应用蜜蜂营养杂交技术培育抗螨蜂种

 【目的】大蜂螨是中国饲养的西方蜜蜂最重要病虫害之一,多年来药物防治蜂螨,一方面蜜蜂对药物产生了很强的抗药性,另一方面治螨药物在一定程度上会污染蜂产品。本研究通过蜜蜂营养杂交,探讨培育抗螨蜂种的可行性。【方法】采用中华蜜蜂的蜂王浆饲喂意大利蜜蜂工蜂小幼虫,然后测定营养杂交后代工蜂形态指标、苹果酸脱氢酶Ⅱ的基因型频率和基因频率、蜂群遗传相似系数以及抗螨力。【结果】营养杂交子后代工蜂的吻长、右前翅面积、腹部第3+4背板总长、第4背板突间距、第6腹节面积、蜡镜面积6个指标与亲本工蜂之间存在显著差异,但肘脉指数、跗节指数和翅钩数与亲本差异不显著;营养杂交子后代工蜂的苹果酸脱氢酶Ⅱ基因型频率和基因频率存在一定的变异;营养杂交子后代之间遗传相似系数明显高于亲本意大利蜜蜂;营养杂交子后代的工蜂抗螨力显著高于亲本意大利蜜蜂。【结论】通过蜜蜂营养杂交,可以改变营养杂交后代工蜂形态、生理生化、分子遗传相似性及抗螨力等特性。蜜蜂营养杂交可成为蜜蜂育种一条新途径。     

中蜂与意蜂营养杂交后代随机扩增多态DNA研究

以中华蜜蜂(Apis cerdna cerana Fabricius)和意大利蜜蜂(Apis mellifera ligustica Spinola)为实验材料,进行中华蜜蜂与意大利蜜蜂营养杂交,然后运用随机扩增多态DNA(RAPD)技术检测亲本和营养杂交后代的DNA多态性.结果表明:经过营养杂交,亲本蜜蜂与营养杂交子代的遗传相似系数变小,中华蜜蜂和意大利蜜蜂的特有DNA条带发生了转移.说明通过营养杂交,基因可能发生了转移.     

西方蜜蜂6个亚种正反交苹果酸脱氢酶Ⅱ基因的遗传差异

研究了西方蜜蜂(Apis mellifera L.)的浙农大1号意蜂、东北黑蜂、卡尼鄂拉蜂、喀尔巴阡蜂、高加索蜂和乌克兰蜂6个亚种及浙农大1号意蜂与其它5个亚种正反交杂交组合苹果酸脱氢酶Ⅱ的基因型频率、基因频率和杂合纯合度，并分析了杂交后代与亲本的关系。浙农大1号意蜂、喀尔巴阡蜂、高加索蜂的纯合度较高，而东北黑蜂、卡尼鄂拉蜂和乌克兰蜂是高度杂合的亚种。杂交子代与母本的差异小于与父本的差异。正反交杂交组合基因型频率、基因频率的差异程度与亲本的杂合度有关。     

蜜蜂性比的行为调控机制

以中华蜜蜂(Apis cerana ceranaFabric ius)和意大利蜜蜂(Apis m ellifera ligusticaSp inola)为试验材料,通过蜂群在无巢脾时建造巢脾和在有巢脾时建造巢脾试验,发现工蜂建造的巢房比例和蜜蜂性比值基本一致;通过标记和统计巢房中卵数量变化,观察巢房中卵染色体的单双倍体特性,以及计算巢房中的卵存活率及产卵准确率,发现工蜂能及时清除巢房中的卵,这种行为是工蜂调控群内蜜蜂性比值的有效措施.结果表明,工蜂可以通过建造巢脾和哺育行为来调控群内的蜜蜂性比值.     

