鸭血清IgG的提纯方法比较

本文对鸭血清分别采用了硫酸钠法、辛酸-硫酸铵法、硫酸铵法进行了鸭IgG的提取。提取后的鸭IgG样品用纯度和蛋白含量两个指标来衡量。用辛酸-硫酸铵法提取的鸭IgG样品蛋白含量为9.45mg/ml,纯度能达到用于免疫标记技术的要求,而且操作简单、价格低廉,适于从大批量样品中提纯鸭IgG;用硫酸钠法提取的鸭IgG样品蛋白含量为9.14mg/ml,相对较高,但纯度较低;用硫酸铵法提取的鸭IgG样品蛋白含量、浓度都较低。     

两种纯化兔抗酸性红73免疫球蛋白G方法的比较研究

分别采用饱和硫酸铵法和辛酸—硫酸铵法纯化兔抗酸性红73(acid red 73,AR73)免疫球蛋白G(IgG)。通过二喹啉甲酸(BCA)法、十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)试验、间接ELISA法分别测定IgG的浓度、纯度及效价。结果显示,饱和硫酸铵法所提IgG浓度为36.44 mg/mL,最高效价达1.6×10⁵;辛酸—硫酸铵法所提IgG浓度为15.79 mg/mL,最高效价达3.2×10⁵。提示,辛酸—硫酸铵法IgG纯度优于饱和硫酸铵法。     

抗新型鸭细小病毒卵黄抗体的制备、纯化及效价测定

为了制备抗新型鸭细小病毒卵黄抗体并改良其制备工艺,试验采用新型鸭细小病毒SD株尿囊液制备的油乳剂灭活苗免疫产蛋鸡,收取高免蛋分别用氯仿法、辛酸法和水稀释-硫酸铵二次沉淀法对其中的卵黄抗体进行提纯,比较提纯效果,然后采用SDS-PAGE和Western-blot法对制备效果进行评价,采用鸭细小病毒抗体酶联免疫检测试剂盒进行效价测定,分析卵黄抗体的消长规律。结果表明:氯仿法提取的卵黄抗体浓度为4.512 mg/mL,透明,呈浅黄色;辛酸法提取的卵黄抗体液浓度为3.422 mg/mL,半透明,呈浅白色;水稀释-硫酸铵二次沉淀法提取的卵黄抗体浓度为3.837 mg/mL,透明,澄清。SDS-PAGE结果显示卵黄抗体有两条特异性条带,一条重链(约为65 ku)和一条轻链(约为33 ku)。制备的卵黄抗体具有特异性。试剂盒测定卵黄抗体效价,氯仿法为1∶6 000;辛酸法为1∶8 000;水稀释-硫酸铵二次沉淀法最高,为1∶10 000,其中水稀释-硫酸铵二次沉淀法效果较优。说明本试验成功制备了新型鸭细小病毒的卵黄抗体。     

卵黄抗体三种提取方法的比较研究

运用硫酸铵法、聚乙二醇(PEG)法、冷乙醇法对卵黄抗体进行提取,并使用间接竞争酶联免疫吸附试验(ELISA)方法测定所得卵黄抗体的特异性,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测其纯度,用Nanodrop2000测其蛋白浓度并计算提取量,比较三种方法所得抗体的特异性、纯度和提取量。结果显示,三种提取方法所得卵黄抗体特异性高低依次为硫酸铵法、冷乙醇法、PEG法;纯度高低依次为硫酸铵法、冷乙醇法、PEG法;三种方法的提取量高低依次为PEG法、硫酸铵法、冷乙醇法。经综合分析与评价,硫酸铵法的抗体特异性较好、纯度较高、提取量也较高,且其操作方法相对简便,是比较具有优势的提取方法。     

应用辛酸硫酸铵法提取纯化兔IgG

血清中IgG的提取和纯化方法很多,但是各有其优点与不足。单一辛酸法和硫酸铵法操作简单但提取的IgG纯度不高,柱层析可获得高纯的抗体,但成本很高,而且回收率低。本试验应用辛酸硫酸铵法提取和纯化兔抗粪肠球菌血清中的IgG,取得比较理想的结果,现报告如下:1材料与方法1.1材料1.1.1血清:兔抗肠球菌血清(自制)。1.1.2主要药品及仪器:正辛酸(天津市化学试剂一厂),硫酸铵(西安化学试剂厂),凝胶成像系统SYDR2/1779,DYY-6B型稳压稳流电泳仪,透析袋(购自华美公司),UV-754型紫外分光光度计。1.1.3试验动物:健康家兔4只(由石河子大学实验动物中…     

