分离LDH和酯酶同工酶的聚丙烯酰胺凝胶制备和LDH活性与反应时间关系的探讨

用正交试验方法,考察了聚丙烯酰胺凝胶电泳分离乳酸脱氢酶同工酶和酯酶同工酶的分离胶制备的三因素(丙烯酰胺浓度、丙烯酰胺/甲叉双丙烯酰胺、缓冲液PH)、三水平,即L_9(3~3),采用综合评分法衡量电泳结果,经方差分析选出分离胶制备的最佳条件:乳酸脱氢同工酶,Acr=7.5％、C=2.6％,Acr/Bis=37.5、分离胶缓冲液PH8.9;酯酶同工酶,Acr=7.0％、C=2.3％。Acr/Bis=42.5分离胶缓冲液PH8.9。乳酸脱氢酶同工酶的活性与反应时间呈“S”型曲线关系。     

一种文蛤球形病毒分离纯化的初步研究

运用差速离心、蔗糖垫超速离心与CsC l密度梯度离心相结合的方法,从江苏海域异常发病死亡文蛤(M eretrix m eretrixLusoria)组织中提纯一种病毒颗粒。负染、电镜观察发现,该病毒粒子呈球形,直径为60~75nm,无囊膜。运用原子力扫描显微镜(AFM)对提纯病毒进行表面结构观察发现,该粒子具有明显的病毒表形特征,呈20面体对称结构,表面具有大量的病毒壳粒。     

我国烟草的一个重要病毒——马铃薯Y病毒

<正> 在我国,为害烟草的病害除烟草花叶病毒(TMV)和黄瓜花叶病毒(CMV)外,另一个分布广、为害较大的是马铃薯y病毒(PVY)。在田间烟草上的症状:发病初期新叶出现“脉明”,后期形成系统斑驳花叶,有些品种常在叶脉两侧出现深绿色带状斑。将PVY接种在普通烟、心叶烟、苋色藜、洋酸浆、大千生、蔓陀罗等寄主上均有病症表     

大白菜芜菁花叶病毒简化提纯程序的研究

大白菜芜菁花叶病毒(TuMV)沈阳分离物,是本研究组分离和纯化的毒原。在无虫温室中以人工接种于大白菜(小白口)叶片,适期收获,称重,冰冻过夜。次日加适量0.02M磷酸缓冲液,pH7.2匀浆。并进行差速离心;低速离心3000rpm,30分钟去寄主细胞器,取上清液搅拌加4％聚乙二醇(PEG—MW6000)及3％NaCl(W/V),搅拌沉淀病毒粒体,进行一系列低速及超速离心。超速离心后的沉淀物用0.01M磷酸缓冲盐液(含0.015M尿素)悬浮,得到纯化的TuMV制品。经电子显微镜检查,提纯物中含有大量单个非集聚的TuMV粒体。粒体平均长度为720nm,结构保持良好,粒体断裂现象很少。提纯物经指示植物接种测定,具侵染性。这一简化提纯法可以免去蔗糖密度梯度离心等过程,取得较为相似的效果。     

制取小麦旗叶粗酶液的最佳缓冲体系研究

[目的]探讨制取小麦旗叶粗酶液的最佳缓冲体系。[方法]采用不同的缓冲体系制备小麦旗叶粗酶液,测定小麦旗叶中过氧化物酶(POD)、淀粉酶、苯丙氨酸解氨酶(PAL)、脂氧合酶(LOX)的活力。[结果]当pH为6.2时,POD活力最高;当pH为5.8时,淀粉酶活力最高;当pH为7.0时,PAL和LOX活力最高。选用磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液为提取缓冲液时,PAL和LOX活力最高。当此缓冲液浓度为0.15 mol/L时,POD活力最高;当此缓冲液浓度为0.10 mol/L时,淀粉酶和LOX活力最高;当此缓冲液浓度为0.05 mol/L时,PAL活力最高。[结论]制取粗酶液的最佳缓冲体系是pH 7.0、0.10 mol/L的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液。     

