杭州市规模化养殖场湖羊芽囊原虫的PCR检测与基因亚型鉴定

[目的]掌握杭州市规模化养殖场中湖羊芽囊原虫的感染情况和基因亚型分布。[方法]从杭州市4个规模化养殖场采集167份湖羊的新鲜粪便样本,提取粪便全基因组DNA;基于小亚基核糖体RNA(SSU rRNA)基因,对粪便DNA样本进行PCR扩增,对阳性产物进行测序;经序列比对鉴定芽囊原虫基因亚型,构建系统进化树解析其遗传进化关系。[结果]167份样本中,检测出芽囊原虫阳性样本18份,感染率为10.78%(18/167);3个养殖场呈芽囊原虫阳性,感染率依次为21.43%(3/14)、21.21%(14/66)和2.13%(1/47),1个养殖场未检测出芽囊原虫;不同养殖场之间湖羊芽囊原虫的感染率存在极显著（P<0.01）差异。鉴定出7个芽囊原虫基因亚型,分别为ST7(n=1)、ST10(n=9)、ST21(n=3)、ST23(n=1)、ST24(n=2)、ST26(n=1)、ST30(n=1),以ST10亚型为优势感染亚型（9/18,50.00%）;基于芽囊原虫SSU rRNA基因的系统进化树分析发现,6种基因亚型序列聚类形成1个大群,其中ST10和ST23聚类形成亚群,ST21、ST2...     

西双版纳野生猴群芽囊原虫感染的分子调查

为了解西双版纳州原始森林公园野生猴群芽囊原虫的感染情况及其基因型,对采集的30份猴粪样,利用套式PCR法扩增芽囊原虫核糖体小亚基RNA(SSU rRNA)基因,对阳性产物进行测序比对,利用MEGA 6.0软件构建遗传系统进化树。结果显示：芽囊原虫检出率为40.00%(12/30);扩增的SSU rRNA基因序列长度为1 100 bp,基因亚型鉴定为ST1和ST8,有4份样品比对结果显示为人芽囊原虫,其序列与人芽囊原虫一致性达99.61%。研究结果提示,加强对西双版纳原始森林公园野生猴群芽囊原虫的防控,确保猴群健康,具有重要公共卫生意义。     

广东省部分奶牛场芽囊原虫感染情况及亚型分析

芽囊原虫是一种常见的寄生于人类和多种动物肠道的人兽共患单细胞病原体,可引起人和动物的腹泻和肠痉挛等胃肠道疾病。为了解广东省部分地区奶牛芽囊原虫的感染情况及人兽共患特性,基于核糖体小亚基(SSU rRNA)基因位点对广东地区4个奶牛场的479份粪便样品进行PCR扩增。结果显示,芽囊原虫总感染率为1.88%(9/479),主要见于断奶前和断奶后犊牛,其感染率分别为3.38%(7/207)和1.61%(2/124),在育成牛和成年牛中未发现芽囊原虫感染。经种系发育分析发现在该地区共存在2种人兽共患亚型(ST3、ST5)和1种动物特异性亚型(ST10)。结果表明,广东地区奶牛芽囊原虫存在着潜在的人兽共患风险,具有重要的公共卫生学意义。     

云南省独龙牛芽囊原虫分子流行病学调查

为了了解云南省怒江州独龙牛芽囊原虫的感染情况及基因型,试验分4个季节从怒江州怒江流域(古泉村、亚左洛村、鸠门当、茨开镇)及独龙江流域(独龙江乡)5个地点采集到987份独龙牛粪便样本,基于芽囊原虫的18S rRNA基因序列设计引物,采用常规PCR方法对粪便DNA进行扩增,琼脂糖凝胶电泳后对阳性样本进行测序分析。使用Clustal X 1.83软件和BLAST程序对测得序列在GenBank上与芽囊原虫参考序列进行同源性比对,通过MEGA-X软件计算序列之间的遗传距离,采用邻接法(NJ)构建系统进化树,以SPSS 19.0软件对感染率进行统计分析。结果表明：共得到119份芽囊原虫阳性样本,与GenBank中单峰驼芽囊原虫SSU rRNA基因序列(KC148207.1)相比,同源性为97.06%～98.92%;与牛芽囊原虫SSU rRNA基因序列(KC148205.1)相比,同源性为96.86%～98.19%,鉴定出ST10、ST14两种基因亚型。独龙牛芽囊原虫的总感染率为12.06%,其中古泉村、亚左洛村、鸠门当、茨开镇、独龙江乡感染率分别为7.28%、12.30%、19.27%、12.28...     

