不同培养条件对瞿麦诱导愈伤组织的影响

试验以瞿麦叶片为材料,通过对其进行不同消毒时间,不同激素配比浓度和不同光照条件处理,探究瞿麦组织培养的最佳培养条件。试验结果表明:酒精浸泡30s、Na Cl O浸泡15min的处理可以极大降低外植体的污染率和褐化率;MS+1.0mg/L6·BA+0.4 mg/L NAA的培养基愈伤组织诱导率最高,为90%;接种后先暗培养25d,然后在光照下进行培养的外植体,其愈伤组织比接种后直接在光照条件下培养的外植体要出现的快且生长状况较好。     

不同磁场环境和培养基对拟南芥种子诱导愈伤组织的影响

为探明磁场强度和培养基成份在拟南芥愈伤组织诱导中的作用,以野生型拟南芥(Columbia型)种子为材料,研究3种磁场环境(亚磁场、地磁场和中强磁场)、4种诱导培养基(NB1、NB2、MS1、MS2)条件下愈伤组织的诱导情况。结果显示,与地磁场相比,亚磁场对接种后第3～6天愈伤组织的发生有明显的抑制作用,中强磁场有明显的促进作用;在接种后第3～7天,NB2、MS2比NB1、MS1培养基促进了愈伤组织形成,且差异显著。愈伤组织净重反映了细胞增殖的状态,统计结果显示,与地磁场相比,亚磁场对细胞增殖没有明显影响,而中强磁场有显著的抑制作用;NB2、MS2比NB1、MS1培养基促进了细胞增殖,且差异显著。以上试验结果说明,磁场强度和培养基成份的变化对拟南芥种子诱导愈伤组织过程中第3～7天的愈伤组织形成和细胞增殖有不同程度影响,但2因素不存在交互作用,且2种因素对15d后的愈伤组织总出愈率无显著影响。6-BA对早期的愈伤组织诱导和细胞增殖均有促进作用,而且在地磁和亚磁场中,添加有6-BA的NB2和MS2培养基所诱导的愈伤组织色泽鲜亮,致密度适中,利于后续继代培养。     

小桐子愈伤组织的诱导

本文以小桐子的叶片、叶柄、茎段及下胚轴和子叶作为外植体,研究不同外植体类型对愈伤组织诱导的影响,结果表明叶柄的诱导率最高,其次为茎段的诱导率。同时以小桐子的下胚轴作为外植体,研究植物生长调节剂种类及浓度配比对愈伤组织诱导的影响,结果显示6-BA与2,4-D的组合更适宜小桐子愈伤组织的诱导,MS＋6-BA0.5mg/L＋2,4-D0.1mg/L为小桐子愈伤组织诱导的最佳培养基,其愈伤组织诱导率高达96.7%。本研究为小桐子愈伤组织的分化、植株再生及相关的遗传转化研究提供了参考。     

低温对诱导小麦未成熟胚愈伤组织出愈率的影响研究

试验研究低温处理对诱导小麦未成熟胚愈伤组织出愈率结果表明 ,6h短时间低温处理可显著提高其出愈率 ,比对照增加 1 4 3倍。随处理时间的延长其出愈率逐渐降低 ,18h后其出愈率又渐增 ,低温处理 30h时其出愈率显著高于对照 ,为对照的 1 4 1倍。     

遗传霉素对矮牵牛叶片愈伤组织诱导及生根的影响

为探究遗传霉素对矮牵牛叶片愈伤组织的诱导及生根的影响,以矮牵牛W115叶片为外植体,研究不同浓度的遗传霉素对叶片愈伤组织、不定芽以及生根诱导的影响。结果表明,随着浓度的增加,遗传霉素对愈伤组织,不定芽以及生根诱导的抑制作用增强。其中,诱导不定芽的遗传霉素临界浓度为4mg·L-1,该浓度下,矮牵牛叶片愈伤组织分化出不定芽的分化率为0;诱导生根的临界浓度为5mg·L-1,当遗传霉素浓度≥5 mg·L-1时,植株不能正常生根。研究结果为遗传霉素在矮牵牛遗传转化中的应用提供了参考。     

真菌诱导子对虎杖愈伤组织中白藜芦醇合成的影响

用源于黑曲霉(Aspergillum niger)、啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、青霉(Penicillium sp.)及灰色葡萄孢(Botrytis cinerea)的真菌诱导子对虎杖愈伤组织进行诱导处理,研究其对愈伤组织中白藜芦醇合成的影响,采用HPLC测定白藜芦醇含量。结果表明,4种真菌诱导子中,以黑曲霉诱导子的诱导效果最好,在愈伤组织继代培养后第14天加入100mg/L的黑曲霉诱导子,引入后第6天愈伤组织中白藜芦醇含量比对照高2.25倍。黑曲霉诱导子对虎杖愈伤组织中白藜芦醇的积累有很好的促进作用。     

