二乙烯亚胺在猪流行性腹泻病毒PEDV-WN株灭活疫苗中的应用

[目的]通过甲醛和二乙烯亚胺对猪流行性腹泻病毒PEDV-WN株的灭活效果比较,获得一种适合猪流行性腹泻病毒疫苗灭活的生产工艺.[方法]将二乙烯亚胺接种小白鼠观察二乙烯亚胺的毒性.分别使用甲醛和二乙烯亚胺,在室温条件下灭活PEDV-WN株病毒液8、12、16、20和24 h,取灭活后的病毒液接种生长良好的单层Vero细胞,进行灭活效果的检验;同时,取灭活检验合格的病毒液进行无菌检验.灭活合格的病毒液乳化配苗,进行安全性和效力试验.[结果]接种二乙烯亚胺的小白鼠28 d均健活,状态良好;甲醛体积分数为0.3％,灭活16 h可使病毒液完全灭活;二乙烯亚胺浓度为0.010 mol/L,灭活12 h可使病毒液完全灭活;灭活合格的病毒液无菌;将不同方法灭活后的病毒液乳化配苗,接种3～5日龄的仔猪,安全性较好,未观察到不良反应,然后用PEDV-WN毒株攻毒,二乙烯亚胺灭活制备的疫苗比甲醛灭活制备的疫苗保护率高.[结论]在猪流行性腹泻病毒PEDV-WN株病毒液中加入浓度为0.010 mol/L的二乙烯亚胺,在室温灭活12 h,可使病毒完全灭活,且制备的疫苗安全性好,保护率高.     

ND—EDS—76异源二联油苗的研制

将鸭源鸡新城疫（ND）病毒D10株和鸡减蛋综合症（EDS－76）病毒GC2株同时接种于同一鸭胚内复制，增殖96h收取尿囊液，用甲醛灭活后加白油佐剂制成ND－EDS－76异源二联油乳剂灭尖疫苗，该疫苗生产工艺简单，成本低，经试用表明可有效地预防ND产EDS－76的发生。     

鸡减蛋综合症病毒（EDS—76）的分离与鉴定

采取新疆五家渠某鸡场发病鸡病料，接种鸭胚，分离病毒，病料在鸭胚中盲传至第５代，鸭胚尿囊液ＨＡ效价达２１７，ＨＡ可被ＥＤＳ－７６标准阳性血清抑制。免疫电镜观察到了病毒颗粒，表明该病是由ＥＤＳ－７６病毒所致     

鸭疫里氏杆菌油乳剂灭活苗的研制

<正>鸭疫里氏杆菌病(又称鸭传染性浆膜炎、鸭疫巴氏杆菌病)是雏鸭一种常见的急性败血性传染病。预防控制该病的方法是药物防治和菌苗接种,我们以本地分离株制备种子液,再将种子液接种鸭胚增殖培养,收获菌液经甲醛灭活后制备成油乳剂灭活菌苗,进行免疫攻毒试验,保护率为75.0%。在部分鸭场使用该菌苗,结果证明安全有效。     

鸡新城疫和减蛋综合症异源二联油乳剂灭活疫苗的研制

将鸭源鸡新城疫（ＮＤ）病毒Ｄ１０株和鸡减蛋综合症（ＥＤＳ－７６）病毒ＧＣ２株同时接种于同一鸭胚内复制，增殖 ９６ ｈ收取尿囊液，用甲醛灭活后加白油佐剂制成 ＮＤ和 ＥＤＳ－７６异源二联油乳剂灭活疫苗。简化了生产工艺、降低了制苗成本。经试用表明，该疫苗可有效地预防ＮＤ和ＥＤＳ－７６的发生。     

鸡产蛋下降综合症（EDS_（－76））Z_（16）毒株的分离和鉴定

从５个爆发产蛋下降综合症的鸡场收集８０个样品中，分离到５株具血凝性的病毒，命名为ＣＡＶ—Ｚ＿（１６）、Ｚ＿２、Ｗ＿４、Ｔ＿１和Ｔ＿３株。病毒大小７０～８０ｎｍ，无囊膜，二十面体对称；对氯仿不敏感，ｐＨ３～５下稳定，５０～６０℃１小时不被完全灭活；在ＤＥＦ细胞上繁殖能被ＩＵＤＲ抑制；经血凝抑制试验、琼扩试验和微量中和试验证实与ＡＶ—１２７株属同一血清型，鉴定为ＥＤＳ＿（－７６）病毒。ＣＡＶ—Ｚ＿（１６）株能在鸭胚上繁殖，致死鸭胚，ＨＡ效价达２￣（１３）～２￣（１７），也能在鸭胚成纤维细胞上繁殖，产生ＣＰＥ，但ＨＡ效价仅有２￣７～２￣（１０）。初次分离ＥＤＳ＿（－７６）病毒选用鸭胚较佳，从生殖道分离成功率较高。     

