哈维氏弧菌TS-628菌株趋化性研究

采用平板趋化和毛细管趋化的方法,研究了病原性哈维氏弧菌TS-628菌株的趋化性。哈维氏弧菌对青石斑鱼肌肉、表皮黏液、肠黏液及血清的趋化性研究结果表明,该菌对青石斑鱼肌肉提取物的趋化性最强,且哈维氏弧菌的趋化运动明显受到温度、pH及盐度等环境因子的影响。哈维氏弧菌对青石斑鱼肌肉18种主要氨基酸的趋化性研究表明,该菌对其中多种氨基酸均表现出很强的趋化性,但氨基酸浓度也会对该菌的趋化性造成影响,浓度过高趋化性反而减弱。     

哈维氏弧菌生物膜生成的影响因素研究进展

哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)是弧菌病的主要病原菌之一,具有宿主范围广的特点.弧菌病具有发病率高、病死率高等流行特点.生物膜是哈维氏弧菌在自然界中存在的主要形式之一,在经历黏附、聚集后形成的成熟生物膜能够增强细菌对外界环境的抵抗力并扩散开来.菌液浓度、pH值、温度、渗透压等理化因素均对哈维氏弧菌生物膜的形成...     

哈维氏弧菌Y91301菌株培养工艺的研究

用大黄鱼分离的哈维氏弧菌Y91301进行试验,研究接种浓度、培养瓶装液量、起始pH值、培养时间、培养温度和培养液配方等因素对菌株生长的影响,确定静置培养时最适条件为:接种母液浓度1×108～1×109cfu ml,接种量6%～8%(相对培养瓶装液量),装液量40～50ml 250ml,培养液初始pH值为6 0～6 5,培养温度28℃;使用Zobell2216E培养配方更适合大量培养和生产的需要;旋转培养能够获得更高的生物量。     

致病性哈维氏弧菌溶血素基因克隆及其检测

从山东沿海的发病鲈鱼（Lateolabrax japonicus）分离到1株致病性哈维氏弧菌（Vibrio harveyi），从该菌的染色体DNA扩增出一条长约1．4kb的特异性片段。DNA序列分析表明，该克隆片段含有完整的1254bp溶血素基因，该溶血素基因与哈维氏弧菌VIB645的溶血素基因VhhA和VhhB的相似性分别为99．0％和98．5％；与副溶血弧菌（V．parahaemolyticus）热稳定性溶血素基因（TDH）的相似性为74．5％；与拟态弧菌（V．mimicus）、创伤弧菌（V．vulnificus）、霍乱弧菌（V．chderae）磷脂酶基因的序列相似性分别为57．4％、59．2％、53．0％；与最小弧菌、创伤弧菌、霍乱弧菌、霍氏弧菌（V．hollisae）、河流弧菌（V．tguvialis）、鳗弧菌（V．anguillarum）的溶血素基因的相似性仅为19．9％～24．8％。根据溶血素基因的保守区段，设计了1对特异引物。分析表明，该引物能特异检测哈维氏弧菌。其可检测的DNA最小量为0．001ng。用该方法对55株不同来源的患病鱼分离的疑似病原菌进行检测，结果检出8株哈维氏弧菌，检出率为14．55％，从健康动物中检出数占所检弧菌数的6．25％，海洋环境为10．53％，海水养殖环境为26．53％，表明哈维氏弧菌在不同的海水环境及健康海洋动物中普遍存在，在养殖水体中的数量高于其他海水环境。     

杂色鲍哈维弧菌耐药质粒的鉴定和分析

文章对引起杂色鲍（Hallotis diversicolor）肌肉萎缩症的病原菌哈维弧菌（Vibrio harveyi）质粒上的磺胺耐药基因进行研究,结果显示,该菌株对复方新诺明完全耐药,其质粒上含有sulⅡ耐药基因。接合转化试验显示该质粒具可转移性,可使受体菌对磺胺制剂复方新诺明产生耐药性,鉴定为耐药质粒,并测定了该耐药质粒的全基因组序列,序列总长为10 940 bp,初步分析显示有7个具有一定功能的ORF框。进一步构建重组表达质粒pRSET-A-sulⅡ,表达了目的蛋白（31 kDa）。     