玉米不同部位愈伤组织诱导及植株再生的比较研究

为建立稳定高效的玉米再生体系,选用6个玉米常用自交系的成熟胚、幼胚、茎尖和幼嫩叶段作为外植体,在含有不同外源激素的培养基中诱导愈伤组织及植株再生,比较研究这6个玉米自交系的诱愈率和分化率,并观察愈伤的形态。结果表明,在适宜的培养条件下,不同基因型、不同外植体均能分化出苗,但其再生率差别较大,其中玉米幼胚的诱愈率和分化率最高,其次为茎尖、成熟胚,幼嫩叶段相对较低。不同外植体的培养基类型和外源激素的浓度配比有着很大的不同,且不同基因型的愈伤差异也较大。本研究筛选出了3个愈伤胚性良好、分化率较高的玉米基因型辐80、综31和Mo17。玉米茎尖、成熟胚和幼嫩叶段的再生均找到了适宜的培养条件,完全能够代替幼胚作为愈伤组织诱导的初始材料,该结果为建立一套高效稳定的玉米再生体系提供了理论依据和技术参考。     

不同植物激素对冬凌草愈伤组织增殖及褐化的影响

研究了不同种类的植物激素对冬凌草叶片诱导愈伤组织及褐化的影响,结果表明:培养基中植物激素的种类、浓度及其组合对愈伤组织增殖及褐变影响较大。适宜浓度的2,4-D、IAA和NAA生长素、KT和6-BA细胞分裂素及GA3,能不同程度地减轻或抑制褐化,促进愈伤组织的生长,其中以2,4-D(2.5) KT(0.2) GA3(0.2)效果最好。     

香蕉花蕾诱导愈伤组织再生体系优化

研究诱导香蕉花蕾愈伤组织再生的最佳外植体部位、TDZ(噻苯隆)浓度和光照条件等因素。以2个不同品种的香蕉(桂蕉六号和矮蕉)花蕾的不同部位作为外植体,通过诱导花蕾形成愈伤组织等过程进行研究。试验获得了较高的愈伤组织诱导率,试验中TDZ对花蕾愈伤组织的诱导效果表现出较大差异,桂蕉六号花蕾的顶端和矮蕉花蕾的中部最容易诱导产生愈伤组织,不同外植体对TDZ和光照的敏感程度不同。     

玉米未成熟胚胚性愈伤组织诱导率与内源激素含量的关系

以胚性愈伤组织诱导率高低不同的9个玉米自交系未成熟胚为外植体,用改良N6培养基诱导培养愈伤组织。酶联免疫法测定不同培养时间后未成熟胚,以及由此诱导的胚性和非胚性愈伤组织,内源脱落酸(ABA)、吲哚乙酸(IAA)、赤霉素(GA3、GA4)和细胞分裂素(DHZRI、PA、ZR)含量。结果发现,胚性愈伤组织诱导率与未成熟胚ABA和IAA含量正相关,与胚性和非胚性愈伤组织ABA含量正相关,与胚性愈伤组织GA3含量负相关。在胚性愈伤组织开始发生之际,外植体的ABA和IAA含量出现峰值,GA3含量出现低谷。因此认为,未成熟胚高水平的ABAI、AA含量和低水平的GA3含量,有利于胚性愈伤组织的诱导。但是胚性愈伤组织的ABA含量却低于非胚性愈伤组织,且胚性愈伤组织诱导率与胚性愈伤组织IAA含量负相关。由此看来,胚性愈伤组织的诱导和保持,可能还与各种激素的协同作用有关。     