中华蜜蜂α-葡萄糖苷酶基因片段的克隆与序列分析

以意大利蜜蜂α-葡萄糖苷酶基因(GenBank登录号NM_001040259)的保守区设计引物,从中华蜜蜂(Apis cerana cerana)工蜂中提取总RNA,逆转录成cDNA,进行RT-PCR,将扩增产物克隆到pGEM-T easy载体上,导入大肠杆菌JMl09,阳性克隆经双酶切鉴定后测序,将测序得到的中华蜜蜂α-葡萄糖苷酶(alpha-glucosi-dase)基因与已知的意大利蜜蜂核苷酸序列比较,同源性为91.31%.氨基酸序列与意大利蜜蜂、黑腹果蝇、埃及斑蚊、冈比亚按蚊、印度蜜蜂、小蜜蜂、非洲爪蟾、日本蜜蜂、赤拟谷盗、尖音库蚊的同源性分别为90.83%、48.1l%,47.28%、45.74%、42.25%、41.21%、38.10%、37.93%、35.56%、33.88%.首次从中华蜜蜂工蜂中成功扩增到长度为745 bp、编码α-葡萄糖苷酶(alpha-glucosidase)的基因片段(已提交GenBank,登录号为EF638842).     

中蜂与意蜂营养杂交对意蜂抗螨力的影响研究

以中华蜜蜂（Apis cerara cerana Fabricius）和意大利蜜蜂（Apis mellifera ligustica Spinola）为实验材料,用中华蜜蜂蜂王浆饲喂意大利蜜蜂幼虫,进行中华蜜蜂与意大利蜜蜂营养杂交,然后检测营养杂交亲本意蜂蜂群、杂交子1代意蜂蜂群和杂交子2代意蜂蜂群的蜂螨自然寄生率;同时采用人为转接蜂螨技术,检测实验蜂群的抗螨力。结果表明：亲本意蜂群与营养杂交子代抗螨力都存在显著差异（P〈0．01）,营养杂交子代的抗螨力得到显著提高;但营养杂交子1代和营养杂交子2代之间差异不显著（P〉0.05）。     

重庆彭水县中华蜜蜂形态指标测定及比较研究

采集重庆彭水县中华蜜蜂(Apis cerana cerana)主要栖息区内18个乡镇的蜜蜂样本,对工蜂吻长、前翅长等6项主要形态指标进行测定,并将彭水县中华蜜蜂形态指标数据与湖北、江西等17地已报道的中华蜜蜂形态指标进行比较.结果显示,彭水县中华蜜蜂的翅长、翅宽、T3+T4背板长平均值处于中上水平,暗示其采集能力和花蜜...     

东方蜜蜂研究——重新评价中国阿坝地理种群

杨冠煌等(1986)发表蜜蜂阿坝亚种Apis cerana abansis,其亚种学名并没有拉丁化,应为Apis cerana abaensis,因多种原因未得到认可,但形态测定和分子数据分析认可中国阿坝地理种群Aba cerana。笔者介绍蜜蜂种下分类时,测评了38个形态学指标的测量方法、阿坝地理种群研究历史和背景、青藏高原分化出阿坝地理种群的环境条件,以及该种群个体形态特征、生物学和分布;中国是世界东方蜜蜂多样性热点地区之一,提出了中国东方蜜蜂(工蜂)中华亚种Apis cerana cerana、印度亚种Apis cerana indica、海南地理种群Hainan cerana及阿坝地理种群Aba cerana的形态鉴定表,肯定中国东方蜜蜂的多样性;从中国蜂业生产实际出发,首次较好地解决了东方蜜蜂种和种下阶元(亚种和地理种群)的关系,提出保护东方蜜蜂阿坝地理种群的措施。     

中华蜜蜂蜂毒蛋白酶基因cDNA片段的克隆及序列分析

为从中华蜜蜂蜂毒中扩增蛋白酶(Protease)基因,根据意大利蜜蜂蜂毒蛋白酶基因(GenBank登录号NM_001011584)的保守区设计引物,从中华蜜蜂(Apis cerana cerana)工蜂毒腺中快速抽提总RNA,将从毒腺中扩增出的产物克隆到pGEM-T easy 载体上,导入大肠杆菌JM109,阳性克隆经双酶切鉴定后测序,将测序得到的中华蜜蜂蛋白酶基因与已知的意大利蜜蜂核苷酸序列比较,同源性为95.22%.氨基酸序列分别与意大利蜜蜂、玉米螟、胡蜂、冈比亚按蚊、棉铃象甲虫、埃及斑蚊、热带爪蟾、棕尾别麻蝇、广盐螯虾、亚马逊蝮蛇进行同源性比较,同源性分别为91.71%、46.70%、41.94%、41.21%、39.56%、38.38%、37.35%、36.17%、34.24%、28.49%.本试验首次成功从中华蜜蜂工蜂毒腺中扩增到长度为545 bp、编码蛋白酶的基因片段, 所得序列已提交GenBank,登录号为:EF547156,这为以后克隆该基因全长序列以及利用基因工程技术进行蜂毒产业化开发奠定一定的基础.     

