维生素A对视黄素X受体β基因的诱导表达研究

采用RT-PCR技术检测分析了不同浓度的维生素A在猪的成纤维细胞内分别作用12、24和48 h后,视黄素X受体β基因（RXRβ）的表达变化情况。结果表明：不同浓度的维生素A对RXRβ基因的作用效果不同,12 h时,30.0μg·μL^-1组可显著诱导RXRβ基因的表达,24 h时,10.0μg·μL^-1组可显著诱导RXRβ基因的表达,48 h时,各组与对照组之间不存在差异。     

维甲酸X受体在杂色鲍性腺发育中的调控作用研究

[目的]研究维甲酸X受体在杂色鲍性腺发育中的调控作用。[方法]采用实时定量PCR技术和RNA干扰技术,分析RXR基因在杂色鲍性腺发育过程中的表达情况。[结果]RXR基因在性腺发育增殖期的不同组织的表达量与其他发育时期相比均存在显著差异,这表明增殖期是RXR在杂色鲍性腺分化与发育发挥作用的窗口期。注射dsRXR后,dsRXR注射组维甲酸X受体在卵巢中的表达量与绿色荧光阴性对照组和空白对照组相比显著下调。这些结果证实了对杂色鲍进行活体注射双链RNA可以让体内的目的基因产生基因沉默现象。[结论]RXR基因在杂色鲍性腺发育过程中起到关键作用,并且增殖期为RXR发挥作用的窗口期。     

维生素C对视黄酸受体β基因的调控

采用半定量RT-PCR方法,研究了在体外培养的猪成纤维细胞内添加不同浓度的维生素C后,视黄酸受体β基因(RARβ)的表达变化情况.结果表明,维生素C能够促进RARβ基因的表达,而且不同浓度和不同作用时间对RARβ基因的表达影响效果不同.     

饲养环境对中华绒螯蟹仔蟹生长与蜕壳相关基因表达的影响

中华绒螯蟹在不同饲养环境条件下生长存在巨大差异,为探讨不同环境条件对仔蟹生长和蜕壳相关基因表达的影响,了解基因表达的时空变化及其与环境的互作关系,本研究选取同一家系的大眼幼体和仔蟹分别饲养于室内玻璃钢水槽和室外小型水泥池两种环境,观察它们的生长差异,并应用荧光定量PCR(qRT-PCR)技术对甲壳动物高血糖素(CHH)、蜕皮抑制激素(MIH)、蜕皮激素受体(EcR)、维甲类X受体(RXR)以及性腺抑制激素(GIH)5个蜕壳相关基因的表达情况进行了分析。结果发现:室外水泥池饲养的仔蟹体质量均显著大于室内水槽饲养的仔蟹体质量(P0.05)。环境对MIH和RXR基因的表达不存在显著影响(P0.05),而CHH、EcR和GIH均存在极显著的环境表达差异(P0.01);5个基因(MIH、CHH、EcR、GIH和RXR)均存在显著的不同发育时期表达差异(P0.05);除MIH基因外,其他4个基因(RXR、CHH、EcR和GIH)的表达存在极显著的饲养环境与发育时期的交互作用(P0.01)。研究还发现,MIH、GIH和CHH对河蟹的蜕壳具有协同调控作用,而RXR与GIH对河蟹蜕壳具有一定程度的拮抗作用。     

IPTG诱导剂对C型产气荚膜梭菌β_2毒素基因表达的影响

对已构建的含β2毒素基因重组质粒p ETXB2进行限制性核酸内切酶酶切鉴定,并用SDS-PAGE检测不同培养条件下β2毒素基因的表达情况。经酶切鉴定证实,p ETXB2重组质粒含有β2毒素基因而且阅读框架和基因序列正确。同时采用IPTG诱导剂在改变培养基的p H、培养温度、诱导剂的加入量及诱导时间4个方面对β2毒素基因表达进行调控,其最佳的表达条件是37℃,p H 7.0的培养基中,用终浓度为0.8 mmol/L IPTG诱导4 h,β2毒素蛋白的表达效果最好。     