玉米幼胚和成熟胚愈伤组织诱导过程中内源激素的比较

以玉米自交系87-1的幼胚和成熟胚为材料,采用酶联免疫法测定了不同培养时间诱导的幼胚及成熟胚愈伤组织内源脱落酸(ABA)、吲哚乙酸(IAA)、赤霉素(GA3)和细胞分裂素(ZR)含量的动态变化。测定结果表明,在0～7d时,幼胚及成熟胚的IAA和GA3含量均急剧下降, 说明在胚萌发阶段IAA和GA3需求量较大。在幼胚胚性愈伤组织发生初期（14 d左右）,两种激素含量出现峰值,反映出幼胚较高水平的IAA和GA3含量,有利于胚性愈伤组织的诱导。在胚萌发后的愈伤诱导阶段,成熟胚愈伤中IAA、GA3和ABA含量以及IAA/ABA和GA3/ABA比值明显高于幼胚愈伤,且IAA/ABA和GA3/ABA比值均大幅度上升; 而幼胚愈伤组织中IAA/ABA和GA3/ABA比值则稳定地维持在较低的水平上。可以认为, 成熟胚愈伤组织中过高水平的IAA、GA3和ABA含量及IAA/ABA和GA3/ABA比值大幅度的上升可能是导致其难以形成胚性愈伤组织的主要生理原因之一。     

提高籼稻花药培养愈伤组织诱导频率的研究

在籼稻花药培养中,我们对影响花粉形成愈伤组织的慕些因素,进行反复试验得到如下结果。1.调整氨基酸的种类和含量,增加培养基的氮源,对提高籼稻花粉愈伤组织形成的数量和质量有良好效果,诱导频率达7.23%,比对照提高了3.78倍。2.稻穗在接种前或接种后经过8～10℃的低温处理,对提高愈伤组织的诱导频率都有明显的作用。3.不同遗传差异的材料,是影响愈伤组织诱导频率的重要内因,不同的籼稻组合(品种)材料,其诱导频率有明显差异。而这种差异是否由于各种材料本身氨基酸含量不同所引起,有待进一步研究。4.培养基中附加6—苄氨基嘌呤2毫克/升,对诱导籼稻愈伤组织形成有良好效果,其诱导频率能稳定在较高的水平上。     

匍匐翦股颖匍匐茎愈伤组织的诱导

离体再生体系的建立是植物基因工程的重要前提。以匍匐翦股颖（Agrostis palustris Huds）栽培品种L-93细叶突变体的匍匐茎为外植体,比较了不同消毒方法对外植体进行消毒的效果,以及生长调节剂配比、蔗糖浓度、固化物种类等因子对愈伤组织诱导的影响。结果表明：外植体适宜的消毒方法为75%乙醇处理60s后,再用0.1% HgCl2处理6min;与细胞分裂素配合使用时,2,4-D对愈伤组织诱导的效果好于NAA和IBA;2 mg/L 2,4-D和0.1 mg/L 6-BA的组合最利于愈伤组织的诱导,诱导率为74.0%;蔗糖浓度为40g/L时愈伤组织诱导率最高,为62.5%;与Agar A、Agar B和Canageenen相比, Phytagel作为固化物时,愈伤组织诱导率最高,可达67.9%。     

海蓬子愈伤组织的诱导及植株再生

本试验研究了培养基成分对海蓬子愈伤组织诱导、继代培养、植株分化和生根的影响。结果表明:愈伤组织诱导的最适培养基是MS+Thidiazuron(TDZ)1.0mg/L+NAA1.0mg/L+蔗糖30.0g/L+琼脂7.0g/L;继代培养的最适培养基为MS+NAA1.0mg/L+TDZ0.1mg/L+蔗糖30.0g/L+Gelrite3.0g/L,愈伤组织快速生长;愈伤组织分化的培养基为MS+NAA1.0mg/L+TDZ0.1mg/L+BA2.0mg/L+蔗糖30.0g/L+琼脂7.0g/L+NaCl8g/L,愈伤组织分化频率可达62.2%。生根培养基中添加0.5mg/L的麦芽提取物(maltextract,ME)可显著增加每株的平均根数。NaCl促进海蓬子愈伤组织的分化,麦芽提取物可促进幼苗侧根的发生,但NaCl和麦芽提取物均不利于愈伤组织的诱导。本试验建立了较高频率的海蓬子愈伤组织诱导及植株再生体系。     

电晕电场对细枝岩黄芪种子愈伤组织诱导与分化的影响

研究了不同电场剂量处理细枝岩黄芪种子对其愈伤组织诱导率和分化率的影响。结果表明,电场处理可以明显提高愈伤组织诱导率和分化率。电场强度为7kV/m,处理时间为100min,诱导培养基为MS+2,4-D 2.0mg/L+6-BA 1.0mg/L时出愈率可达91.0%,且生长情况较好,褐变程度轻。在MS+2,4-D 2.0mg/L+6-BA1.0mg/L诱导培养基上继代培养后的各愈伤组织分别转移到分化培养基上进行分化培养,当电场强度为7kV/m,时间为100min时分化率最高,达到78.3%。     