虾源哈维氏弧菌的致病性与生物学特性比较分析

哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)是导致养殖对虾暴发弧菌病的重要病原之一。从我国南方养殖凡纳滨对虾(Penaeus vannamei)分离、鉴定了10株哈维氏弧菌(Vh00947、Vh00949、Vh11011、Vh11014、Vh21217、Vh21218、Vh21220、Vh21229、Vh21231和Vh31487),分别肌注感染健康凡纳滨对虾后发现,菌株Vh21229致病性很弱,Vh00949其次,其它菌株毒力较强;对8种哈维氏弧菌常见毒力基因(Vh1、Vh2、Vh3、Vh4、tox S、hcp、zot和pap6)的检测显示,南方虾源哈维氏弧菌无论强弱毒株都很少携带zot、pap6、toxs和4种Vh基因(≤10%),表明这10个菌株的致病性与这7种常见毒力因子的相关度很低;hcp基因在所有菌株中均有检出,其中强毒株中检出率较高(50%),在较弱毒株(Vh00949)中也存在,表明hcp基因与这些菌株的致病性密切相关,但不是决定性因子。因此,这10株南方虾源哈维氏弧菌菌株的致病性差异应由这8种常见毒力因子以外的未知或未检测到的因子所决定。生化特征分析显示,所有菌株中只有弱毒株Vh21229不能利用D-甘露糖、蔗糖、D-海藻糖,而且只有其赖氨酸脱羧酶反应至阳性,而其它菌株均为阴性,推测导致哈维氏弧菌菌株生化特性改变的某种因子可能对菌株的致病性也产生了影响。药敏实验表明,10株哈维氏弧菌均对环丙沙星、氯霉素、恩诺沙星、美罗培南、头孢曲松、多西环素、头孢吡肟、诺氟沙星敏感,而对氨苄西林耐受性强,表明在虾类养殖过程中应当严格规范和控制抗菌药物尤其是青霉素类药物的使用。     

大蒜对印度明对虾黑鳃病原耐药菌株哈维氏弧菌抗菌活性的研究

本研究针对大蒜提取物对印度明对虾(Fenneropenaeus indicus)黑腮病病原多重耐药哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)体外和体内的抗菌活性进行了评价。先利用市售的几种抗生素记录致病性哈维氏弧菌的抗菌谱。然后,利用琼脂扩散法来研究大蒜对哈维氏弧菌的抗菌活性。将哈维氏弧菌接种在琼脂平板上,对每种大蒜提取物(鲜榨大蒜提取物—FSGE,冻干大蒜提取物—FDGE以及用甲醇提取的大蒜提取物—MGE)设计三种不同的浓度。结果表明,鲜榨大蒜提取物对哈维氏弧菌的抑菌活性明显优于冻干大蒜提取物和用甲醇提取的大蒜提取物。本研究分别在对虾基础饲料中添加0%(对照)、0.5%和1%浓度梯度的大蒜来评价大蒜治疗感染哈维氏弧菌的对虾的效果。结果表明,综合大蒜提取物的短期和长期防治(1%含量)的效果分析,对虾累积死亡率降低了75%。本研究探讨了鲜榨大蒜提取物替代抗生素在印度明对虾饲养防病上的优点。     

哈维氏弧菌的分子遗传多样性研究

运用RAPD分型和BOX分型分子方法研究患病的海水鱼类体内和海水环境的101株哈维氏弧菌的分子遗传多样性。结果显示,从10个RAPD引物中发现只有PM2引物的分辨率和重复性较好,出现15条不同RAPD条带,在相似度65%下,101株哈维氏弧菌可以分为18种不同型;BOX分型出现20条不同的条带,在相似度为40%的情况下,可以把101株哈维式弧菌分15种不同的型;综合RAPD PM2和BOX分型,发现在相似度50%下,101株哈维氏弧菌可分18种型。综合RAPD和BOX分型数据可以很好地克服各自的缺点,得到更加准确的分型结果。     

