗草甘膦大豆及其受体材料为阳性对照和阴性对照,对喷施除草剂草甘膦后部分存活的5个常规大豆材料后代进行试纸条检测和PCR检测.结果发现2种方法均在被检大豆材料中检测到抗草甘膦基因CP4 EPSPS,而且这2种方法的检测结果能相互验证;对这2种检测技术的应用前景进行了讨论.     

改良CTAB法提取柚总DNA及叶片保存方法的研究

采用改良的CTAB方法提取龙柚新鲜叶片的总DNA，在提取过程中，采用不同的处理液进行预处理，提得的DNA产量高，纯度好，降解少，可用于PCR扩增，能满足相关的分子生物学研究要求。同时，尝试用饱和NaCl-CTAB保存液来保存新鲜叶片，并对分别保存7天、14天、21天、28天的叶片进行总DNA提取，实验结果表明：保存7天的叶片总DNA提取效果最佳。     

改良CTAB法用于提取红麻成熟叶片高质量DNA的研究

红麻处于光合高峰期的成熟叶片中的次生物质含量很高,给DNA的提取造成很大的困难.CTAB法能有效去除多糖杂质,但普通CTAB法用于红麻的DNA提取效果很不理想,为使CTAB法能更好地用于红麻的DNA提取,我们对此方法进行了改进,通过前处理除去大部分的杂质,减小了后续操作的难度.为了验证前处理是否会损失DNA,研究了液氮研磨对材料细胞的破碎程度问题,还讨论了DNA提取中的其它一些相关问题.     

改良CTAB法用于提取红麻成熟叶片高质量DNA的研究

红麻处于光合高峰期的成熟叶片中的次生物质含量很高,给DNA的提取造成很大的困难。CTAB法能有效去除多糖杂质,但普通CTAB法用于红麻的DNA提取效果很不理想,为使CTAB法能更好地用于红麻的DNA提取,我们对此方法进行了改进,通过前处理除去大部分的杂质,减小了后续操作的难度。为了验证前处理是否会损失DNA,研究了液氮研磨对材料细胞的破碎程度问题,还讨论了DNA提取中的其它一些相关问题。     

改良CTAB法提取野牡丹科7种植物DNA

以野牡丹科植物幼叶为材料,对影响野牡丹科植物DNA提取质量的主要因子进行研究,以期建立适宜野牡丹科植物DNA提取的优化反应体系。结果表明,当提取液中CTAB浓度为4%,沉淀时加入0.6倍体积预冷异丙醇、1/2倍体积5 mol/L NaCl、2倍体积无水乙醇时,所提取的DNA纯度较高,电泳条带清晰。且在此条件下,能提出野牡丹科7种植物的DNA。     

PCR-ELISA法对大豆品种的转基因定性检测研究

以共价交联在PCR管壁上的寡核苷酸作为固相引物进行PCR扩增,对PCR扩增的固相和液相产物分别进行杂交和凝胶电泳检测的PCR-ELISA法,对黑龙江省常规选育品种合丰35和黑农37、外源DNA直接导入大豆的分子育种所获品种黑生101、及大连进口的美国2号等大豆,进行转基因定性检测.结果表明:该方法高效可靠,可作为一种快速定性检测转基因产品的方法;检测结果:美国2号为转基因大豆,黑生101、合丰35和黑农37为非转基因大豆.上述结果对分子育种、生态保护、安全监测及对建立黑龙江省非转基因大豆生产保护区等具有重要意义.     

