不同亚型猪流感病毒双重RT-PCR快速检测

参照已发表的文章合成4对引物,分别能特异扩增出H1、H3、N1和N2片段,应用同时鉴别3个血清亚型H1N1、H1N2和H3N2的双重RT-PCR快速鉴别诊断猪流感的方法。从临床病料中检测出阳性后进行病毒分离鉴定,符合率为100%,表明该方法具有很高的使用价值。     

猪流感病毒分子生物学研究进展

猪流感（Swine influenza，SI）是由猪流感病毒（SIV）引起的一种急性高度接触传染性的群发性呼吸道疾病，其特征为突发咳嗽、呼吸困难、发热、衰竭及迅速康复，猪不分年龄、品种和性别均能感染，是规模化猪场普遍存在难以根治的群发性疾病之一。     

猪流感的防制

猪流行性感冒（Swine Influenza，SI）是由猪流感病毒（SIV）引起的一种急性高度接触传染性的群发性疾病。临床上以突发、高热、精神沉郁、食欲废绝、呼吸困难、阵发性咳嗽、发病率高、病死率低为特征，还会引起呼吸道细菌和病毒继发或混合感染，使病情更为严重。     

检测H1和H3亚型猪流感病毒多重RT-PCR方法的建立

猪流感病毒(swine influenza virus, SIV)危害猪体健康,影响生长性能,SIV常常与其他病毒和细菌双重或多重感染,使病情加重,死亡率增高[1].目前,猪流感(SI)已遍布美洲、亚洲和欧洲等世界各地,已成为规模化猪场的常发呼吸道传染病之一[2].特别是近年来禽源流感病毒在猪体内的发现更引起人们的关注[3].当前我国流行的SIV主要是H1和H3亚型[4-5].PCR方法特异、敏感、快速、简便,可从临床样品中直接进行诊断和鉴别,而不需要进行病毒分离和其他辅助性试验,是一种很有价值的检测手段.本研究建立的多重RT-PCR方法可同时达到对猪流感病毒诊断及H1和H3亚型鉴定目的,节约了时间和成本.     

多重RT-PCR检测猪流感病毒及血清亚型

根据GenBank登录的猪流感病毒各血清亚型NP基因,H1、H3亚型HA基因,N1、N2亚型NA基因核苷酸序列,经DNAstar软件类比选择保守区设计引物,sPCR筛选出引物对,用于扩增猪流感病毒NP基因、血凝素H1/H3亚型、神经氨酸酶N1/N2亚型基因片段。根据NP、H1N1、H3N2亚型引物扩增片段大小和反应条件的差异,将各引物配比组合,形成引物组合,建立多重RT-PCR体系。经对不同亚型模板的扩增、检验,建立的2个多重RT-PCR体系可用于猪流感病毒及H1/H3血凝素亚型、N1/N2神经氨酸酶亚型的快速鉴别、诊断。特异性试验检测多重RT-PCR不能扩增其他猪病毒核酸,核酸的最低检测量达0.2ng。采集临床具有呼吸道症状的猪肺、鼻腔棉试子等85份,与鸡胚分离及血凝/血凝抑制试验比较,阴性样品检测符合率达100%。     

应用RT-PCR检测猪传染性胃肠炎病毒的研究

根据GenBank已发表的猪传染性胃肠炎病毒(porcine transmissible gastroenteritis virus,TGEV)N蛋白的基因序列,设计合成1对引物,扩增片段长度为730 bp,在优化RT-PCR反应条件的基础上,建立了检测TGEV的RT-PCR检测方法,并用该方法对疑似TGEV的猪群临床腹泻疾病进行了诊断检测和分析。本研究建立的TGEV检测方法,特异、灵敏、可靠,为该病的诊断和流行病学调查研究提供了技术保障。     

H1亚型猪流感病毒微滴数字RT-PCR定量检测方法的建立

本研究针对H1亚型猪流感病毒(swine influenza virus,SIV)HA基因保守序列设计引物和探针,通过反应条件优化,建立了一种快速、准确检测H1亚型SIV的微滴数字RT-PCR定量方法。该方法特异性强,除H1亚型SIV外,H3、H5、H7亚型SIV以及猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒等检测均为阴性;敏感性高,最低可检测4.7拷贝/μL;重复性好,对5个不同稀释度的H1亚型SIV RNA进行3次重复试验,每个稀释度的变异系数均小于5%。利用该方法对湖南省规模化养殖场收集的30份猪鼻拭子样品进行检测,发现与荧光RT-PCR检测结果一致。试验表明,该方法快速、准确、灵敏,可为H1亚型SIV的快速筛查及流行病学研究提供可靠的技术保障。     