泥蚶致病性哈维氏弧菌的分离与鉴定

自浙江发病泥蚶中分离到1株优势菌J14,采用人工感染试验、形态及生化特征分析、16S rRNA基因序列测定和药敏试验等方法,对该菌株进行鉴定并分析其相关特性。结果表明,菌株J14感染泥蚶的96 h半致死密度为7.74×10⁶个/mL,对泥蚶具有较强的致病性。菌株J14为革兰氏阴性细菌,经硫代硫酸盐柠檬酸盐胆盐蔗糖琼脂培养基分离为黄色不发光菌落,结合生理生化特征和16S rRNA基因序列分析,鉴定该菌株为哈维氏弧菌。毒力基因的携带情况显示,哈维氏弧菌J14可检测到群体效应调节基因luxR,毒力调控基因toxR,溶血素基因vhhA、vhhB,毒力相关基因toxS,几丁质酶基因chiA,丝氨酸蛋白酶基因7种毒力基因。药敏结果显示,哈维氏弧菌J14对青霉素、氨苄西林、阿莫西林、杆菌肽4种药物不敏感,对红霉素、多黏菌素B中度敏感,对庆大霉素、卡那霉素、复方新诺明等26种常用抗生素药物敏感。研究结果可为泥蚶弧菌病的防治提供参考资料。     

哈维氏弧菌Bfr蛋白的原核表达及免疫特性研究

Bfr(Bacterioferritin)是细菌主要的储铁蛋白和重要的免疫相关蛋白.为探索哈维氏弧菌Vibrio harveyi Bfr蛋白的免疫特性,本研究利用大肠杆菌Escherichia coli表达系统表达哈维氏弧菌Bfr重组蛋白(rBfr),并进行纯化,进一步通过动物模型评估rBfr的免疫特性.结果显示,成功...     

哈维氏弧菌胶体金免疫层析试纸条的制备

用18~20nm胶体金标记抗哈维氏弧菌Vibrio harveyi抗体并制备金标垫,分别将羊抗兔Ig G和纯化后的抗哈维氏弧菌抗体包被于NC膜上作为质控线和检测线,组装制作了哈维氏弧菌胶体金免疫层析试纸条,优化了该试纸条的制作条件,测试了其性能。结果表明:所制备的哈维氏弧菌免疫层析试纸条具有较好的特异性,与费尼斯弧菌Vibrio furnissii、维氏气单胞菌Aeromonas veronii、美人鱼发光杆菌Photobacterium damselae、类志贺邻单胞菌Plesiomonas Shigelloides、鱼肠道弧菌Vibrio ichthyoenteri、鳗利斯顿氏菌Listonella anguillarum、迟缓爱德华氏菌Edwardsiella tarda、海豚链球菌Streptococcus iniae、嗜水气单胞菌Aeromonas Hydrophila等9种常见水产病原菌无明显交叉反应,检测灵敏度为3×105CFU/m L,5~10min即可得出检测结果,具有快速、简便、特异性强和适应基层推广应用等优点,可用于养殖鱼类病原哈维氏弧菌的现场检测。     

杂色鲍哈维弧茵耐药质粒的鉴定和分析

文章对引起杂色鲍（Hallotis diversicolor）肌肉萎缩症的病原菌哈维弧菌（Vibrio harveyi）质粒上的磺胺耐药基因进行研究,结果显示,该菌株对复方新诺明完全耐药,其质粒上含有sulⅡ耐药基因。接合转化试验显示该质粒具可转移性,可使受体菌对磺胺制剂复方新诺明产生耐药性,鉴定为耐药质粒,并测定了该耐药质粒的全基因组序列,序列总长为10 940 bp,初步分析显示有7个具有一定功能的ORF框。进一步构建重组表达质粒pR-SET-A-sulⅡ,表达了目的蛋白（31 kDa）。     