利用种子萌发法快速检测抗草铵膦转基因大豆

转基因后代植株遗传存在不稳定性,能够快速有效地筛选后代阳性植株成为转基因研究工作的重点。通过在培养基中添加不同浓度的草铵膦进行种子萌发试验,结果普通受体大豆品种东农50在大于5.0 mg.L-1草铵膦筛选压力下,种子萌发率显著降低,植株根系生长受到抑制,基本不能完成正常的生活史;携带bar基因的Southern拷贝T2代转基因大豆种子在添加5.0 mg.L-1草铵膦的MS培养基中34.7%能正常萌发生长,利用CaMV35S和bar 2对引物对5.0 mg.L-1草铵膦筛选得到的转基因植株进行检测,能扩增出正确的条带,结果均为阳性。研究表明应用种子萌发法能够快速检测草铵膦转基因大豆。     

广州市农贸市场中转基因大豆的检测

对广州市农贸市场中销售的大豆进行转基因大豆的初步筛查,以检测在广州市场是否有转基因大豆流通和销售,为相关标识和监管提供实验依据。根据转基因大豆内参凝集素Lectin基因及外源基因CaMV35S、NOS及EPSPS基因序列设计4对引物,对收集的大豆样品提取其基因组DNA后进行PCR检测。结果在所收集的14份大豆样品中检测出1份转基因大豆,表明在广州农贸市场中存在转基因大豆,并在市场流通,提醒相关部门需根据国家规定需要加强监管力度。     

应用MPCR-DHPLC技术检测转基因大豆及其食品

利用多重PCR结合DHPLC技术,建立了高通量快速筛选检测转基因大豆及其食品的方法,确立了转基因大豆品系鉴定方法.该筛选方法的检测灵敏度为0.078 ng· μL-1,质粒检测灵敏度为1 × 103拷贝·μL-1.利用该方法对转基因大豆GT-40-3-2、Mon89788、A5704-12和大豆食品曲奇饼干、含大豆的调味粉、干豆腐及非转基因黑大豆进行验证,效果良好.所建立的PCR-DHPLC检测方法能同时快速准确的检测大豆及加工食品中转基因成分.     

种子DNA快速提取法在玉米转基因检测中的应用

利用一种快速玉米基因组DNA提取方法,分别对Bt11、MON810、NK603、MIR604和TC1507这5种转基因玉米种子的胚和胚乳进行DNA提取。根据不同转基因玉米重组结构点,分别设计特异性引物,参考农业部转基因检测标准,通过对PCR体系的优化整合后发现,该玉米DNA快速提起法获得的PCR检测结果准确、可靠,在此基础之上建立一套多重PCR,使转基因检测的效率得到很大提高。     

大豆再生植株抗草铵膦的筛选方法研究

为解决农杆菌介导的大豆子叶节转化试验中草铵膦筛选所得转基因后代假阳性高的问题,采用浸种法、根吸法、叶片涂抹法、叶片喷洒法4种筛选方法和多种筛选浓度对大豆再生植株及其后代抗性进行筛选.结果采用1∶ 200 草铵膦浓度的叶片喷洒法效果最佳.叶片喷洒法筛选6802株转化植株,获得了9株抗性植株,其后代的分子检测表明均为阳性植株.因此,采用叶片喷洒法对大豆抗草铵膦植株进行筛选的方法简便可行.     

转基因大豆插入位点分析及特异性PCR检测方法的建立

采用TAIL-PCR方法研究转基因大豆外源基因LEC1插入位点序列特征,并根据此特征建立了LEC1转化事件特异性检测方法。依据正义表达载体上T-DNA区段侧翼序列设计特异性引物和简并引物,获得4个同源序列。对获得的序列进行Blastn分析发现,p69、p148、p225均为载体T-DNA区段一部分,未见大豆基因组序列;P217插入片段的序列分析表明,该序列长863 bp,其中T-DNA左边界序列长143 bp,720 bp为大豆基因组片段,与大豆光系统II类囊体膜蛋白(Thylakoid membrane proteins)的206-926区段同源性为99%,这表明,外源DNA插入了大豆基因组中类囊体膜蛋白编码区的206位。根据分离的序列建立事件特异性定性检测方法,扩增片段大小为277 bp。该事件特异性检测方法具有高度的特异性和良好的灵敏性,为转基因大豆品种LEC1的身份识别提供了有效的方法。     