中药复方多糖对不同MHC B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞IL-2、IL-4、IL-12 mRNA表达量的影响

【目的】中药复方多糖对不同MHC B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞IL-2、IL-4、IL-12 mRNA表达量的影响。【方法】采用PCR-SSCP方法将500羽京红1号蛋鸡按不同MHC B-LβⅡ基因型分组,采集不同MHC B-LβⅡ基因型鸡外周血淋巴细胞,分别加入终浓度为100、75、50、0μg/mL中药复方多糖共培养24 h,收集细胞,采用Real-time PCR方法检测不同MHC B-LβⅡ基因型鸡IL-2、IL-4、IL-12基因mRNA的表达量。【结果】(1)与对照组相比,不同剂量中药复方多糖均能显著增强不同MHC B-LβⅡ基因型鸡IL-2、IL-4、IL-12基因mRNA的表达量(P0.05)。(2)中药复方多糖剂量为50μg/mL时,AA、BC基因型鸡IL-2、IL-4、IL-12基因mRNA的表达量最高,中药复方多糖剂量为100μg/mL时,BB基因型鸡IL-2、IL-4、IL-12基因mRNA的表达量最高。【结论】中药复方多糖能不同程度的促进各MHC B-LβⅡ基因型鸡IL-2、IL-4、IL-12 mRNA的表达,且不同MHC B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞最适中药复方多糖免疫调节剂量不同。     

海水青鳉雌激素受体基因的克隆、组织表达特性及环境雌激素EE2对其表达的影响

为了获得海水青鳉Oryzias melastigma雌激素受体的基因信息及其表达特性,采用RACE-PCR技术和实时荧光定量PCR方法,进行了雌激素受体基因的克隆、表达特性分析及其在17α-炔雌醇(EE2)暴露下的基因响应研究。结果表明:海水青鳉雌激素受体基因与其他脊椎动物雌激素受体基因同源性较高,特别是DNA结合结构域(DBD)在进化上高度保守,配体结合结构域(LBD)次之;OM-ERα/β1/β2在所检测的10种组织中均有表达,其中在青鳉肝脏、性腺、脾脏和肠中表达量较高;OM-ERα在肝脏中的表达和OM-ERβ1/β2在性腺中的表达,雌雄间存在显著性差异(P0.05);在EE2浓度为5、50、500ng/L的水体中暴露96 h后,海水青鳉仔鱼中的分子标志物卵黄蛋白原基因(vtg1)被显著诱导(P0.05),且呈浓度依赖关系;中浓度(50 ng/L)的EE2诱导仔鱼OM-ERβ1基因表达,OM-ERβ2对EE2暴露呈现低浓度诱导、高浓度抑制的趋势;攻毒试验结果表明,OM-ERα和vtg1之间存在一种正相关关系,暗示EE2可能主要通过ERα调控vtg1基因的表达;EE2攻毒下,β亚型存在一种倒U型的剂量-反应关系。研究表明:克隆获得的海水青鳉3个雌激素受体亚型基因OM-ERα/β1/β2,为后续开展海水模式鱼类雌激素受体相关研究提供了基础信息;OM-ERα/β1/β2的组织表达特性及EE2对仔鱼OM-ERα/β1/β2表达的不同调控,显示出海水青鳉3种ER亚型基因存在着不同的生理功能,且其对环境污染物的应答模式不同。     

中药复方多糖对不同MHC B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞TLR 4介导的TRIF依赖性途径的影响