鸡产蛋下降综合症（EDS—76）Z16毒株的分离和鉴定

从５个爆发产蛋下降综合的鸡场收集８０个样品中，分离到５株具血凝性的病毒，命名为ＣＡＶ－Ｚ１６、Ｚ２、Ｗ４、Ｔ１和Ｔ３株。病毒大小７０－８０ｎｍ，无囊膜，二十面体对称；对氯仿不敏感，ＰＨ３－５下稳定，５０～６０℃１小时不被实例灭活；在ＤＥＦ细胞上繁殖能被ＩＵＤＲ抑制；经血凝抑制试验、琼扩试验和微量中和试验证实与ＡＶ－１２７株属同一血清型，鉴定为ＥＤＳ－７６病毒。ＣＡＶ－Ｚ１６株能在鸭胚上繁殖，致死鸭     

鸡ND—EDS—76二联油乳剂灭活苗的研究及免疫效力、保存期观察

应用NDLasotaE株和EDS－76H912株，接种鸡胚和鸭胚，当血凝价上升到大于等于1：1280和1：10000时收获，收适当的灭活剂灭活后，按一定比较加吐温85、可苯85，硬脂酸铝和白油，制成ND－EDS－76二联灭活油苗，经免疫观察证明，该苗有良好的免疫力，两种病毒之间无干扰作用，被接种鸡无任何不良反应。该苗置4℃冰箱可保存12个月，15－30℃室温可保存6个月不破乳，不分层，颜色无改变，用该苗接种5000只父母代种鸡的追踪观察，接种后15天两种抗体呈明显的动态上升，25天可达到比较稳定的高峰水平，接种后10个月，ND和EDS－76抗体效价仍分别保持在6．5Log2和5．6tog2水平上，，对18－20周龄产蛋母鸡，肌肉或皮下注射0．5ml/只，应用30万忌份的联苗证明，疫苗安全，效力确实，抗体维持时间长，保存期长，使用方便，效益显著。     

禽传染性脑脊髓炎病毒的分离鉴定

通过ＳＰＦ鸡胚连接传代，从自然发病肉鸡脑组织中分离出一株禽脑脊髓炎病毒，命名为ＡＥＶ－Ｌ２Ｚ株。该病毒抗原与标准阳性血清之间出现清晰的沉淀线，在接种的发病鸡胚和病鸡的胰岛细胞和大脑神经细胞的胞浆中可见呈六边形颗业状的病毒粒于聚集或散在，直径２５～３０ｎｍ。该病毒对ｐＨ３，氯仿，乙醚，胰蛋白酶，去氧胆酸钠具有抵抗力，在Ｍｇ＾２＋保护下抵抗热效应（５０℃）对ｐＨ２无抵抗力，２５℃和－８０℃反复冻融３，     

H9亚型禽流感病毒NJ01株动物回归试验前后生物学特性比较

将鸭源H9亚型禽流感毒株NJ01在SPF鸡胚上所传第四代（E4）,经静脉注射回归8日龄非免疫樱桃谷鸭,取死亡鸭肺组织作为病毒重分离材料,接种SPF鸡胚,收获24～96h死亡鸡胚尿囊液,混合为F1,取F1,按上述方法再次进行回归试验并分离病毒,收获的病毒液记为F2,取E4、F1及F2病毒液,对其生物学特性进行了比较研究。研究结果表明：F2较E4对鸡胚的敏感性增强,其MDT／MLD值减小,对44日龄非免疫樱桃谷鸭静脉攻击的感染性增强,以10^8.5ELD50／羽的剂量攻毒后1d＋2d喉拭子的病毒重分离阳性率由3／5增至4／5。     

鸡法氏囊病野毒的分离,细胞毒的培养及鉴定

从发生法氏囊病（ＩＢＤ）的免疫肉鸡群的法氏囊病料中分离到１株病毒。该病毒致使非免疫鸡胚病变、死亡和鸡胚成纤维细胞病变。将其５代内细胞培养毒回归非免疫鸡胚和适龄鸡，复制出类似于野毒引起的鸡胚病变和典型ＩＢＤ病例，鸡的死亡率为１／３￣２／３。其５代细胞毒的灭活制剂，使非免疫鸡在接种后２１天或３２天１００％出现ＩＢＤ琼扩阳性。     

禽传染性支气管炎——肾变病型病毒的分离和初步鉴定

从发病雏鸡的肾脏中分离到一株禽传染性支气管炎——肾变病型〔AvianInfectious Bronchitis(IB)——Nephrosis Form〕病毒。经盲传三代接种鸡胚后,出现典型的侏儒胚病变。该病毒能被乙醚、氯仿灭活,经56℃30分钟后被灭活,但能抵抗 pH2 30分钟。在电子显微镜下,病毒粒子直径为103nm,有19nm 宽的囊膜,囊膜上有典型的球状突起呈花冠状。病毒粒子内部有一典型的马蹄型结构     