CTAB法提取红麻总DNA技术优化与ISSR和SRAP扩增效果

红麻基因组总DNA的提取纯度,关系到新型分子标记ISSR、SRAP的PCR扩增效果。经反复实验,对CTAB法提取红麻总DNA技术进行了改进,即采集足量的红麻嫩叶、提取时加入β-巯基乙醇、提取过程中使用2.5%CTAB、最后用预冷的无水乙醇沉淀DNA。OD260/OD280比值检测结果为平均1.824,而且DNA得率也较高,证明用此法提取的DNA能完全满足ISSR和SRAP分析的要求和获得较理想的效果,本文还讨论了高质量DNA提取应注意的有关技术环节。     

转HAL1基因大豆侧翼序列分析及特异性检测方法研究

为方便HAL1转基因大豆的研究和检测,以转HAL1基因大豆T3代基因组DNA为模板,使用热不对称交错PCR(TAIL-PCR)方法分离其外源基因插入位点的侧翼序列,获得了插入片段DNA序列(T-DNA)的左翼序列和右翼序列。通过比对大豆基因组序列确定其整合位点,确定了HAL1基因的T-DNA在大豆基因组1号染色体非编码区49468395位点以单拷贝插入,转基因事件不影响大豆基因组功能基因的正常表达,而且在200 mmol·L~(-1)NaCl盐胁迫下转基因植株生长力明显强于对照材料。蛋白定量检测结果表明,在叶片中蛋白含量最高可达0.03 mg·g~(-1),在根茎花中也有表达,但是含量较低。根据整合位点处的左右侧翼序列设计两对特异性PCR检测引物,PCR检测结果显示只有转HAL1基因大豆阳性材料才能扩增出926和816 bp DNA片段。本研究建立的转HAL1基因大豆特异性定性检测方法,对转基因大豆的研究具有重要的意义,也为大豆转基因受体材料的管理与检测提供参考。     

CTAB法提取红麻总DNA技术优化与ISSR和SRAP扩增效果

红麻基因组总DNA的提取纯度，关系到新型分子标记ISSR、SRAP的PCR扩增效果。经反复实验，对CTAB法提取红麻总DNA技术进行了改进，即采集足量的红麻嫩叶、提取时加入β-巯基乙醇、提取过程中使用2．5％CTAB、最后用预冷的无水乙醇沉淀DNA。OD260，OD2踯比值检测结果为平均1．824，而且DNA得率也较高，证明用此法提取的DNA能完全满足ISSR和SRAP分析的要求和获得较理想的效果．本文还讨论了高庸量DNA提取应注意的有关技术环节．     

改良环介导等温扩增技术快速检测转基因大豆

采用改良环介导等温扩增(LAMP)技术,建立一套准确、快速、可靠的用于转基因大豆检测及DNA提取的方法.以CP4-EPSPS外源基因为检测的目的片段,设计内、外引物和环引物,并采用改进的方法提取DNA,进行LAMP扩增,实际检测已知转基因大豆和市售大豆,通过肉眼观察白色沉淀,判断检测结果.改进的DNA提取方法与经典的CTAB方法相比,提取时间至少缩短了1 h,降低了提取成本.环介导等温扩增(LAMP)技术对转基因大豆的检出限为0.01%,是普通PCR方法的20倍.因此,改良的LAMP检测转基因大豆方法灵敏度高,耗时短,方法简便.     

不同加工工艺对大豆转基因成分及调控元件的影响

以转基因大豆为试验材料,运用定性PCR的方法研究了粉碎、湿热和膨化3种加工工艺对转基因大豆内源基因Lectin、外源基因Cp4 epsps以及启动子和终止子的影响.结果表明:大豆经过100℃湿热处理15 min后,内源基因降解到407 bp以下;经过100℃湿热处理15 min后,外源基因降解到408 bp以下;在10...