探讨中药复方多糖在不同MHC B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞中对TLR4信号转导通路下游TRIF依赖性途径主要元件的影响。采用PCR-SSCP方法将500羽京红1号蛋鸡按不同MHC B-LβⅡ基因型分组,采集不同MHC B-LβⅡ基因型鸡的外周血淋巴细胞,分别加入终质量浓度为100、75、50、0μg/mL(高、中、低、对照组)中药复方多糖共培养16、24、32、48h,收集细胞,采用Real-time PCR方法检测TRIF、IRF3、IFN-β基因mRNA的表达。结果显示:(1)与对照组相比,中药复方多糖能显著增强不同MHC B-LβⅡ基因型鸡TRIF、IRF3、IFN-βmRNA的表达量(P0.05)。(2)中、低剂量中药复方多糖组AA基因型鸡TRIF、IRF3基因mRNA的表达量各个时间段均高于高剂量组,IFN-β在24、32、48h高于高剂量组,高剂量中药复方多糖组BB基因型TRIF、IRF3基因的表达量各个时间段高于其他剂量组,IFN-β在24、32、48h高于其他剂量组,低剂量中药复方多糖组中BC基因型TRIF、IRF3基因的表达量各个时间段高于其他剂量组,IFN-β在24、32、48h高于其他剂量组。表明中药复方多糖可能与淋巴细胞表面TLR4结合,可以通过下游TRIF依赖性信号转导通路,调控细胞免疫,并且对促进其信号通路主要元件mRNA的表达的最适cCHMPS剂量有一定的影响。     

山麻鸭卵泡发育的形态学及激素分泌调控基因的表达研究

为探讨各阶段山麻鸭卵泡发育水平以及激素分泌调控基因的表达情况,对不同发育等级山麻鸭卵泡壁的形态进行了观察,并检测了ＣＹＰ１９Ａ１和３β-ＨＳＤ基因的表达量．研究发现,发育过程中颗粒层和膜层细胞数量不断增加,密度和厚度也随着细胞的增殖而增长．对产蛋期山麻鸭卵泡膜层和颗粒层ＣＹＰ１９Ａ１和３β-ＨＳＤ的表达量进行检测结果表明,卵泡颗粒层的ＣＹＰ１９Ａ１基因主要在等级前阶段表达,３β-ＨＳＤ基因主要在等级阶段表达,卵泡膜层的ＣＹＰ１９Ａ１和３β-ＨＳＤ基因则主要都在等级阶段表达．     

不同日龄大白猪视黄素X受体γ基因的表达研究

本研究采用RT—PCR方法对大白猪的RXR—γ基因在1日龄、90日龄、t80日龄、270日龄和360日龄的心、肝、胃、脾、肾、肺、大畅、小肠、肌肉、子宫、卵巢共11个组织的表达情况进行了研究。结果表明,RXR—ymRNA在大白猪的心脏、脾脏、大肠、小肠和肌肉组织中持续高表达,而肾脏不表达该基因,肝脏组织也只在360日龄时有微量表达。     

黄瓜果实维生素C合成关键基因克隆与分析

【目的】鉴定调控黄瓜果实中L-半乳糖途径维生素C(Vc)合成相关基因的位置、数量及表达特征,同时对关键基因进行克隆分析,旨在为黄瓜果实中Vc合成调控研究奠定基础。【方法】根据已报道的拟南芥中L-半乳糖途径合成Vc相关基因,利用蛋白编码的氨基酸序列在黄瓜9930＿V2参考基因组数据库中进行BLAST比对,确定黄瓜中的同源基因,借助TBtools软件绘制基因在染色体上的位置。通过q RT-PCR分析上述基因在果实Vc含量差异显著的两份黄瓜材料中的表达量。利用PCR扩增对限速酶GDP-L-半乳糖磷酸化酶（GGP）及GDP-甘露糖-3′5′-差向酶（GME）同源基因进行克隆,测序分析这些基因在高Vc含量与低Vc含量黄瓜果实中的序列差异。构建系统进化树,分析黄瓜果实GME、GGP与其他物种中同源基因的亲缘关系。【结果】在黄瓜基因组中比对到21个参与L-半乳糖途径合成Vc相关酶PMI、PMM、GMPase、GME、GGP、GPP、Gal DH、Gal LDH的同源基因,7条染色体均有分布,在5号染色体和1号染色体上分布最多。通过对21个基因在两份果实Vc含量高低差异显著的两份材料CG45（高Vc含...     