采用Mini-Flotac和PCR方法检测圈养野生动物肠道寄生虫

为调查福建地区圈养野生动物肠道寄生虫感染情况,本研究采集福州动物园和龙岩梅花山华南虎繁育研究所动物粪便样品共70份(包含28种动物种类),采用Mini-Flotac检测方法对粪便样品进行饱和盐水漂浮法检测,同时采用基于SSU rRNA序列的PCR扩增方法对粪便样品进行芽囊原虫检测,并对获得的阳性分离株进行基因亚型分析。Mini-Flotac检测结果显示,70份样品中寄生虫阳性粪便为42份,总感染率为60.00%,感染强度(EPG或OPG值)范围为100~34 800。PCR扩增结果显示,70份样品中共检测到芽囊原虫阳性分离株10个,感染率为14.3%(10/70),阳性样品分别为猕猴、赤猴、孔雀粪便样品各1份以及梅花鹿源样品7份;进一步的基因亚型分析结果显示,扩增的10份芽囊原虫阳性样品来源于5个基因亚型,分别为ST1(1)、ST3(1)、ST6(1)、ST10(6)及ST14(1),其中ST1、ST3和ST6为人兽共患亚型,ST10和ST14为动物特异性亚型,且ST10在梅花鹿中感染普遍。研究结果提示福建圈养野生动物肠道寄生虫的感染情况较严重,且存在人兽共患基因亚型芽囊原虫风险。研究结果为福建野生动物肠道寄生虫病的防治提供了参考依据。     

我国部分地区羊芽囊原虫流行病学调查

芽囊原虫（Blastocystis spp.）是人和动物肠道中最常见的原生生物之一,能引起人和动物的肠道疾病和皮肤疾病,且有人兽共患基因亚型。为了解不同地区羊芽囊原虫的感染情况,对来自7个省、区的704份羊粪便样品,基于核糖体小亚基基因（SSU rDNA）位点进行分子流行病学调查,并首次对羊源人兽共患亚型ST3、ST4进行多位点序列分型。结果显示,芽囊原虫总感染率为13.35%（94/704）,不同地区、不同品种间感染率差异极显著。芽囊原虫序列分析共发现5个亚型（ST3、ST4、ST5、ST10和ST14）,其中,ST3、ST4和ST5为人兽共患基因亚型,MLST分析ST3为Allele 38且在2个基因位点发生了碱基突变。ST4包括Allele 42、Allele 92和Allele 94 3种等位基因。本次调查表明羊芽囊原虫感染普遍,病原存在人兽共患亚型且具遗传多样性,应给予足够重视。     

新疆南疆某规模化绵羊养殖场腹泻羔羊隐孢子虫感染情况及其分子鉴定

[目的]了解新疆南疆某规模化绵羊养殖场腹泻羔羊隐孢子虫感染情况和基因亚型分布特点。[方法]采集新疆维吾尔自治区某规模化绵羊养殖场4个品种1月龄以内腹泻羔羊新鲜粪便样本60份,使用饱和蔗糖溶液漂浮法检查隐孢子虫卵囊,进行种类初步鉴定;全部粪便样本提取基因组DNA后,基于隐孢子虫SSU rRNA基因位点和微小隐孢子虫gp60基因位点,对其进行PCR扩增、测序和序列分析,鉴定隐孢子虫种属和基因亚型,构建遗传进化树解析其分子遗传特征。[结果]经显微镜观察,发现38份样本呈隐孢子虫卵囊阳性,形态学初步鉴定为微小隐孢子虫;基于SSU rRNA基因位点,采用PCR方法检测出52份样本呈隐孢子虫阳性,感染率为86.67%(52/60),经序列比对分析,均为微小隐孢子虫;基于微小隐孢子虫gp60基因位点,PCR扩增后成功获得49条序列,经比对分析均为ⅡdA19G1基因亚型。[结论]该养殖场腹泻羔羊普遍感染微小隐孢子虫,其基因亚型均为ⅡdA19G1。调查结果为新疆南疆绵羊隐孢子虫种属鉴定与遗传进化研究提供了基础数据。     

