马铃薯纺锤块茎类病毒(PSTVd)的检测与防治研究进展

详细阐述了马铃薯类病毒(PSTVd)鉴定技术的研究进展,比较了几种鉴定技术(指示植物、往返电泳、核酸斑点杂交及RT-PCR)的优缺点,并对类病毒的防治措施进行了论述。     

用NASH方法检测马铃薯纺锤块茎类病毒

利用荧光素标记制备马铃薯纺缍块茎类病毒（PSTVd)特异性探针，采用核酸斑点杂交（NASH）技术对大田马铃薯和马铃薯试管苗进行检测，经放射自显影表达检测结果，结果清晰，重复性好，该方法可检测类病毒最低为0．33pg，灵敏性很高。     

聚丙烯酰胺凝胶电泳方法检测马铃薯类病毒技术的改进

利用往复聚丙烯胺凝胶电泳方法进行类病毒的检测 ,通过对电泳技术的改进和使用液氮研磨、加入皂土等方法改变核酸的提取 ,使该方法在检测灵敏性、准确性、操作性和可行性上都得到了提高 ,更有益于该技术的普及     

马铃薯病毒和类病毒检测技术

马铃薯病毒和类病毒严重影响马铃薯的产量和质量,防治的主要措施是应用无病毒种薯。确认种薯是否带毒,世界和国内主要采用ＥＬＩＳＡ法和双向往复聚丙烯酰胺凝胶电泳法进行检测。为提高检测速度和准确性,我们在加拿大传统的检测技术基础上进行改进,建立了快速、灵敏、高特异性的检测方法。     

马铃薯纺锤块茎类病毒对马铃薯育种工作的影响

简要介绍了马铃薯纺锤块茎类病毒(Potato spindle tuber viroid,PSTVd)的危害和发生情况,重点阐述了PSTVd对马铃薯育种工作的影响,并针对该问题进行了分析,最后提出了一些建议,如做好隔离防护,彻底进行PSTVd检验,对环境及器具进行消毒处理以及实生种子经贮藏3~5年后再播种。     

马铃薯纺锤块茎类病毒检测技术比较与选择

马铃薯纺锤块茎类病毒(PSTVd)是威胁我国马铃薯生产的重要病害之一,目前有多种技术可应用于PSTVd的检测,如生物学方法、电子显微镜技术、往返聚丙烯酰胺凝胶电泳(R-PAGE)、核酸斑点杂交(NASH)、RT-PCR和FQ RT-PCR。这些方法各有利弊,互相补充,构成了PSTVd的检测技术体系。日常工作中,应根据自身条件及目的等科学地选择适宜的检测技术,确保脱毒种薯/种苗的质量。     

马铃薯纺锤块茎类病毒(PSTV)检测方法的研究进展

<正> 马铃薯纺锤块茎病于1922年已被发现,但其病原鉴定的研究进展十分缓慢,直到1967年 Diener 等首次发现该病由是马铃薯纺锤块茎类病毒(Potato Spindle Tuber Viroid简称 PSTV)所致。PSTV 的寄主范围很广,但绝大多数属于无症侵染。早期 PSTV 的诊断主要靠生物鉴定的方法进行,后来很多学者试图利用血清学方法进行检测,但由于 PSTV是1个没有蛋白质衣壳的小分子量核酸,不具抗原性,故不能制备其抗血清。Morris 等1975年首次报道了用单向聚丙烯酰胺凝胶电泳(Polyacrylamide Gel Electrophoresis 简称PAGE)法检测 PSTV;Owens 等1981年报道     

利用单个叶圆片检测马铃薯组培植株中的病毒和类病毒

用茎尖和顶端分生组织进行组织培养是加拿大和其它国家繁殖马铃薯品种或无性系采用的主要方法。组织培养程序包括试材的病原物检测及幼苗繁殖期间或繁殖后的无毒检测。多数实验室检测病毒和类病毒，所用的叶组织采自温室或大田生长的植株，少数机构使用离体培养的样品。目...     

Detection of strains of potato virus S by nucleic acid spot hybridization (NASH)

Summary Two complementary DNA (cDNA) clones (0.9 kb and 1.6 kb) reacting to the ordinary strain of potato virus S (PVS) were compared with single-stranded randomly primed cDNA (prepared to total genomic RNA) as probes for various strains of PVS, using the technique of nucleic acid spot hybridization (NASH). The cDNA clones detected 11 PVS isolates well, including both Andean and ordinary strains, while one of each strain was detected weakly. As little as 5 femtograms of PVS RNA could be detected. A low cross hybridization was observed with cDNA probes to PVS with potato virus M and carnation latent virus both members of the carlavirus group. No cross homology was detected with seven other potato viruses. NASH was as sensitive and specific as enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), with no pretreatments of crude sap being required before spotting on nitrocellulose filters. Cloned cDNA probes would be suitable for mass screening of PVS.     