中华蜜蜂群内工蜂监督研究

以中华蜜蜂(Apis cerana cerana)为实验材料,对处女蜂王分别进行单雄和双雄人工授精,并以自然交尾作为多雄交配对照。然后用标准的方法检测各蜂群对蜂王产的未受精卵(QUG)和工蜂产的未受精卵(WUG)的监督效果,结果表明:在自然交尾、双雄授精或单雄授精3种蜂群中,都明显存在工蜂监督现象。     

东方蜜蜂与西方蜜蜂酯酶同工酶的比较研究

酯酶（esterase）是一组多态性很高的同工酶，常用于昆虫种属鉴定和遗传变异研究。本试验采用薄层聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳（IEF-PAGE）技术，分析了浙农大Ⅰ号意蜂（A.m. lingustica）、东北黑蜂（A.m.ssp）和卡尼鄂拉蜂（A.m.carnica）等西方蜜蜂与中华蜜蜂（A.cerana cermama）酯酶同工酶及蜜蜂不同发育阶段酯酶同工酶的变化，以便为酯酶同工酶在蜜蜂遗传变异、种属鉴定及品种选育研究中的应用，提供基础资料。 　　1　材料与方法 　　1.1　材　料　浙农大Ⅰ号意蜂和中华蜜蜂来自浙江大学实验蜂场，东北黑蜂和卡尼鄂拉蜂来自吉林省蜜蜂研究所种蜂场。 　　1.2　方　法　每种蜂各取外勤蜂、内勤蜂和幼蜂20只，剪取头部，以1∶2（W/V）加入提取液, 在1.5 mL Eppendrof 管中，用玻棒研磨（冰浴中），离心（4 ℃，12 000 r/min,10 min）,取上清用于电泳。参照Nunamaher等的方法，用IEF-PAGE技术在LKB多相电泳系统中检测酯酶同工酶，酶活性染色液为0.1 mol/L pH6.5的磷酸缓冲液，含33.33%α-乙酸萘酯，33.33%β-乙酸萘酯，66.67%坚牢兰RR。……     

中意蜂混合饲养对意蜂蜂螨寄生率的影响

选取4群群势相当的意大利蜂群(Apis mellifera ligustica),测定其蜂螨寄生率.然后在其中两群蜂中各加入一块带封盖子脾的中华蜜蜂(Apis cerana cerana)巢脾,使中意蜂合群饲养,30 d后再次测定4群蜂的蜂螨寄生率.结果表明:与对照组相比,加入中蜂子脾的两群蜂的蜂螨寄生率显著(P<0.05)或者极显著(P<0.01)下降.这说明往意蜂群中加入中蜂封盖子脾,可以提高意蜂蜂群的抗螨力.     

中蜂与意蜂营养杂交对意蜂抗螨性及卫生行为能力的影响

通过人工添加中华蜜蜂王浆来培育江山2号与法国意蜂的杂交蜂王,并测定江山2号、中华蜜蜂、营养杂交子一代及子四代抗螨性能和卫生行为能力指标.结果表明:营养杂交蜂群抗螨性均显著高于亲本江山2号,工蜂卫生行为能力也显著高于江山2号,且随营养杂交代数的增加,蜂群的抗螨性也显著增强.     