动物园动物消化道寄生虫感染情况调查

为了解动物园动物肠道寄生虫感染情况,本试验采集了来自贵阳和北京动物园33种动物,共150份粪便样品。采用饱和盐水漂浮法和离心沉淀法富集虫卵和卵囊进行显微镜检查;基于隐孢子虫、芽囊原虫、毕氏肠微孢子虫和十二指肠贾第虫的特异性基因位点对人兽共患原虫进行PCR检测和序列比对分析。结果显示,动物园动物寄生虫总感染率为64.0%。显微镜检查出的寄生虫包括毛首线虫(20.0%)、细颈线虫(2.7%)、艾美耳球虫(14.7%)和其他线虫(25.3%)。PCR检测4种肠道原虫的感染率分别为：隐孢子虫1.3%、毕氏肠微孢子虫8.7%、十二指肠贾第虫12.0%和芽囊原虫32.0%。序列比对结果显示,存在2种隐孢子虫虫种(安氏隐孢子虫和泛在隐孢子虫);7种毕氏肠微孢子虫基因型(SC02、BEB6、Type IV、PigEBITS 7、Peru8、PtEb IX和D);2种十二指肠贾第虫基因型(B和E);8种芽囊原虫基因亚型(ST1、ST2、ST3、ST5、ST8、ST10、ST13和ST14)。结果表明,贵州和北京动物园动物肠道寄生虫感染非常普遍,并且存在多种人兽共患虫种和基因型。做好动物园寄生虫病的防控不...     

我国部分地区羊肠道隐孢子虫、毕氏肠微孢子虫和芽囊原虫的分子流行病学

为了解我国部分地区羊肠道隐孢子虫、毕氏肠微孢子虫和芽囊原虫的感染情况,采集自河南、贵州、陕西等6省区共935份羊粪便样品,基于隐孢子虫、芽囊原虫小亚基核糖体RNA基因(SSU r RNA),毕氏肠微孢子虫转录间隔序列(ITS),使用PCR方法扩增从粪便中提取DNA样本,检测隐孢子虫、毕氏肠微孢子虫和芽囊原虫的感染情况,...     

鸵鸟球虫病流行病学调查及虫种鉴定

为了解鸵鸟球虫感染情况,采用饱和蔗糖溶液漂浮法对郑州地区6个采样点共582份新鲜鸵鸟粪便样品进行了检查。结果发现阳性样品273份,感染率为46.91%,不同调查点鸵鸟感染率统计学差异极显著(P<0.01),球虫主要感染0～3月龄幼龄鸵鸟,不同年龄段统计学差异极显著(P<0.01)。鸵鸟球虫卵囊平均大小为23.85 μm×21.88 μm,卵囊形态指数为1.06,根据卵囊形态结构特征初步鉴定为鸵鸟等孢球虫(Isospora struthionis)。     

河南郑州地区奶牛源安氏隐孢子虫虫种鉴定及多位点序列分型研究

为了解河南省郑州地区奶牛隐孢子虫及安氏隐孢子虫(Cryptosporidium andersoni,C.andersoni)的亚型分布情况,本研究共采集3个奶牛场共973份奶牛新鲜粪便样品,采用显微镜检测方法进行隐孢子虫检测,对形态学鉴定的8份C.andersoni阳性样品分别基于SSU rRNA、Actin、HSP70和COWP基因位点进行虫种鉴定,基于CM-MS1、CM-MS2、CM-MS3和CM-MS16基因位点进行多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)分析。结果显示,隐孢子虫总感染率为2.77%(27/973),而且以断奶前犊牛感染率最高7.10%(12/169)。8份样品在不同基因位点均成功鉴定为C.andersoni分离株,并形成4个MLST亚型,其中A4、A4、A4、A1为优势亚型,A6、A4、A2、A1为新亚型,且不同亚型的卵囊大小具有显著差异。研究表明,河南省郑州地区奶牛隐孢子虫总体感染水平较低,但是对奶牛养殖业和牛奶产量仍然有较大影响,此外,C.andersoni存在多个MLST亚型,表明具有遗传多样性。     

进口奶牛十二指肠贾第虫感染情况及其多位点基因序列研究

为了解进口奶牛十二指肠贾第虫感染情况及其集聚体和基因亚型分布特征,作者基于SSU rRNA、tpi、gdh和bg基因位点对奶牛十二指肠贾第虫进行PCR检测。结果如下:基于SSU rRNA基因位点进行PCR检测,奶牛十二指肠贾第虫感染率为9.5%(48/507),48份阳性样品均为十二指肠贾第虫集聚体E;断奶后犊牛感染率最高(20.70%),不同年龄段奶牛十二指肠贾第虫感染率统计学差异极显著(P0.01)。基于tpi、gdh和bg基因位点分别扩增出48份阳性样品中19、28和34个,1份在tpi基因位点呈集聚体A和E混合感染。多位点基因序列分析和种系进化树分析结果显示,该场进口奶牛应为引进后感染十二指肠贾第虫。研究表明进口成年奶牛不易携带人兽共患十二指肠贾第虫,引种场奶牛传播人兽共患十二指肠贾第虫风险较低。     