鸡屎藤愈伤组织诱导及细胞悬浮培养研究

建立鸡屎藤愈伤组织的诱导、增殖继代培养及其细胞悬浮培养的技术体系。研究不同植物激素组合对叶片、茎段和带腋芽茎段愈伤组织诱导的影响;采用正交试验研究不同处理对叶片愈伤组织增殖的影响;采用液体振荡培养法测定叶片愈伤组织细胞悬浮生长曲线。结果表明：叶片最易诱导产生愈伤组织,最佳激素配比为MS＋6-BA1.0mg/L＋NAA0.5mg/L,诱导率可达100%。叶片愈伤组织最佳增殖培养基为MS＋2,4-D0.5mg/L＋NAA0.3mg/L＋6-BA0.5mg/L,pH5.8。由叶片愈伤组织建立的细胞系生长呈＂S＂型曲线,培养24d达到最大生长量,最适继代周期为18～20d。以叶片为外植体经愈伤诱导、增殖培养可建立良好的细胞悬浮系。     

景天科多肉植物愈伤组织诱导体系的建立

[目的]以景天科多肉植物为外植体,探索其植物组织培养快速繁殖技术体系,筛选诱导愈伤组织的最佳培养基配方。[方法]首先采用Plackett-Burman(PB)设计找出对多肉植物愈伤组织诱导影响显著的因子;然后通过Box-Behnken(BB)实验摸索出显著影响因子的最优浓度,确定诱导愈伤组织最优的培养基配方。[结果]实验结果表明,NAA、6-BA、AC浓度对愈伤组织诱导影响极为显著;在最优条件下,即诱导阶段的最佳培养基配方为MS+2.40 mg/L 6-BA+0.70 mg/L NAA+2.00 g/L AC时,BB实验确定最大诱导率的理论值为94.7%;回归模型验证实验表明,最优条件下,‘虹之玉’‘姬胧月’‘新玉缀’诱导率分别为83.3%、100%、91.7%,实验结果与理论值接近,证明了该培养基配方用于景天科多肉植物愈伤组织诱导具有可行性。[结论]利用Design-Expert.8.0.6软件筛选植物组织培养中的积极影响因子,有效避免了在后期的优化实验中由于因子数太多或部分因子不显著而浪费实验资源。     

粳稻愈伤组织生理结构与诱导特性的研究

为揭示不同粳稻品种成熟胚的愈伤诱导特性,以17个优质高产水稻成熟胚为外植体,比较其愈伤组织在不同培养基中的出愈率,并对出愈率较高(宁9213)和较低(南粳41)的品种在不同培养基中的出愈率、愈伤组织状态、细胞的结构及其蛋白组分差异进行分析。结果表明,供试品种在不同激素组合中愈伤诱导率高低顺序为:2,4-D+KT2,4-D+6-BA2,4-D+KT+6-BA。宁9213在2种培养基(2 mg·L-12,4-D+0.3 mg·L-16-BA和2 mg·L-12,4-D+0.3 mg·L-1KT)中愈伤的诱导率均显著高于南粳41,二者在添加KT的培养基中的诱导率高于添加6-BA的诱导率。仅添加了KT和6-BA 2种激素的培养基中愈伤组织超微结构差异不大,均表现为细胞间排列较紧凑,细胞质浓厚,具有大的细胞核和核仁,核膜完整,具有较多的线粒体和较少的质体。南粳41在添加了KT的培养基中愈伤细胞处于活跃状态,在添加了6-BA的培养基中细胞处于衰老状态。蛋白质组分分析显示,宁9213缺失了59 k D蛋白,而南粳41缺失了70 k D蛋白,但不同培养基诱导对两者愈伤组织的蛋白组分影响不大。因此,品种间成熟胚出愈率不同主要是由于不同基因型品种成熟胚对外源激素敏感程度存在差异,从而引起其愈伤组织细胞生理功能、衰老速度以及特异蛋白表达的差异。本研究结果将有助于揭示水稻成熟胚愈伤诱导的规律,并利于加快水稻基因改良的进程。     

安祖花愈伤组织诱导及其分化的正交试验设计

用正交设计法研究了不同激素处理及不同外植体对安祖花愈伤组织诱导及分化的影响。结果表明,在本试验设计中,外植体是诱导安祖花愈伤组织的主要因素;以茎段为外植体诱导愈伤组织的最佳培养基为MS+1.0mg/L NAA+2.0mg/L 6-BA;愈伤组织不定芽诱导的主要因素是6-BA;不定芽诱导分化的最佳培养基为1/2MS+0.5mg/L 2,4-D+1.0mg/L 6-BA。