从下丘脑室旁核向背肩胛棕色组织发送投射的谷氨酸能神经元的鉴定

谷氨酸能神经元可抑制摄食并防止肥胖。有证据表明,在缺乏囊泡型谷氨酸转运蛋白2(VGlut2)的小鼠中,重新表达专一蛋白1(SIM1)神经元上的VGlut2可降低采食。然而,VGlut2神经元的位置和轴突投射尚不清楚。因此,本试验探寻了向背肩胛棕色脂肪组织(IBAT)发送神经元投射的上游脑区,检测了VGlut2和黑皮质素4型受体(MC4R)神经元的脑内定位,确认了胰淀素(amylin)对于VGlut2和MC4R免疫阳性神经元表达的调控作用,拓展了VGlut2神经元发送神经支配的大脑区域。结果显示,PVN^VGlut2神经元向IBAT发送密集的神经支配信号。在前皮质杏仁核(ACo)、纹状体(CPu)和海马齿状回(DG)发现VGlut2与MC4R共定位。amylin注射显著促进PVN^VGlut2::MC4R(P=0.004 8)免疫阳性神经元表达,提示VGlut2与MC4R涉及amylin的调节过程。PVN^VGlut2神经元向下丘脑腹内侧核(VMH)、外侧下丘脑(LH)、中脑导水管周围灰质(PAG)和蓝斑(LC)核团发送神经元投...     

滴度及注射方式对2型腺相关病毒载体表达效果的影响

由于腺相关病毒载体(adeno-associated viral vector,AAV)本身的侵染不具有神经元特异性,其在神经系统相关研究中会存在侵染范围不符合试验要求的情况,因此本试验拟研究不同滴度和注射方式对病毒侵染范围的影响.结果显示,在注射较高滴度的AAV2-CMV-EGFP(1.3×101 mg/L)3周后,...     

胰淀素对小鼠脑内类固醇合成急性调节蛋白表达的影响

本试验旨在定位类固醇激素合成急性调节蛋白(StAR)在小鼠脑内的分布,并对胰淀素(amylin)是否影响小鼠脑内StAR的表达进行初步研究。购买C57BL/6品系小鼠,标准环境下饲养一个月后,将获得的子一代饲养7周,选取9只体重及健康状况相近的雄性小鼠为实验动物,随机分为3组:生理盐水对照组、amylin注射组和amylin+AC187(amylin特异性抑制剂)注射组,按体重(100μg·kg~(-1))连续注射3 h后,剖取脑组织,采用免疫荧光染色技术研究StAR在脑内的分布规律,同时采用Western blot技术比较不同组中StAR的表达变化规律。试验结果表明,StAR免疫阳性信号主要表达在不定带(ZI),零星分布于蓝斑核(LC)、下丘脑腹内侧核(VMH)、中缝背核(DR)。与对照组相比,腹腔注射amylin (100μg·kg~(-1))极显著降低ZI内StAR表达量(P0.01);联合抑制剂处理组amylin+AC187能极显著抑制amylin对ZI内StAR表达的影响(P0.01)。结果表明,腹腔注射amylin可显著抑制ZI内StAR的表达,由于StAR是调节类固醇激素的限速酶,推测amylin除可调节进食及能量代谢外,还可通过调节StAR的表达影响中枢神经系统内类固醇激素的合成速率。     

NO对大鼠中脑腹侧被盖区DA神经元的调节

实验观察了微量注射 NOS抑制剂 L -NAME及微量联合注射 NO的前体 L-精氨酸( L-Arg) L-NAME于大鼠中脑腹侧被盖区( VTA)对该部位多巴胺神经元的调节。发现VTA注射 L -NAME( 1 mg/ 5μL )后 ,伏隔核( Acb)多巴胺 ( DA )代谢产物—双羟苯乙酸( DOPAC)水平升高到注射前的 1 2 2 .5% ( P <0 .0 0 1 ) ,小剂量注射 L-NAME( 0 .2 mg/ 5μL)对伏隔核 DOPAC水平无明显影响 ;同样方法联合注射 L-Arg( 3 0 0 μg/ 5μL) L-NAME( 1 mg/5μL)后 ,伏隔核 DOPAC水平无明显变化。结论 :VTA微量注射 L-NAME兴奋了该部位的DA神经元 ,而 L -Arg L -NAME联合注射 ,却不能影响 DA神经元的活动 ,说明 NO可以通过L-Arg-NOS-NO途径参与 VTA多巴胺神经元的调节     