柑桔黄龙病环介导等温扩增检测方法建立及应用

以柑桔黄龙病（Citrus Huanglongbing,HLB）病原菌16s rDNA保守区域为靶标设计LAMP引物,建立柑桔黄龙病的环介导等温核酸扩增（loop-mediated isothermal amplification assay,LAMP）检测技术。LAMP检测方法具有极高的检测特异性和灵敏性,其检测下限约为1 pg/μL质粒DNA,是PCR检测灵敏度的100倍,能快速、准确地对田间疑似样品进行检测。建立的柑桔黄龙病LAMP检测方法是对黄龙病检测方法的拓展和延伸,可以很好地应用于田间检测,可满足基层以及科研单位对该病害检测的需要。     

农药残留快检仪可检蔬菜种类的研究

采用LZDN-16T蔬菜农残快检仪,对海南省常食用的10种类别,57个蔬菜品种进行快速检测。检测显示,可直接进行检测的蔬菜品种52个,经特殊处理后可检测的蔬菜品种4个、不可检测的蔬菜品种1个。     

分子生物学技术在马铃薯病毒检测中的应用

直接应用于马铃薯病毒检测的分子生物学技术主要有 :RT PCR检测技术、指示分子 NASBA检测技术、核酸杂交检测技术三大类 ,以RT PCR技术应用最为广泛。另外病毒外壳蛋白基因的克隆与表达、DNA介导的抗体制备及病毒单链抗体片段筛选等技术在马铃薯病毒免疫学检测技术中也有成功的应用 ,并解决了传统免疫学方法难以解决的抗原制备问题 ,使后者更具应用前景。     

利用往返电泳法(R-PAGE)检测马铃薯纺锤块茎类病毒技术要点

目前国内普遍采用的往返电泳法是检测马铃薯类病毒的主要方法之一,但该方法存在灵敏度低,重复性差等问题。因此,针对上述问题总结出一些技术要点:(1)保证植物生长环境及正确取样;(2)提高凝胶中RNA的浓度和质量;(3)控制好反向电泳的温度和时间;(4)及时更换染色液。     

定性PCR方法检测转基因玉米MON810转化事件的研究

转基因玉米MON810(Yield Gard R)是孟山都公司通过DNA重组技术和微注射轰击研发的一种具有对欧洲玉米螟(ECB;Ostrinia nublialis)有特殊抗性的转基因玉米品系,目前在世界各地已经得到广泛种植,为加强对该品系玉米的安全管理,本研究旨在建立MON810品系玉米的转化事件特异性定性PCR检测方法。根据MON810的插入序列信息,在3′端的侧翼序列处设计定性PCR检测的引物,检测MON810在其他几种常见转基因作物混合样品的特异性。结果表明,该方法具有很好的特异性。同时检测该引物系统的扩增灵敏度,结果表明,检测引物的灵敏度可达0.1%。建立的MON810特异定性PCR检测方法经全国7家实验室的验证,进一步证实该方法能够特异地检测出样品中的MON810转化事件,检测方法的灵敏度可达0.1%,且检测结果具有良好的可重复性和可重现性。MON810转化事件定性PCR检测方法的建立可满足于抗虫转基因玉米MON810及其衍生品种生物安全管理的需要。     

NCM-ELISA检测马铃薯Y病毒(PVY)技术的研究及应用

血清学方法是病毒检测的主要手段。本试验通过对马铃薯Y病毒(PVY)的提纯,免疫家兔制备PVY抗血清,并提取PYV免疫球蛋白IgG作为NCM-ELISA反应为一抗,以市售羊抗兔抗血清为二抗,在硝酸纤维素膜(NCM)上进行NCM-ELISA反应检测PVY,建立PVY NCM-ELISA检测反应体系。试验结果显示,NCM-ELISA具有反应特异性强,灵敏度高的优点,检测植物叶片样品的最高稀释度可达到1:250。通过对田间40份样品的NCM-ELISA和DAS-ELISA检测比较,其检测结果吻合率达到100%。由于NCM-ELISA方法可以将样品点在硝酸纤维素膜上,并且可贮存几个星期或将膜送到其他实验室进行检测,因此具有操作简单,使用方便,检测成本低等优点。     

A simple and rapid method for the detection of potato spindle tuber viroid (PSTVd) by RT-PCR

Summary A test procedure for PSTVd is described based on immobilisation of plant sap on filter paper, by dotting or tissue printing followed by RT-PCR. Tests were carried out using primarily and secondarily infected potato plants, primarily infected in vitro plants, and potato tubers. Print PCR was shown to be suitable for testing large samples of potato plants whereas dot PCR is recommended for in vitro plantlets and tuber tissue. Bulking one infected plant to 4 or 9 healthy plants gave reliable results with secondarily infected potato plants, but sometimes the test failed to detect PSTVd in primarily infected in vitro plants. Dotted and printed paper squares could be stored at 4°C for at least 2 weeks in Triton X-100 solution or under dry conditions. Storing at room temperature can lead to unreliable results.     

X射线图像技术对红毛丹内部品质的检测

研究了利用X射线图像处理及模式识别方法检测红毛丹内部品质——可食率、可溶性固形物含量。首先用阈值分割法去除红毛丹背景,然后用模糊C均值聚类方法来分割果肉区域。红毛丹可食率以分割出的果肉区域像素个数与整个果实区域像素个数之比来表征,实验结果表明,误判率小于10％。红毛丹可溶性固形物含量的X射线图像检测采用纹理特征描述的方法,利用直方图矩特征和支持向量机回归方法预测红毛丹可溶性固形物含量的相关系数最高可达87．2％。