减蛋综合征AQ毒株的分离与鉴定

通过鸭胚接种，从发生产蛋下降、产畸形蛋的鸡群中分离到一株病毒ＡＱ毒株。该病毒能在鸭胚和鸭胚成纤维细胞上生长，并能引起明显的胚体病变和细胞病变，对鸡红细胞的凝集作用能被ＥＤＳ７６标准阳性血清所抑制；病毒对氯仿不敏感、耐酸（ｐＨ３．０）、对热（５０℃３０ｍｉｎ）稳定，核酸型为ＤＮＡ，电镜观察见直径约７０～７５ｎｍ的圆形病毒颗粒。初步鉴定ＡＱ株是鸡减蛋综合征病毒。     

一株安徽株雏鸭肝炎病毒的分离与鉴定

从安徽省芜湖某养殖户送检的疑似鸭病毒性肝炎(DHV)的发病雏鸭肝等组织中分离到一株病毒,单称WHD。通过鸭胚接种分离到病毒。经动物试验显示,该病毒分离株的致死率达到70%。经过观察临床表现、剖检变化、血清被动保护试验,初步确诊所采集的病料均为鸭肝炎病毒。经和鸭胚中和试验证明,该病毒的血清型为Ⅰ型。     

ND-EDS-76异源二联油苗的研制

将鸭源鸡新城疫 (ND)病毒 D1 0 株和鸡减蛋综合症 (EDS- 76 )病毒 GC2 株同时接种于同一鸭胚内复制 ,增殖 96 h收取尿囊液 ,用甲醛灭活后加白油佐剂制成 ND- EDS- 76异源二联油乳剂灭活疫苗。该疫苗生产工艺简单 ,成本低 ,经试用表明可有效地预防 ND和 EDS- 76的发生。     

雏番鸭胰腺型鸭1型甲肝病毒分离鉴定及VP1基因分析

采集自胰腺发黄或出血的雏番鸭病料经RT-PCR检测为鸭1型甲肝病毒阳性后,接种11日龄非免疫番鸭胚获得一株病毒(命名为MPZJ1206)。该株病毒在不同温度下均不凝集鸡、鸭和绵羊红细胞;鸭胚中和试验表明蚀斑纯化毒可被经典的鸭1型甲肝病毒高免血清特异性所中和。该株病毒对7日龄雏番鸭的致死率为38.5%,病死鸭剖检病变与临床发病鸭相同,且从病死鸭脏器中回收分离到的病毒经鉴定仍为鸭1型甲肝病毒。应用鸭1型甲肝病毒VP1基因特异性引物从该株病毒克隆获得的714bp的基因片段,与经典鸭1型甲肝病毒分离株Du/CH/LGD/111239VP1基因的同源性最高,为99.1%,经遗传进化分析表明该株病毒属鸭1型甲肝病毒谱系。以上结果表明,雏番鸭胰腺炎是由鸭1型甲肝病毒感染所致,这一新病型明显不同于经典的鸭1型甲肝病毒感染引起的肝脏出血,鉴于此,建议将本试验分离株命名为胰腺型鸭1型甲肝病毒。     

鸭瘟病毒提纯方法比较

将鸭瘟病毒CHv株经鸭胚和鸭胚成纤维细胞(DEF)进行培养增殖后,收集病毒液,分别采用沉淀法、层析法、差速离心法和蔗糖不连续密度梯度离心法进行了鸭瘟病毒的提纯研究,结果表明,DEF增殖与蔗糖不连续密度梯度超速离心法是鸭瘟病毒较好的增殖和提纯方法,病毒粒子主要存在于400～500g·L-1蔗糖层上;经20g·L-1磷钨酸负染后电镜观察发现,提纯病毒具典型疱疹病毒特征,大小较一致,为170～190nm,由核芯、衣壳和囊膜3部分组成结构较完整的病毒粒子;采用Bradford法测定,纯化病毒液中病毒含量为0.71mg·mL-1.     

雏鸭病毒性肝炎的诊断

对上海某鸭场１３日龄急性死亡角弓反张的病鸭进行了系列诊断。病鸭肝脏病理变化典型,肉眼观察呈土黄色,且肿胀,出血,细菌分离培养结果阴性,进一步取病肝制成悬液,接种鸡胚,收集尿囊液分离病毒,并用雏鸭病毒性肝炎单抗酶标抗体采用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ鉴定呈阳性。     

新城疫病毒和减蛋综合征病毒同鸭胚增殖的研究

鸭源新城疫病毒（ＮＤＶ－Ｄ１０）和减蛋综合征病毒（ＥＤＳＶ）可以在鸭胚中同时良好增殖，两种病毒的血凝价分别与单独接种时一致；同胚增殖病毒对鸭胚或ＳＰＦ鸡胚的感染能力和致病性分别与单独接种组无显著差异；利用同鸭胚增殖病毒的尿囊液制备的二联油乳剂灭活疫苗接种免疫鸡可以分别抵抗ＤＮＶ强毒和ＥＤＳＶ强毒的攻击。     

鸡减蛋综合征病毒的分离与鉴定

从产蛋率下降．出现软壳蛋、薄壳蛋等畸形蛋的鸡场采集病料，接种鸭胚后分离到1株病毒，经过电镜观察，脂溶剂敏感性试验、HA试验、HI试验、AGP试验，分离病毒被鉴定为EDS-76病毒。