豹纹鳃棘鲈抗哈维氏弧菌遗传参数分析

哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)是引起豹纹鳃棘鲈(Plectropomus leopardus)患“烂身病”的主要致病菌,每年6―8月发病率极高,严重影响了该品种养殖业的可持续发展。因此,培育抗病良种是豹纹鳃棘鲈养殖业的迫切需求。为评估豹纹鳃棘鲈抗哈维氏弧菌遗传参数,本研究基于高密度单核苷酸多态性位点构建的基因组亲缘关系矩阵,使用4种模型(BLM、BTM、LLM和LTM)拟合了2种抗病表型(测试日性状,TDS;二元死亡存活性状,TS),并用约束最大似然法(REML)估算方差组分。经分析,豹纹鳃棘鲈抗哈维氏弧菌遗传力为0.182~0.486,属中高遗传力性状,加性遗传方差为0.071~0.262。其中,利用线性模型(BLM和LLM)估算的遗传力分别为0.382和0.476,利用阈值模型(BTM和LTM)估算的遗传力分别为0.182和0.207。表明可以通过遗传选育提高豹纹鳃棘鲈抗弧菌能力。对不同模型估算的基因组估算育种值(GEBV)进行相关性分析,不同模型拟合同种抗病表型时,GEBV之间相关系数> 0.9,属于高强度正相关关系,表明使用同种表型定义时,阈值或线性模型对GEBV排名影响很小。对不同模型估算的GEBV与不同表型进行相关性分析的结果显示,纵向模型(LLM和LTM)估算的GEBV与表型TS之间的相关系数高于横截面模型(BLM和BTM),说明表型TDS可能比表型TS更适合作为抗病表型。此外,在线性模型中,使用表型TDS和表型TS估算的GEBV之间的相关系数< 0.85,说明采用2种表型定义下估计的豹纹鳃棘鲈抗哈维弧菌GEBV排名不一致。但基于表型TDS估算的GEBV与表型TS之间的相关系数较强(0.824),表明使用表型TDS和纵向模型(LLM)估算豹纹鳃棘鲈抗哈维氏弧菌遗传参数更有优势。本研究补充了豹纹鳃棘鲈抗哈维氏弧菌遗传参数研究,为豹纹鳃棘鲈抗哈维氏弧菌良种选育提供了参考。     

花鲈弧菌病病原菌（哈维氏弧菌）的分离与鉴定

1999年4－5月，山东省青岛市胶南海区网箱养殖场花鲈（Lateolabrax japonicus)幼鱼发生暴发性传染病，死亡率达50％。从具有明显症状的病鱼的病灶组织分离到1株优势菌SF－1，经人工感染和从人工感染发病的花鲈再分离的SF－3菌株的再感染试验结果表明，所分离的菌株为此次花钙烂层病的致病菌，经形态、生理生化等64项特征指标鉴定，SF－1和SF－3均为哈维氏弧菌（Vibrio harveyi)。药敏试验结果表明，头孢噻肟，头孢三嗪，头孢孟多，呋喃妥因，氯霉素,氧哌嗪青霉素，磺胺类，复方磺胺、三甲氧苄氨嘧啶，多粘菌素E等10种药物对该菌株有明显的抑制作用。     