简述猪流感的防制

猪流感是一种急性、高度接触传染性的群发性呼吸道疾病,临床上以突发、高热、咳嗽、呼吸困难、反复发作、衰竭为特征。是规模化养猪场普遍存在且难以根除的群发性疾病,可使患猪生产性能下降, 恢复缓慢,推迟上市,直接影响猪群健康状态和猪的质量,甚至可直接引起患猪死亡,对养猪业危害极大。猪流感病毒主要存在于病猪的鼻液、气管和支气管渗出液以及肺、肺门淋巴结等处,更值得重视的是,猪流感能造成猪繁殖呼吸障碍综合征病毒     

猪繁殖与呼吸综合征病毒与猪流感病毒二重RT-PCR 检测方法的建立

为建立可同时检测猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）与猪流感病毒（SIV）二重RT-PCR 方法,研究根据GenBank 登录的相关病毒基因序列,选择保守区域设计引物,经过反应条件的优化,建立了可同时检测以上2 种病毒的RT-PCR 诊断方法,扩增的目的片段长度分别为364 bp（PRRSV）和981 bp（SIV）。通过实验证明该方法具有良好的特异性和较高的敏感性,对PRRSV 和SIV 的核酸检测最低浓度分别为 3.2×10-3 ng 和2.7×10-3 ng。应用该方法对32 、份临床样品进行检测发现PRRSV 阳性率为43.8%,SIV 阳性率为31.3%,二重感染率为9.4%。该方法的成功建立为快速高效地检测以上2 种病毒提供了有力手段。     

猪传染性胃肠炎病毒与猪呼吸道冠状病毒荧光RT-PCR鉴别检测方法建立与应用

本研究根据Genbank登录的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)N基因和S基因保守区序列设计合成了两对引物和探针,通过对荧光定量RT-PCR反应条件的优化,建立了TaqMan荧光定量RT-PCR快速检测TGEV的方法。该方法能有效地鉴别序列密切相关的猪传染性胃肠炎病毒与呼吸道冠状病毒。与常规RT-PCR试验比较表明,所建立的荧光RT-PCR检测技术快速、敏感,检测时限3个小时以内,具有很好的特异性和重复性。通过对39份临床样品进行检测,结果表明所建立的检测方法直接检测样品中猪传染性胃肠炎病毒。     

猪流感的防控及检测样品采集方法

1猪流感及其防控意义猪流感(swine influenza,SI)呈世界性分布,各地均有流行,发病率高[1]。猪流感能直接引起患病猪的死亡,并使患病猪的生长或生产不良,对养猪业的危害极大,研究表明康复猪和隐形感染猪是以后猪流感的传染源,猪流感作为一种主要的免疫抑制疾病,在猪场中普遍存在且难以根除[1,2]。猪在感染猪流感病毒(SIV)后,易导致呼吸系统疾病的并发或者混合感染,加剧流感病毒危害性,加大死亡率。猪也是流感病毒"混合器",极易产生流感病毒基因重排带来极其严重的公共卫生安全问题,因此猪流感的防控极其重要。     

猪传染性胃肠炎病毒RT-PCR检测方法的建立和应用

根据GenBank上发表的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)基因序列,针对TGEVN基因全序列设计合成了一对引物,以TGEV疫苗株为模板,建立了检测TGEV的RT-PCR方法。应用该方法对TGEV疫苗株RNA进行扩增,获得与预期大小相符,长度为1168bp的特异性目的片段;测序结果与已报道的TGEV不同毒株的序列同源性达到95%～97%;敏感性测定该RT-PCR可扩增到18pg的TGEV-N-cDNA;对猪传染性胃肠炎(TGE)的病料进行RT-PCR鉴定,可检测出TGEVN基因片段。结果表明建立的RT-PCR方法对TGEV的检测敏感性高、特异性强,可用于TGEV感染的诊断和流行病学调查。     

尼帕病毒与猪流感病毒双重荧光定量RT-PCR方法的建立

根据尼帕病毒(NiV)M基因和猪流感病毒(SIV)M基因序列设计引物和TaqMan-MGB探针,通过优化反应条件建立了一种鉴别NiV和SIV的双重实时荧光定量RT-PCR检测方法,对该方法的定量线性范围、敏感性、重复性和特异性进行了评价及初步应用。结果显示,用该方法检测NiV M基因的RNA标准对照(NiV-M-RNA)和SIV M基因的RNA标准对照(SIV-M-RNA),定量线性范围分别为4.6×101copies/μL~4.6×108 copies/μL和5.8×101copies/μL~5.8×108 copies/μL,检出限分别为46个拷贝和58个拷贝。该方法的组内试验和组间试验的变异系数均小于1.6%,显示其良好的可重复性。该方法仅对NiV-M-RNA和SIV呈现特异性扩增曲线,不与猪瘟病毒(CSFV)、猪流行腹泻病毒(PEDV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪细小病毒(PPV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)和伪狂犬病病毒(PRV)发生交叉反应。用该方法对236份猪的鼻拭子样品进行NiV和SIV的同时检测,所有样本的NiV检测结果均为阴性,有1份样本的SIV检测结果为阳性。本研究建立的方法可为猪临床样本中NiV和SIV的鉴别检测提供了一种快速、敏感和特异的技术手段。     