豇豆叶霉病菌生物学特性的研究

豇豆叶霉病菌,即菜豆尾孢(Cercospra cruenia Sacc)在供试的7种半组合和3种组合培养基上都不形成分生孢子,但菌丝在其上均可生长,以豇豆叶葡萄糖琼脂培养基和V—8汁琼脂培养基为生长最佳培养基。不同碳源、氮源对菌丝生长的影响也不同,其中,2—甲基—D—葡萄糖苷和硝酸钙;硝酸钾、硝酸钠分别为生长的最佳碳源和氮源。菌丝生长的温度范围是5～35℃,以25℃～30℃为最佳。不同的光照处理(1000lux荧光)对菌丝生长无显著影响。菌丝在p H2～11.40的0.1M磷酸缓冲液中均可生长,以p H7～8为最适生长酸碱度,0.1M磷酸缓冲液较0.1M柠檬酸缓冲液利于菌丝生长。     

不同方法提取新疆红肉苹果RNA差异研究

使用生工柱式植物总RNA抽提纯化试剂盒、Trnzol法以及改良CTAB 3种方法,提取红肉苹果克孜阿尔玛的果肉、果皮、花瓣、叶片中的总RNA,并对比这3种方法提取RNA的产量、质量以及完整性。结果表明,由Trnzol方法提取所获得的RNA纯度较低,有降解现象,且有DNA、蛋白质的污染,果肉和果皮RNA的产量也并不理想;而用改良CTAB法和生工试剂盒法提取的RNA较少降解,所得28 S rRNA和18 S rRNA条带较为清晰,花瓣和叶片的OD_(260/280)均在2以上,生工试剂盒法提取的RNA产量高,OD_(260/280)和OD_(260/230)比值均在1.8～2.5,条带的完整性好。3种方法比较而言,改良CTAB法和Tr Nzol法提取的RNA条带的清晰度、产量及质量都低于生工试剂盒法。     

火龙果根际土壤微生物2种DNA提取方法的比较

为获得高质量的火龙果根际土壤微生物总DNA,比较了CTAB-SDS法和SDS法的提取效果,结果表明:2种提取方法均获得约23.1 kb的DNA片段。其中,CTAB-SDS法获得的DNA提取上清液颜色为淡黄色,提取总DNA的量为7.4～7.7 mg·kg~(-1),OD_(260/280)值在1.81～1.95之间,OD_(260/230)值在1.26～2.03之间, DNA平均质量浓度为0.51 g·L~(-1)。SDS法获得的DNA提取上清液颜色为深棕黄色,提取总DNA的量为3.5～4.15 mg·kg~(-1),OD_(260/280)值在1.52～1.68之间,OD_(260/230)值在1.35～1.53之间,DNA平均质量浓度为0.075 g·L~(-1)。可见,CTAB-SDS法提取DNA的片段较完整,纯度较高,可直接用于后续实验操作,更适用于火龙果根系土壤微生物总DNA的提取。     

抗Spodoptera f.病毒单克隆抗体的初步研制

本文介绍了 Spodoptera frugiperda 病毒多角体及病毒粒子的提纯方法。粗提材料先通过40%蔗糖,在10000r/min 下离心15分钟,随后悬浮于0.01M Tris 缓冲液,25～65%蔗糖的连续梯度中,于40000 r/min 下离心30分钟。取出多角体的条带,洗除游离残存的蔗糖,透析过夜。将多角体在4℃,0.01MNa_2CO_3,0.01MEDTA,0.17M NaCl,pH=1下,作用1小时,随后调节 pH 到8.5～8.9,2000g,离心10分钟。该制剂在4℃下,25～60%蔗糖梯度中,24000r/min,离心2小时。随后取出病毒粒子,重新悬浮于蒸馏水中,于—70℃下贮藏备用。每个 BALB/C 小白鼠免疫4～5次,最后一次注射是在融合前4～7天。将2×10~8脾细胞与2×10~7P_3×63或 SP-2骨髓瘤细胞混合,并用50%PEG(Sigma)融合,用间接酶联免疫法进行筛选阳性杂交瘤细胞,强阳性者进行克隆化。以多角体及病毒粒子为抗原者,均建立了10株能产生特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株,该抗体的效价较高,并进行了血清学的分类。     