哈维氏弧菌外膜蛋白OmpK基因的克隆及原核表达

根据哈维氏弧菌外膜蛋白OmpK的基因序列设计一对引物,应用聚合酶链式反应（PCR）方法,从分离自患病大黄鱼的哈维氏弧菌基因组中扩增获得一段约800bp的序列。将其克隆到pGEM-Teasy载体,测序结果证明该序列是哈维氏弧菌外膜蛋白OmpK基因。用PCR方法去除其信号肽序列,定向克隆到原核表达载体pGEX-4T-2构建重组表达质粒pGEX-4T-OmpK。IPTG诱导后能够在大肠杆菌BL21中高效表达分子量约为53kD的GST-OmpK融合蛋白。用纯化后的融合蛋白免疫新西兰兔获得了高效价的抗血清。Western-blotting分析表明,它与从哈维氏弧菌中提取的约27kD的外膜蛋白能够发生特异反应,提示外膜蛋白OmpK可能是哈维氏弧菌的重要保护性抗原之一。     

斜带石斑鱼病原菌(哈维氏弧菌)的分离与鉴定

从患病斜带石斑鱼 (Epinepheluscoioides)肝脏组织分离到EcGY0 2 0 4 0 1菌株 ,经人工感染、回归感染实验证实为致病菌。通过API系统和菌体常规形态特征、培养特性和生理生化反应指标测定以及 16SrRNA测序分析等综合鉴定 ,Ec GY0 2 0 4 0 1菌株为弧菌属哈维氏弧菌 (Vibrioharveyi) ,其半致死剂量LD50 为 2 .7× 10 6CFU/g鱼体重。药敏试验结果表明 ,EcGY0 2 0 4 0 1菌株对利福平、四环素、喹诺酮类及头孢曲松等抗生素较为敏感     

哈维氏弧菌感染的杂色鲍全组织均一化cDNA文库的构建

提取了哈维氏弧菌（Vibrio harveryi）感染的杂色鲍（Haliotis diversicolorReeve）总RNA,采用SMART方法合成双链cDNA,并用双链特异核酸酶进行均一化处理。割取0.5~1.0和1.0~3.0kb的片段分别连接pDNR-LIB并转化大肠杆菌（Esherichia coli）,最终构建2种片段大小的杂色鲍全组织均一化cDNA文库。2文库库容均在2.5×105cfu.mL-1左右,PCR检测阳性重组率为100%。随机挑取200个克隆测序,获得高质量EST序列174条。组装后得到149条Unigenes,冗余率为14.37%。序列注释结果表明,有39条Unigene序列与已知基因高度相似。综上所述,文章所建cDNA文库质量良好,可以满足后续研究工作的需要。     

抗哈维氏弧菌、溶藻弧菌与副溶血弧菌三联卵黄抗体的制备及体外抑菌效果的研究

为研究三联特异性卵黄抗体对哈维氏弧菌、溶藻弧菌与副溶血弧菌的体外抑菌效果,通过制备哈维氏弧菌、溶藻弧菌与副溶血弧菌三联灭活疫苗,免疫蛋鸡。收集鸡蛋制备卵黄抗体并检测其效价、纯度和特异性。通过免疫荧光、扫描电镜和体外抑菌实验初步探究其制备的三联特异性卵黄抗体对三种弧菌的体外抑菌效果。结果显示,ELISA检测特异性卵黄抗体效价高达1:51200,并维持5周;SDS-PAGE对分离纯化的卵黄抗体分析显示,随着纯化步骤的进行,卵黄抗体中的蛋白杂带逐渐减少,纯度变高。免疫荧光和免疫印迹实验表明,特异性卵黄抗体与抗原的结合具有较高的特异性。扫描电镜进一步观察发现,相比非特异性卵黄抗体,特异性卵黄抗体处理过的弧菌,菌体互相黏附在一起,菌体细胞表面粗糙,细胞壁破损。在体外抑菌实验中,特异性卵黄抗体对弧菌具有明显的抑制效果,且抑制作用呈现剂量依赖性。综上所述,本研究制备的三联特异性卵黄抗体能够与哈维氏弧菌、溶藻弧菌和副溶血弧菌发生特异性结合,通过体外实验发现,卵黄抗体通过凝集和黏附,破坏菌体细胞的完整性,从而发挥抑菌作用。