A型猪流感病毒TaqMan探针荧光RT-PCR检测方法的建立

根据A型猪流感病毒(SIV)的基质蛋白(M)编码基因保守序列设计合成一对特异性引物和一条Taq Man探针,建立了一种检测A型SIV的荧光RT-PCR方法。结果显示,该方法对H1N1、H3N2和H9N2亚型SIV均呈特异性扩增,对猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪流行性腹泻病毒和猪传染性胃肠炎病毒等猪的其他常见病毒无交叉扩增反应;该方法对M基因RNA对照(SIV-M-RNA)的最适线性检测范围为3.8×10~1~3.8×10~8拷贝数/反应,标准曲线方程为Y=-3.4365X+40.091,相关系数(R~2)为0.999 8,最低检出限为38个拷贝数的SIV-M-RNA。对3个不同浓度(3.8×10~3~3.8×10~5 copies/μL)的SIV-M-RNA进行组间和组内重复试验,每个浓度的Ct值变异系数均小于1.5%,具有良好的重现性。用该方法对860份进口猪的鼻拭子样本和78份国内猪场猪鼻拭子样本进行SIV检测,结果进口猪鼻拭子样本的SIV检测均为阴性,17份国内猪场猪鼻拭子样本SIV检测为阳性。本研究提供了一种快速、敏感和特异的A型猪流感病毒检测方法。     

RT-PCR检测猪传染性胃肠炎病毒的研究

根据GenBank发表的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)纤突蛋白S基因的5′端核酸序列设计了1对引物。该对引物扩增的目的片段长度为690bp。在优化RT-PCR反应条件的基础上,建立了TGEV的RT-PCR检测方法。     

多重荧光RT-PCR技术检测猪流感病毒、猪乙型脑炎病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒方法的建立

[目的] 建立能同时鉴测猪流感病毒（SIV）、猪乙型脑炎病毒（JEV）、猪瘟病毒（CSFV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的多重荧光RT-PCR方法。[方法] 根据4种病原体的高度保守基因序列,设计相应引物和探针,并对引物和探针浓度进行优化,检测48例疑似样本。[结果] 建立了多重荧光RT-PCR方法,检测48例临床样本中,4种病毒均未感染的1例,SIV与JEV混合感染占2.1?%,CSFV与PRRSV混合感染为31.3?%。[结论] 多重荧光RT-PCR对四种病原体的检测准确性好,具有快速的特点。     

猪流感的诊断及治疗

猪流感为猪流行性感冒的简称。是由A型猪流感病毒引起的一种急性、传染性呼吸道疾病。其特征为发病突然,咳嗽,呼吸困难,发热及迅速康复,猪群发病率在90%以上,但通常不会引发死亡。多发于晚秋、早春季节,通常情况下人类很少感染猪流感病毒。     

猪流感病毒的分离鉴定及特性测定

猪流感(SI)是由猪流感病毒(SIV)引起的猪的一种呼吸道传染病,目前我国主要流行H 1和H 3亚型[2],H 9N 2等亚型也见报道[3]。该病是一种免疫抑制病[1],感染后会抑制其他疫苗的免疫效果,易导致其他病原体混合感染,给养殖业造成巨大的经济损失。由于流感病毒基因组易发生变异,猪又是产生重组病毒的“混合器”,如20世纪90年代在意大利猪体内就发现了禽与人流感病毒重组体[4],如果产生一种可以在人群中传播的新型流感病毒,将造成极大危害,故及时掌握猪流感流行情况及进行有效的防制,具有重要的兽医流行病学和公共卫生学意义。本试验旨在对河北…     

猪流感病毒的分离鉴定及毒力检测

猪流感(Swine influenza,SI)主要是由正粘病毒科A型流感病毒引起的猪一种急性、高度接触性呼吸道传染病。为了解猪流感在广东的存在和流行情况、SIV的流行病学规律和遗传演化,本研究从广东省采集到的棉拭子和猪肺分离到的两株H3N2亚型SIV。选其中一株(SGD2)作为研究对象,对其致     

无锡地区猪流感病毒的分离与鉴定

对从江苏省无锡市几个呼吸道症状明显、高热发病的猪群中采集到的棉拭子和猪肺样品进行病毒分离,经纯化后,对病毒的血清型进行鉴定。结果表明:分离获得猪流感病毒(SIV)H3N2亚型1株、H1N1亚型1株、H9N2亚型毒株2株。这一结果为该市有效防控猪流感、深入研究SIV的传播机制和遗传演化规律提供了良好的流行病学资料。