河南省鸵鸟隐孢子虫流行病学调查

为了系统掌握河南地区鸵鸟隐孢子虫流行状况,于2006年8月～2007年8月对河南地区6个养殖场共829份样品应用饱和蔗糖溶液漂浮法和改良抗酸染色法进行感染情况调查,结果显示隐孢子虫总感染率为1.7%(14/829),其中,郑州某驼鸟场的感染率2.8%(14/506),其他养殖场未发现隐孢子虫感染.所查到的14份隐孢子虫阳性样品来自20～40日龄鸵鸟,表明幼龄鸵鸟更容易感染隐孢子虫.鸵鸟隐孢子虫卵囊大小为4.2～6.0 μm×4.5～5.0 μm,平均5.56 μm×4.48 μm,卵囊形状指数(L/W )为1.24(n=100),根据卵囊形态结构特征初步鉴定为贝氏隐孢子虫(Cryptosporidium baileyi).     

藏香猪毕氏肠微孢子虫感染情况和基因分型

采集了青海省和陕西省部分地区共计450份藏香猪新鲜粪便样品,基于小亚基核糖体RNA基因(small-subunit ribosomal RNA,SSU rRNA)的巢式PCR检测样品中毕氏肠微孢子虫(Enterocytozoon bieneusi)的感染情况,并分析其遗传多样性。结果显示,218份样品感染了毕氏肠微孢子虫,总感染率为48.4%(218/450);青海省所调查藏香猪的毕氏肠微孢子虫感染率为65.8%(154/234),显著高于陕西省的感染率29.6%(64/216)(P0.001);4个年龄段间藏香猪毕氏肠微孢子虫感染率差异显著(P0.001),其中哺乳仔猪感染率最高(92.7%),而成年猪感染率最低(9.2%)。序列分析发现,藏香猪存在5个SSU rRNA基因型(Type 1～Type 5),其中Type 1为优势基因型。对218份毕氏肠微孢子虫阳性分离株的多位点序列分型发现,分别有59,26,9和99份样品在MS1、MS3、MS4和MS7基因位点成功扩增,呈现18,4,4和4种单倍型,基于MS1、MS3和MS4等3个基因位点共形成6种多位点基因型(multi-locus genotypes,MLGs)。     

圈养孔雀禽流感H5亚型免疫抗体监测与分析

为了解云南边境及昆明某孔雀养殖园的孔雀禽流感H5亚型的免疫接种效果,从云南边境及昆明某孔雀养殖园共随机采集303份血清,试验采用HI试验方法对血清样本进行禽流感H5免疫抗体检测。结果表明:303份孔雀血清中禽流感H5亚型免疫抗体的平均合格率为43.23%(131/303),其中边境地区某孔雀养殖园200份样品,禽流感H5亚型免疫抗体的合格率为20.50%(41/200),昆明某孔雀养殖园103份样品,禽流感H5亚型免疫抗体的合格率为87.38%(90/103);其中绿孔雀血清中的禽流感H5亚型免疫抗体的合格率为29.65%(67/226),蓝孔雀血清中的禽流感H5亚型免疫抗体的合格率为83.12%(64/77)。昆明某孔雀养殖园的孔雀免疫抗体的合格率高于边境地区某孔雀养殖园的孔雀免疫抗体的合格率;40月龄孔雀免疫抗体合格率﹥5月龄孔雀免疫抗体合格率﹥7月龄孔雀免疫抗体合格率。     

洛阳地区宠物犬隐孢子虫病分子流行病学调查

为了解河南省洛阳市宠物犬感染隐孢子虫情况,试验采集宠物医院、宠物养殖场和宠物店的犬只粪便样品362份,其中<3月龄犬只粪便样品93份,4～6月龄犬只粪便样品103份,6月龄～1岁犬只粪便样品71份,>1岁犬只粪便样品95份。对采集的粪便样品提取DNA,设计隐孢子虫SSU rRNA基因引物,对DNA样品进行巢氏PCR扩增。PCR扩增得到的阳性产物测序后进行同源性分析及遗传进化分析。结果表明：宠物犬隐孢子虫总感染率为4.42%,其中宠物店犬的感染率最高,为8.16%,宠物医院、宠物犬养殖场和宠物店间隐孢子虫感染率差异不显著(χ²=1.88,P>0.05);<3月龄犬的感染率为9.68%,显著高于其他年龄群(1.05%～3.88%,χ²=9.14,P<0.05);16份样品SSU rRNA序列与国内分离于动物及人体的犬隐孢子虫核苷酸相似性为97.4%～100%,其中与河南省犬源分离株(登录号EU754832)、广东省人源分离株(登录号KC734571)和犬源分离株(登录号MN696800)的核苷酸相似性达100%;16...     