基因重排狂犬病病毒疫苗株免疫效果的初步研究

试验探究了基因重排狂犬病病毒(RV)弱毒疫苗株能否刺激小鼠产生RV抗体免疫球蛋白G(IgG),比较了其不同免疫方式、不同免疫剂量对小鼠抗体水平的影响及安全性评估。选取28只体重(20±3)g、35日龄左右的昆明系小白鼠,随机分为7组:第1组为低剂量口服组:复合佐剂50μL+病毒液50μL;第2组为中等剂量口服组:复合佐剂150μL+病毒液150μL;第3组为高剂量口服组:复合佐剂300μL+病毒液300μL;第4组为低剂量注射组:复合佐剂50μL+病毒液50μL;第5组为中等剂量注射组:复合佐剂150μL+病毒液150μL;第6组为高剂量注射组:复合佐剂300μL+病毒液300μL;第7组为口服对照组:复合佐剂300μL+SRV9亲本毒株300μL,分别于0、7、14d进行免疫,采用ELISA定量检测试剂盒对各免疫组小鼠的血清IgG水平进行检测,免疫期结束后取各免疫组小鼠的肝脏、肾脏、肺脏、脑组织制作病理组织切片对疫苗的安全性进行评估。结果显示,各免疫组均产生了RV抗体IgG;肌内注射免疫产生的抗体速度较口服免疫快,但肌内注射免疫会导致小鼠发病死亡;600μL口服免疫组产生的抗体水平显著高于100、300μL口服免疫组及亲本毒株SRV9对照组(P<0.05),说明适当加大口服免疫剂量会使口服免疫组产生的抗体水平增加,并且不会引起不良反应。病理组织学检查发现,各口服免疫组小鼠的肝脏、肾脏、肺脏、脑组织的形态结构较为正常,未发生病变,表明基因重排RV疫苗株口服免疫副作用小、安全性较好。本试验结果为研制新型口服疫苗开辟了新的方向。     

鸡红核和蓝斑核的细胞构筑及其5-HT神经元的分布研究

光镜下观察鸡脑内红核、蓝斑核细胞构筑及其5-羟色胺神经元分布情况,结果表明:红核没有明显的亚核划分,由大、中、小3种细胞构成;鸡脑内有蓝斑核存在,核团呈横向宽、背腹向扁的板状,位于脑桥前部的室底灰质腹外侧区,被盖背外侧核后方,主要由小型细胞构成。用免疫组织化学SP法的研究结果表明红核和蓝斑核内有5-HT阳性神经元分布,这在禽类属首次提出。     

基因重排狂犬病病毒疫苗株免疫效果的初步研究

试验探究了基因重排狂犬病病毒(RV)弱毒疫苗株能否刺激小鼠产生RV抗体免疫球蛋白G(IgG),比较了其不同免疫方式、不同免疫剂量对小鼠抗体水平的影响及安全性评估。选取28只体重(20±3)g、35日龄左右的昆明系小白鼠,随机分为7组:第1组为低剂量口服组:复合佐剂50μL+病毒液50μL;第2组为中等剂量口服组:复合佐剂150μL+病毒液150μL;第3组为高剂量口服组:复合佐剂300μL+病毒液300μL;第4组为低剂量注射组:复合佐剂50μL+病毒液50μL;第5组为中等剂量注射组:复合佐剂150μL+病毒液150μL;第6组为高剂量注射组:复合佐剂300μL+病毒液300μL;第7组为口服对照组:复合佐剂300μL+SRV9亲本毒株300μL,分别于0、7、14d进行免疫,采用ELISA定量检测试剂盒对各免疫组小鼠的血清IgG水平进行检测,免疫期结束后取各免疫组小鼠的肝脏、肾脏、肺脏、脑组织制作病理组织切片对疫苗的安全性进行评估。结果显示,各免疫组均产生了RV抗体IgG;肌内注射免疫产生的抗体速度较口服免疫快,但肌内注射免疫会导致小鼠发病死亡;600μL口服免疫组产生的抗体水平显著高于100、300μL口服免疫组及亲本毒株SRV9对照组(P0.05),说明适当加大口服免疫剂量会使口服免疫组产生的抗体水平增加,并且不会引起不良反应。病理组织学检查发现,各口服免疫组小鼠的肝脏、肾脏、肺脏、脑组织的形态结构较为正常,未发生病变,表明基因重排RV疫苗株口服免疫副作用小、安全性较好。本试验结果为研制新型口服疫苗开辟了新的方向。     

10种血清型腺相关病毒在哺乳动物子宫原代细胞中的转导

为探究10种血清型腺相关病毒(AVV)在哺乳动物子宫原代细胞中的转导情况并筛选出转导效率高的血清型，通过酶消化法获取哺乳动物子宫上皮和基质细胞、Real-Time PCR测定病毒滴度以及荧光显微镜观察和Western blot技术探究其转导效率。结果显示，10种血清型在小鼠子宫上皮细胞中，AAV-DJ可转导；在小鼠子宫基质细胞中的转导效率为AAV-DJ>AAV1、AAV2、AAV5>AAV9。在兔子宫上皮细胞中的转导效率为AAV5、AAV-DJ>AAV2>AAV9;在兔子宫基质细胞中的转导效率为AAV-DJ>AAV1、AAV2、AAV5>AAV9。在猪子宫上皮和基质细胞中的转导效率为AAV-DJ>AAV2、AAV5>AAV1。在人子宫基质细胞系中的转导效率为AAV-DJ>AAV2、AAV9>AAV1、AAV3>AAV8。综上所述，在转导哺乳动物子宫上皮细胞时，AAV-DJ、AAV5和AAV2效果较好；在转导哺乳动物子宫基质细胞时，AAV-DJ、AAV2、AAV9、AAV5、AAV1效果较好。     