不同光照条件对兴国灰鹅FSHβ、PRL和VIP基因mRNA表达水平的影响

为研究不同光照条件对下丘脑-垂体-性腺繁殖调控轴的影响,对兴国灰鹅分别进行不同光照时间和强度的处理。结果发现,不同光照时间条件下,长光照试验组个体输卵管中FSHβ基因的表达量极显著低于对照组中的表达量(P0.01);在下丘脑中,试验组个体VIP基因的表达量显著高于对照组(P0.05);而PRL基因在两组相同组织中表达差异均不显著(P0.05)。在30和80勒克斯光照强度条件下,试验组和对照组在所检测的组织中FSHβ、PRL和VIP基因表达规律一致,表达水平差异均不显著(P0.05)。由此可见,光照时间对兴国灰鹅繁殖调控轴中的FSHβ、PRL和VIP基因表达的影响较大,为兴国灰鹅反季节调控繁殖提供理论依据,光照强度对兴国灰鹅繁殖调控的作用还需进一步的研究。     

Vc对Cd中毒小鼠骨骼肌中Musclin基因及生脂基因表达的影响

为探讨维生素C(Vc)调控Cd中毒小鼠骨骼肌中Musclin基因及生脂基因的转录表达规律,用RT-PCR方法研究小鼠Musclin基因及生脂基因(FAS、PPARγ、TGH)表达水平的变化。结果表明,Cd对小鼠Musclin基因及生脂基因的表达具有显著抑制作用(P0.05),Vc+Cd组与只加Cd组比较,小鼠Musclin基因及生脂基因的表达水平明显升高,Musclin与FASmRNA表达存在显著负相关(P0.01),与PPARγ基因存在显著正相关(P0.05),与TGH基因相关性不显著(P0.05)。研究结果说明,Vc可提高Cd中毒小鼠骨骼肌中的Musclin基因及生脂基因的表达水平。     

不同日龄大白猪视黄素X受体α基因的表达研究

采用RT-PCR方法对大白猪的RxRα基因在1日龄、90日龄、180日龄、270日龄和360日龄的心、肝、胃、睥、肾、肺、大肠、小肠、肌肉、子宫、卵巢共11个组织的表达情况进行了研究。结果表明,RXRα mRNA在大白猪的肾脏、肺、小肠和肌肉组织中持续表达,而在心脏和子宫表达水平较低,1日龄时表达RXRα mRNA的组织最多,同时表达量也最高。     

基于Tet-on系统的RFP基因表达载体构建及功能验证

【目的】构建四环素诱导表达调控系统的表达载体,并对其功能进行验证。【方法】利用pTRE-tight和pdsred-Express2-N1构建带有红色荧光蛋白(red fluorescence protein,RFP)基因的载体pTRE-DSred,用其与另一载体pTet-on共转染293T细胞,并加入不同质量浓度(0,0.1,1,10μg/mL)的强力霉素(doxycycline,DOX)诱导,以未经质粒转染的293T细胞为对照组,在荧光显微镜下观察RFP基因的表达情况。【结果】成功构建了pTRE-DSred重组质粒,将其与pTet-on质粒共转染293T细胞,在细胞培养液中分别添加0.1,1,10μg/mL DOX,48h后均有红色荧光蛋白的表达,但10μg/mL DOX组红色荧光蛋白的表达水平明显低于前2个组;0μg/mL DOX诱导组中也有红色荧光蛋白表达,但水平极低;在未转染质粒对照组中未观察到红色荧光蛋白的表达。RT-PCR结果显示,pTREDsred和pTet-on共转染组均检测到RFP基因的转录。【结论】成功构建了Tet-on系统RFP基因表达载体,适宜质量浓度的DOX诱导有助于目的基因的高水平表达,但在不添加DOX诱导剂时,该Tet-on系统存在目的基因低渗漏表达现象。     

异源β-Casein基因启动子调控下的t-PA cDNA

β-酪蛋白(β-Casein)是哺乳动物乳汁中主要的蛋白质,其基因5＇侧翼调控区常作为乳腺定位表达的调控序列.表达载体pSVL-βr-PA和pSVL-βb-PA分别含有1.0kb的大鼠β-Casein和0.6kg的牛β-Casein基因调控序列及t-PAcDNA.采用基因直接注射方法将两种表达载体分别注入家兔乳腺中.溶圈试验结果显示,两种表达载体均能在兔乳腺细胞中得到表达,表达水平没有明显差异.     