鹅卵黄抗体IgY的提纯及其酶标抗体的制备

本试验采用辛酸去脂、饱和硫酸铵溶液盐析法提纯鹅卵黄抗体IgY,采用SDS-PAGE方法分析其纯度;用纯化后的IgY免疫试验兔,收集血清,测定血清抗体效价;采用辛酸-硫酸铵法结合Protein G树脂亲和层析法纯化免血清IgG,用改良的高碘酸钠法进行辣根过氧化物酶标记,直接ELISA法测定标记物效价.结果表明,提纯的鹅卵黄IgY浓度为11.5 mg/mL,纯度约为92％;血清琼脂扩散抗体效价为1∶32;Western Blotting试验证明,兔血清中含有抗鹅卵黄抗体IgY重链及轻链的特异性抗体;直接ELISA法测得标记物效价为1:1 100.     

小鼠腹水IgG类单克隆抗体纯化方法的研究

分别采用辛酸硫酸铵法(CA AS)、硫酸铵沉淀法(AS)和DEAE离子交换层析法对小鼠IgG腹水进行了纯化效果的比较。结果表明:CA AS法提取IgG的纯度为67.5%,高于AS法(43.2%),低于DEAE法(100%);CA AS法提取IgG的回收率为51.2%,远高于DEAE(8.9%),略低于AS法(63.8%)。将不同纯化方法获得的IgG定容至相同浓度。ELISA试验结果表明:DEAE法的OD值明显降低,表明DEAE纯化方法降低了IgG的免疫学活性。说明CA AS法是一种操作简单、成本低、纯化效果和回收效果较佳的提取小鼠腹水IgG的首选方法。     

两种方法纯化免抗绵羊肺炎支原体IgG的比较

目的:比较两种方法纯化兔抗绵羊肺炎支原体IgG的效果。方法:采用饱和硫酸铵和辛酸-硫酸铵两种方法分离纯化兔抗绵羊肺炎支原体抗体,并用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、分光光度计和琼脂扩散(AGP)试验对纯化产物进行相对分子质量、蛋白质含量及免疫活性进行鉴定。结果:纯化后抗体的蛋白含量基本相同;产物纯度和效价以辛酸-硫酸铵法较高。结论:辛酸硫酸铵法是一种简便、快速、高效的抗体纯化方法。     

抗猪流行性腹泻病毒变异株卵黄抗体的制备、纯化及其活性影响因素的研究

为制备抗猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus，PEDV）变异株卵黄抗体并探索卵黄抗体的纯化方法，本试验采用灭活的PEDV变异株CH/JX01全病毒免疫蛋鸡，收集免疫后所产的鸡蛋，分别用水稀释法、PEG-6000法和水稀释-硫酸铵二次沉淀法对鸡蛋中IgY进行提纯，然后运用间接ELISA和Western blotting方法鉴定和比较3种方法的提纯效果，获得可用于规模化生产的提纯方法；同时研究不同温度、pH条件下抗体活性，寻找对提纯IgY活性具有保护作用的物质。结果显示，本试验成功制备了抗PEDV变异株的卵黄抗体。浓度检测结果表明，水稀释法提取的IgY浓度最高，为6.204 mg/mL；PEG-6000方法提纯的IgY浓度次之，为4.673 mg/mL；水稀释-硫酸铵二次沉淀法IgY浓度最低，为3.359 mg/mL。间接ELISA检测结果表明，水稀释-硫酸铵二次沉淀法提纯的IgY效价最高，为1：12 800；其次是PEG-6000，为1：6 400；而水稀释法最低，为1：1 600。综合3种方法所提纯的卵黄抗体浓度与效价，发现水稀释-硫酸铵二次沉淀法的提纯效果优于其他两种方法。活性影响因素试验结果表明，提纯的IgY在37~60℃活性稳定；pH为4.0~11.0时具有良好的活性；在酸性条件下，20%硫糖铝对IgY活性具有较好的保护作用。本试验结果将为卵黄抗体的大规模生产运用与储存提供了有效的参考依据。     