鸭瘟病毒提纯方法比较

将鸭瘟病毒CHv株经鸭胚和鸭胚成纤维细胞(DEF)进行培养增殖后,收集病毒液,分别采用沉淀法、层析法、差速离心法和蔗糖不连续密度梯度离心法进行了鸭瘟病毒的提纯研究,结果表明,DEF增殖与蔗糖不连续密度梯度超速离心法是鸭瘟病毒较好的增殖和提纯方法,病毒粒子主要存在于400～500g·L-1蔗糖层上;经20g·L-1磷钨酸负染后电镜观察发现,提纯病毒具典型疱疹病毒特征,大小较一致,为170～190nm,由核芯、衣壳和囊膜3部分组成结构较完整的病毒粒子;采用Bradford法测定,纯化病毒液中病毒含量为0.71mg·mL-1.     

神秘果基因组DNA提取方法比较研究

在CTAB法及SDS法的基础上设计了6种提取方法,比较了不同方法对神秘果幼嫩叶片DNA的提取效果。结果表明:改进的SDS法,通过提高提取缓冲液中重要成分的含量,与二次纯化的方法相结合,提取的DNA无明显降解、杂质少,OD260/OD280值为1.62,接近标准值,是有效提取神秘果基因组DNA的方法。     

玉米矮花叶病毒山东和北京两分离物的比较鉴定

引起北京和山东玉米矮花叶病的北京分离物(MDM-BJ)和山东分离物(MDM-SD)主要侵染禾本科植物,二者的寄主范围和症状反应又有一定的差异。提纯MDM-BJ的最大吸收峰在260nm,最小吸收峰在240nm,OD260／CD280=1．18。提纯病毒产量为1．5mg／100g鲜病叶。病毒粒体弯曲线状,平均长度为710nm。在感病组织内可以观察到风轮状、卷旋状和片层凝集状内含体。MDM-BJ和MDM--SD都能与玉米矮花叶病毒(MDMV)的抗血清反应。上述结果表明,北京和山东的两个分离物都是玉米矮花叶病毒(MD-MV)。引起我国玉米矮花叶病的毒原是不同于国外毒原的新株系。     

鸡毒支原体DNA提取和纯化的研究

本文报道了鸡毒支原体ＤＮＡ提取和纯化过程。应用不同方法自鸡毒支原体培养物中共提取１０批鸡毒支原体ＤＮＡ。ＤＮＡ片段大小均一,在琼脂糖凝胶电泳中呈一条带,ＤＮＡ溶液的ＯＤ２６０／ＯＤ２８０接近１．８。用限制性核酸内场酶ＢａｍＨＩ切割,呈清晰的ＤＮＡ条带。     

低聚木糖在食品加工过程中的稳定性研究

研究了低聚木糖在食品杀菌过程中的热稳定性变化。对低聚木糖采用4种杀菌法,即,常温杀菌,巴氏杀菌(缓冲液控制pH值2.0~8.0,温度65℃,加热30 min),高温杀菌(缓冲液控制pH值2.0~8.0,在常压60~100℃下加热15 min)和高压杀菌(121℃,加热10~60 min),通过DNS测定法测定低聚木糖的OD值,研究了低聚木糖在4种杀菌条件下的热稳定性。巴氏杀菌(pH值2.6~7.0),高温杀菌(pH值5.0~7.0)和高压杀菌(pH值3.0~6.8)时,P70低聚木糖具有良好的热稳定性。当P70低聚木糖作为添加剂添加到一般食品中时,在pH值4.2~7.0,在巴氏杀菌、高温杀菌、高压杀菌过程中具有良好的稳定性。     