亚洲部分地区东方蜜蜂mtDNA多态性研究

 就云南省7个不同样点共7群东方蜜蜂蜂群开展mtDNA内切酶位点测试和分析研究,并与菲律宾的东方蜜蜂作对比分析。内切酶DraI分析7个蜂群,共发现4个内切酶位点;云南东方蜜蜂mtDNA的tRNAleu-COII基因的序列没有长度多态性,EcoRI内切酶位点共有4个,与菲律宾的吕宋岛的东方蜜蜂属于同一单倍型。另外,对来自尼泊尔、泰国、越南、老挝以及我国北京、云南等地的共13群蜜蜂mtDNA COII基因的420个碱基对进行测序分析,发现13群东方蜜蜂分析的420个碱基序列里,位点变异从0个到5个不等,变异率从0到1.19％. 用邻接法(neighbor-joining)构建的分子系统树可以看出分枝树主要分为两个类群:高纬度或高海拔的蜂群为一个类群,它们主要来自撒营盘（2）（China 4）、丽江(China 7)、北京(1)（China 1）、尼泊尔（Nepal）、北京（2）（China 2）、河口（1）（China 8）和越南（2）（Vietnam 2）。另一个类群的主要来自低纬度或低海拔的蜂群,它们主要来自撒营盘（1）（China 3）、景洪（China 5）、越南（1）（Vietnam 1）、泰国（Thailand）、河口(2) (China 6)和老挝(Laos)。该实验为我国东方蜜蜂资源的保护和开发研究提供了重要的信息和手段。     

中蜂与意蜂营养杂交对其后代抗农药性能的影响

通过人工添加中华蜜蜂王浆来培育江山2号意蜂与法国意蜂的杂交蜂王,并检测了敌敌畏对江山2号意蜂、高加索蜜蜂、营养杂交子一代(F1)和子四代(F4)群势的影响,同时检测了江山2号意蜂、中华蜜蜂、F1代和F4代工蜂对敌百虫、啶虫脒和桃病康的抗性.结果表明:营养杂交意蜂敌敌畏中毒后群势削减率显著低于江山2号意蜂与高加索蜜蜂;营...     

中蜂与意蜂王浆中DNA的RAPD分析

以中华蜜蜂(Apis cerana cerana)和意大利蜜蜂(Apis mellifera ligustica)王浆为材料,用改进的苯酚-氯仿法提取蜂王浆中的DNA,利用35个随机引物对提取出来的DNA进行RAPD扩增,结果表明:有6个随机引物能扩增出谱带,其中1个引物对所有王浆DNA样品的扩增结果完全相同,5个引物出现多态性。共检测到32条扩增谱带,其中24条为多态带。     

中蜂与意蜂营养杂交对工蜂形态指标的影响

测定了中蜂与意蜂营养杂交的亲本中蜂、亲本意蜂、以及连续3代营养杂交后代意蜂和连续3代营养杂交后代中蜂的工蜂11个形态指标,测定的数据用SPSS统计软件分析。结果表明:营养杂交后代工蜂的吻长(A)、右前翅面积(B)、腹部第3+4背板总长(D)、第4背板突间距(E)、第6腹节面积(F)和蜡镜面积(G)6个指标与亲本工蜂之间存在极显著的差异(P<0.01);营养杂交后代工蜂的肘脉指数(C)、跗节指数(H)、∠B4(J)、∠I10、(K)和翅钩数(I)与亲本工蜂之间差异不显著(P>0.05);营养杂交各代工蜂以上11个形态指标之间差异不显著。     

意蜂来源的微孢子虫感染对中蜂工蜂血淋巴蛋白的影响

为探讨微孢子虫交叉感染对中蜂工蜂血淋巴蛋白的影响,用意蜂来源的微孢子虫经口侵染不同日龄的中蜂和意蜂工蜂,在(30±0.5)℃、60%-80%RH的温箱内,用蔗糖液隔离饲养8 d后,提取工蜂血淋巴,测量其蛋白含量,并对其进行了SDS-PAGE.结果表明:(1)感染微孢子虫的8日龄中蜂及意蜂工蜂的血淋巴蛋白含量均比对照组高;而11、14日龄中蜂工蜂血淋巴蛋白含量均比对照组低.(2)无论感染与否,8日龄中蜂工蜂血淋巴蛋白含量均比同龄意蜂工蜂的高.(3)SDS-PAGE图谱显示,微孢子虫感染主要造成一些蛋白量上的差异.其中47、38、35 ku蛋白可能是8日龄意蜂工蜂感染微孢子虫后出现的特征条带.