不同方法提取卵黄抗体效果的比较

为了优化卵黄抗体提取工艺以及产业化生产提供技术参考,从众多方法中初步筛选了较为适宜的水稀释法、辛酸法、乙酸-乙酸钠法、酚沉淀法和海藻酸钠法,并比较了5种方法的提取工艺、生产成本、卵黄抗体提取量及其效价。试验结果表明,辛酸法的提取液体回收率最高,达到171％;辛酸法提取蛋白的浓度最高,为6．6mg／mL;辛酸法和海藻酸钠法提取卵黄抗体的凝集价最高,为1：128。综合各种因素考虑,辛酸法是提取卵黄抗体较为理想的方法。     

兔抗鹅IgG酶标抗体的制备及初步应用

为了研究兔抗鹅IgG酶标抗体的制备,试验采用水稀释-辛酸-硫酸铵法粗提,透析除盐,DEAEA-50纤维素层析相结合的方法提取鹅卵黄IgG,经核酸蛋白检测仪和SDS-PAGE测定IgG浓度;制备兔抗鹅IgG酶标抗体;利用酶标抗体检测小鹅瘟病毒(GPV)VP3基因疫苗的免疫效果。结果表明,粗提的IgG浓度为10 mg/mL,抗体纯度可达到94.5%;免疫扩散得出兔抗鹅 IgG抗血清效价约 1∶32,抗体酶标后效价为1∶3000;酶标抗体可以作为检测疫苗效果一种很好的工具。     

高免鸡蛋卵黄囊抗体的提取与纯化

本文用辛酸-硫酸铵盐析法从经过鸡新城疫和鸡传染性法氏囊高免的卵黄中提取二联抗体-IgG,提取液首先用琼脂凝胶沉淀试验检测鸡传染性法氏囊抗体和鸡新城疫抗体,并通过血液凝集试验和血液凝集抑制试验测定鸡新城疫抗体的血凝抑制滴度。结果表明,所提取的二联抗体对鸡新城疫和鸡传染性法氏囊抗原具有明显的特异性。     

青霉素G合成抗原免疫原性比较及其多克隆抗体制备

分别用碳二亚胺(EDC)法和生理学法将半抗原青霉素G与BSA、OVA偶联,合成4种抗原分别为PEN-EDC-BSA、PEN-BSA、PEN-EDC-OVA和PEN-OVA。用PEN-EDC-BSA与PEN-BSA分别免疫兔获抗青霉素G多克隆抗体,间接ELISA法检测结果表明使用生理学偶联方法合成的结合抗原其免疫原性好于EDC法。免疫PEN-BSA组的兔抗血清效价达到1∶204800。用正辛酸-饱和硫酸铵法纯化抗血清,IgG的最高浓度为27.42mg/mL。     

牛病毒性腹泻-黏膜病病毒斑点酶联免疫吸附检测法的建立

采用辛酸-硫酸铵法提取兔抗BVDV高免血清中的免疫球蛋白IgG,在混合硝酸纤维素膜上进行间接酶联免疫吸附试验,建立了检测BVDV抗原的斑点酶联免疫吸附检测法.结果显示,抗体最佳包被量为400μg/mL,酶标记羊抗兔IgG的最佳工作浓度是1:500倍稀释,抗原最小检出量是5.36μg/mL.应用建立的检测方法对78份腹泻...     

正辛酸与硫酸铵两步沉淀法纯化腹水单克隆抗体IgG

应用正辛酸与硫酸铵两步沉淀法纯化了1个BALB/C小鼠腹水单克隆抗体IgG。经聚丙烯酰胺凝胶电泳及ELISA等方法证实,从小鼠腹水中分离的IgG纯度较高,并且纯化前后单克隆抗体活性没有明显降低。本方法具有传统方法所不及的简便、省时及费用低等优点,尤其适用于大量样品中IgG的提纯。     

超声波辅助乙醇-硫酸铵双水相体系提取绞股蓝总黄酮工艺研究

本文采用超声波辅助乙醇-硫酸铵双水相体系提取绞股蓝总黄酮,并优化其工艺条件。在单因素试验的基础上结合正交试验,以总黄酮提取量为指标,探讨料液比、乙醇浓度、硫酸铵用量、超声功率和超声温度对绞股蓝总黄酮提取量的影响。结果表明：超声辅助乙醇-硫酸铵双水相提取绞股蓝总黄酮的最优工艺为：料液比1:30 （g/mL）,乙醇浓度50%,硫酸铵用量0.25 g/mL,超声功率240 W,超声时间40 min,超声温度70 ℃。在此条件下,总黄酮提取量为15.90 mg/g。超声波辅助乙醇-硫酸铵双水相提取绞股蓝总黄酮的效果较好,是提取绞股蓝中总黄酮的有效方法。 [关键词] 绞股蓝|总黄酮|超声波|乙醇-硫酸铵|双水相体系     