我国部分地区羊驼十二指肠贾第虫的PCR检测和鉴定

为了解我国羊驼十二指肠贾第虫的感染情况,收集我国9个县/市的羊驼养殖基地共484份羊驼粪便样本,提取DNA后,基于核糖体小亚基(SSU rRNA)基因位点对其进行PCR扩增.结果 表明:8份样本呈十二指肠贾第虫PCR检测阳性,总感染率为1.7％;9个养殖基地中,6个呈十二指肠贾第虫感染阳性.对成功测序的8条序列进行比对...     

塔额垦区规模化养殖肉牛肠道寄生虫感染情况调查

为了解新疆塔额垦区规模化养殖肉牛肠道寄生虫感染情况,采用饱和蔗糖溶液漂浮法对采自塔额垦区5个规模化养殖的591份肉牛新鲜粪便样本进行检查。结果显示,212份粪便样本呈肠道寄生虫感染阳性,感染率为35.9%(212/591);检出4种寄生虫虫卵/卵囊,以球虫为优势感染虫种,感染率为25.4%(150/591),莫尼茨绦虫、圆线虫和隐孢子虫感染率分别为8.3%(49/591)、1.5%(9/591)和10.8%(64/591),同时感染2种和3种寄生虫的感染率分别为8.6%(51/591)和0.8%(5/591);5个采样点中,以裕民县肉牛的肠道寄生虫感染率最高,为50.8%(64/126),和丰县肉牛的肠道寄生虫感染率最低,为26.8%(22/82),不同采样地点肉牛肠道寄生虫感染率间差异极显著（P<0.01）;以3～6月龄肉牛肠道寄生虫感染率最高,为46.3%(68/147),<3月龄、6～12月龄和>12月龄肉牛肠道寄生虫感染率分别为35.3%(53/150)、38.3%(57/149)和23.4%(34/145),不同年龄段肉牛肠道寄生虫感染率间差异极显著（P&l...     

上海市郊家鸭球虫感染情况调查研究

为了解上海市郊家鸭球虫感染状况,于2008年9～10月,从上海市郊10个鸭场采集了457份粪样,采用饱和盐水漂浮法检查球虫卵囊,并将球虫卵囊置于2.5%重铬酸钾溶液中培养至孢子化,根据形态与结构进行种类鉴定.结果发现,10个鸭场的球虫阳性率为100%,总感染率为61%(278/457).按不同月龄统计,3月龄以内感染率为100%,6,3～6月龄感染率为82%,6～9月龄感染率为70%,9～12月龄感染率为47%,12月龄以上感染率为54%.每克粪便卵囊数(OPG)为300～112 200,平均OPG为4 841.3月龄以内鸭的球虫感染强度最高,平均OPG为37 015.观测了100个孢子化卵囊,鉴定出艾美耳科球虫3属10种,其中艾美耳属(Eimeria)5种(占36%)、温扬属4种(占52%),等孢属1种(占12%).调查表明,上海市郊鸭群普遍感染球虫,3月龄以内鸭的感染率和感染强度最高,是鸭球虫病预防控制的重点;鉴定出的10种球虫中,未检出致病性强的毁灭泰泽球虫(Tyzzeria perniciosa).     

云南观赏鸵鸟园鸵鸟粪样寄生虫调查研究

为调查云南观赏鸵鸟园鸵鸟消化道寄生虫的感染状况,笔者对云南观赏鸵鸟园进行现场调研,并随机采集新鲜粪样60份,采用漂浮法和沉淀法调查其寄生虫的感染率。结果显示:鸵鸟肠道寄生虫总感染率为43.33%,其中球虫为优势感染虫种,感染率达21.67%;隐孢子虫和圆线虫感染率分别为11.67%、15.00%,混合感染为11.67%,吸虫感染率为36.67%。本研究表明,云南观赏鸵鸟园吸虫卵阳性率较高,球虫次之,隐孢子虫卵和圆线虫卵阳性率相对较低。本研究为掌握云南观赏鸵鸟园鸵鸟消化道寄生虫的感染状况和做好鸵鸟寄生虫病的防控提供了基础数据。