Tobacco mosaic virus: purifying and sorting associated particles accordig to length

End-to-end aggregation of tobacco mosaic virus and associated particles during extraction and purification may be prevented by transfer of the virus to 0.001M buffer solution of ethylenediaminetetraacetic acid, pH 7.5, as rapidly as practicable. Colored components were removed with charcoal and diatomaceous earth, and salts by rapid passage through a column of granulated 8 percent agar gel. The virus particles were sorted according to length by passage through a 1 percent granulated agar-gel column to isolate the 300- and 200-mmicro fractions and through a 5 percent agar gel to isolate the shorter particles.     

PVP对烟草基因组DNA提取的影响

为克服烟叶组织中蛋白质、糖类、色素、烟碱及酚类等物质对烟草基因组DNA提取的干扰,防止DNA产生褐变,获得质量高且适于SRAP-PCR反应需要的DNA,采用改良CTAB法探讨了在提取液中添加不同浓度PVP对烟草基因组DNA提取质量的影响.结果表明:在1%、2%、4%PVP浓度下提取烟草DNA样品的OD260/OD280值均在1.7～1.9之间,OD260/OD280值随着提取液中PVP浓度的提高而增大,DNA褐化程度明显降低,获得的DNA能满足SRAP分析要求.     

缓冲液匀浆法和丙酮浸提法提取杨桃过氧化酶的研究

[目的]为杨桃果实过氧化物酶(POD)的分离纯化提供理论依据。[方法]用缓冲液匀浆法和丙酮浸提法对杨桃POD进行提取,并比较其提取的效果。[结果]用缓冲液匀浆法提取杨桃POD的最佳条件为:PVPP浓度1.0%、提取时间4 h、pH 7.0;用丙酮浸提法提取杨桃POD的最佳条件为:丙酮浓度90%、丙酮浸提时间30 min、料液比1∶4 g/ml。[结论]经比较,用丙酮浸提法提取的杨桃POD的比活性远大于缓冲液匀浆法,约是后者的15倍。在提取杨桃POD时,宜选用丙酮提取法。     

水稻RNA纯化方法的比较和改进

本实验利用TRIZOL试剂提取水稻苗期叶片总RNA,对三种常用的RNA纯化方法和改进的纯化方法进行了比较。通过凝胶电泳、紫外分光光度法和RT-PCR法检测提取的RNA样品的品质,结果表明,应用改进的RNA纯化方法可有效去除水稻RNA中的DNA污染,电泳条带清晰无降解;OD260/OD280为1.91~1.98,具有较高的纯度;改良方法纯化的RNA逆转录为cDNA,作为PCR扩增的模板,以不同的循环数进行扩增,在反应适宜循环数内检测不到DNA片段污染,说明用改进方法提取的RNA,其质量和纯度可以满足下一步分子生物学研究的需要。     

雷公藤叶片基因组DNA不同提取方法比较

[目的]比较雷公藤叶片中基因组DNA的提取方法。[方法]采用常规CTAB法、改良CTAB法、常规SDS法、高盐低pH值法和一步法分别提取雷公藤叶片基因组DNA,利用琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法测定样品OD260与OD280的比值以及RAPD扩增结果,判断所得DNA样品的纯度,并根据OD260值计算不同提取方法的DNA得率。[结果]改良CTAB法提取效果最佳,所提DNA的平均得率为219.3μg/g,OD260/OD280比值在1.869～1.903,用于RAPD-PCR均有较好的扩增结果。[结论]改良CTAB法是雷公藤叶片基因组DNA提取的最佳方法。     

SDS-CTAB法提取烟草病圃土壤微生物总DNA

采用SDS-CTAB法提取了烟草病圃土壤中微生物的总DNA,经过纯化后获得的DNA大小约为21 kb,OD260/OD280高于1.70;用细菌和真菌保守序列引物进行PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳能检测到预期大小的扩增条带。