异源β-Casein基因启动子调控下的t-PAcDNA在兔乳腺中的暂性表达

β-酪蛋白 (β-Casein)是哺乳动物乳汁中主要的蛋白质 ,其基因 5′侧翼调控区常作为乳腺定位表达的调控序列。表达载体 p SVL-βr-PA和 p SVL-βb-PA分别含有 1 .0 kb的大鼠β-Casein和 0 .6kg的牛β-Casein基因调控序列及 t-PAc DNA。采用基因直接注射方法将两种表达载体分别注入家兔乳腺中。溶圈试验结果显示 ,两种表达载体均能在兔乳腺细胞中得到表达 ,表达水平没有明显差异     

铜对Ctr1基因mRNA表达的影响

采用半定量RT-PCR法检测铜对猪传代肾细胞（PK15）中特异性铜转运蛋白Ctr1基因mRNA表达水平的影响,以β-actin为内参考,对各试验组cDNA同时进行PCR扩增。结果,猪肾PK15细胞/%1基因mRNA表达量在7.8～31.2μmoL.L-1 Cu范围内随铜添加浓度的升高减少,当铜添加浓度达到62.5μmoL.L-1时,其表达量又有所回升,呈双相反应。     

AtDME1化学诱导表达载体的构建及其瞬时表达

以拟南芥去甲基化转移酶基因DME1为目的基因,采用酶切、连接和重组反应的方法构建了以17-β-雌二醇为诱导剂的植物表达载体p ER8-DME1。将其转入农杆菌LBA4404菌株中,通过烟草瞬时表达技术,对该载体的诱导表达特性进行了研究。q PCR结果表明,较低浓度的17-β-雌二醇处理能够有效调控p ER8-DME1中目的基因的表达,诱导处理后目的基因表达量逐渐升高,在12 h后达到最高,之后缓慢下降。该载体的成功构建为深入研究DNA去甲基化与植物的生殖发育调控奠定了基础。     

日本血吸虫β-catenin基因的克隆及在不同发育阶段的表达水平

【目的】分析β-连环蛋白(β-catenin)在不同发育阶段日本血吸虫体内的表达特征,为研究Wnt/β-catenin信号通路对虫体发育的调控奠定基础。【方法】以7 d童虫cDNA为模板,通过RACE技术获得日本血吸虫β-catenin基因全长cDNA序列。采用实时定量PCR分析该基因mRNA在不同发育阶段日本血吸虫体内表达水平的变化。以含有多个抗原表位的β-catenin部分cDNA序列为模板,构建原核pET28a-β-catenin-310重组质粒,表达β-catenin蛋白。以纯化的原核表达产物为抗原,免疫BALB/c小鼠制备抗血清,以此抗血清为一抗,通过Westernblotting分析β-catenin蛋白在不同发育阶段日本血吸虫体内表达量的变化。【结果】β-catenincDNA(GenBank登陆号GU570442)序列全长2 354 bp,含完整的开放阅读框,编码671个氨基酸。β-catenin基因mRNA表达水平在虫卵中最高,23 d雌虫次之,在13 d童虫和23 d雄虫中也较高,约是23 d雌虫的一半,在其他发育阶段mRNA的表达水平相对较低。构建的重组质粒以包涵体形式表达β-catenin重组蛋白,该蛋白有很好的免疫原性。在日本血吸虫不同发育阶段β-catenin蛋白表达量的变化趋势与β-cateninmRNA表达水平的变化基本一致。【结论】不同发育阶段日本血吸虫β-catenin基因mRNA表达水平与β-catenin蛋白表达水平变化趋势基本一致;结合日本血吸虫发育特征,推测Wnt/β-catenin信号通路可能对虫体的器官分化、虫卵的形成及卵胚发育等过程起着重要的调控作用。