鸡IgG快速分离纯化和纯度鉴定

随着免疫学实验技术的普及和发展,从鸡高免血清中提纯IgG已成为常用的免疫化学技术. 在提纯鸡IgG过程中,不但要保证除去绝大多数杂蛋白和白蛋白,保留大多数免疫球蛋白,包括各种IgG亚类,而且又不影响IgG生物活性.这就需要一种好的提纯方法,既要保证IgG纯度,又要保证其生物活性. IgG的经典提纯法是先用硫酸铵盐析,得到粗制的Ig(Immoun-globulin)然后再经分子筛层析,离子交换层析,亲和层析等方法进一步分离纯化IgG.这些纯化方法需要一定的仪器、设备,操作复杂,工艺流程较长,且试剂昂贵,在一般实验室难以推广使用.而且辛酸-硫酸铵两步法提纯的IgG同样能得到高纯度、高生物活性的IgG.     

几种从鸡血浆中提取免疫球蛋白IgY方法的比较

鸡卵黄免疫球蛋白是产蛋母鸡受免疫刺激后产生免疫反应,被选择性地转移到卵黄中唯一的免疫球蛋白类物质,因其优良的生物学活性而被广泛应用于免疫学诊断和医药等领域。Ig Y主要存在于鸡卵黄和血清中,从血液中分离Ig Y将会使禽类血液这一天然蛋白资源得到充分利用。文章主要对比研究了Protein G柱洗脱分离提取Ig Y、冰乙醇分级离心法、两步硫酸铵沉淀法、聚乙二醇两步沉淀法和聚乙二醇/硫酸铵联合沉淀法五种方法提取血浆中Ig Y,并对提取产物进行纯度、含量和活性的测定。结果显示五种提取方法中,采用聚乙二醇/硫酸铵联合沉淀法分离纯化鸡血浆中的Ig Y,所得Ig Y纯度及活性相对较佳。     

应用辛酸硫酸铵法提纯兔抗鸡传染性法氏囊病IgG抗体

近年来,兔抗鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)IgG抗体被广泛应用于鸡病诊断、免疫检测、治疗等方面。在提纯IgG过程中,为了保证除去绝大多数杂蛋白和白蛋白,保留大多数免疫球蛋白(Ig),同时又不影响IgG的生物活性,就需要一种好的提纯方法[1]。IgG的提取和纯化方法很多,但是各有优点与不足。单一辛酸法和硫酸铵法操作简单,但提取的IgG纯度不高。柱层析可获得高纯度的抗体,但成本很高,且回收率低[2]。本试验利用辛酸硫酸铵法对制备的兔抗     

抗猪流行性腹泻病毒变异株卵黄抗体的制备、纯化及其活性影响因素的研究

为制备抗猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)变异株卵黄抗体并探索卵黄抗体的纯化方法,本试验采用灭活的PEDV变异株CH/JX01全病毒免疫蛋鸡,收集免疫后所产的鸡蛋,分别用水稀释法、PEG-6000法和水稀释-硫酸铵二次沉淀法对鸡蛋中IgY进行提纯,然后运用间接ELISA和Western blotting方法鉴定和比较3种方法的提纯效果,获得可用于规模化生产的提纯方法;同时研究不同温度、pH条件下抗体活性,寻找对提纯IgY活性具有保护作用的物质。结果显示,本试验成功制备了抗PEDV变异株的卵黄抗体。浓度检测结果表明,水稀释法提取的IgY浓度最高,为6.204mg/mL;PEG-6000方法提纯的IgY浓度次之,为4.673mg/mL;水稀释-硫酸铵二次沉淀法IgY浓度最低,为3.359mg/mL。间接ELISA检测结果表明,水稀释-硫酸铵二次沉淀法提纯的IgY效价最高,为1∶12 800;其次是PEG-6000,为1∶6 400;而水稀释法最低,为1∶1 600。综合3种方法所提纯的卵黄抗体浓度与效价,发现水稀释-硫酸铵二次沉淀法的提纯效果优于其他两种方法。活性影响因素试验结果表明,提纯的IgY在37~60℃活性稳定;pH为4.0~11.0时具有良好的活性;在酸性条件下,20%硫糖铝对IgY活性具有较好的保护作用。本试验结果将为卵黄抗体的大规模生产运用与储存提供了有效的参考依据。