Ghrelin和SHU9119通过促进CART神经元调节小鼠采食

为研究Ghrelin和SHU9119如何作用于小鼠下丘脑可卡因和苯丙胺转录调节因子(CART)神经元参与小鼠采食调控,本试验以免疫荧光技术为主,利用代谢笼和冰冻切片的方式获取试验材料,综合小鼠采食量测定,CART神经元表达数目的统计学分析,及CART神经元、刺鼠相关蛋白(AgRP)神经元同黑皮质素4型受体(MC4R)神经元间共定位信息,对Ghrelin和SHU9119通过不同方式介导CART神经元以参与小鼠采食调控这一作用机理进行初步阐述。结果显示:健康4周龄C57BL/6雄性小鼠,腹腔注射Ghrelin(50μg/kg,n=3)后,其下丘脑背内侧核(DMH)区域CART神经元表达数目显著上升(P0.05);而SHU9119(50μg/kg,n=5)则显著促进弓状核(ARC)区域的CART神经元的表达(P0.01),2种药物促进CART神经元表达的部位并不相同。同时,2种药物的单独注射均可对小鼠采食活动产生一定的促进作用(Ghrelin组n=7;SHU9119组n=7)。有趣的是,CART神经元在DMH区域同AgRP神经元之间具有突触联系,而CART神经元与表达MC4R的神经元之间的共表达关系则发生在ARC区域。结合已有的研究证据,我们推测Ghrelin和SHU9119可能通过不同方式参与对CART神经元表达的调节,并最终影响小鼠采食活动。期望通过本研究为今后进一步探明外周信号分子如何参与促厌食神经元对机体能量代谢调控提供新的思路和证据。     

Ghrelin通过弓状核区域α型雌二醇受体神经元介导雌性小鼠采食调控

Ghrelin作为一种具有特殊功能的能量调控因子,在能量代谢平衡以及生殖调控研究中被广泛关注,然而其在小鼠性周期变化过程中发挥调控的机制尚不明确。本研究通过腹腔注射ghrelin研究其对小鼠性周期不同阶段采食量及血清中雌二醇浓度的影响,并运用免疫荧光技术鉴定了ghrelin与弓状核(arcuate nucleus,ARC)区域分布的α型雌二醇受体(estrogen receptorα,ERα)神经元之间的共表达情况。结果表明,ghrelin(50μg·kg-1)注射后的2h内可显著促进小鼠发情前期采食量(P0.05);ghrelin可极显著抑制雌激素的分泌(P0.01),其他阶段未见显著性差异。同时,ghrelin显著增强小鼠各个性周期中ARC区域的神经元活动(P0.05或P0.01),均能直接作用于ARC区域ERα神经元,且在发情前期共表达率最高。因此,我们推论小鼠发情前期,腹腔注射ghrelin可直接作用于下丘脑区域的ERα神经元调控血清中雌二醇浓度,并最终介导雌性小鼠采食。     

裂叶荨麻提取物对2型糖尿病小鼠模型糖脂代谢影响的研究

研究裂叶荨麻提取物对高脂高糖饮食联合链脲佐菌素(STZ)诱导2型糖尿病小鼠模型糖脂代谢的影响。将造模成功的糖尿病小鼠随机分为空白组,模型组,阳性组,荨麻提取物低、中、高剂量组(0.5、1、2 g/kg)。各组小鼠灌胃给药35 d,期间测定小鼠的体重、饮食量、饮水量、空腹血糖(FBG),末次给药结束后,测定血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)含量。连续灌胃治疗35 d后,小鼠的体重下降、多饮多食症状得到改善,荨麻提取物低、中、高剂量组FBG值分别下降了4.29、7.41、7.16 mmoL/L。与模型组相比,荨麻提取物各组小鼠TC值分别下降了1.17、0.76、1.77 mmoL/L,TG值分别下降了0.53、0.60、0.71 mmoL/L,LDL-C值分别下降了0.50、0.39、0.65 mmoL/L,HDL-C值分别升高了0.66、1.13、1.24 mmoL/L,其中高剂量组效果最为显著(P<0.01)。结果表明,裂叶荨麻提取物对2型糖尿病小鼠的高血糖及高血脂症状有一定的缓解作用。     

自发性乳腺癌小鼠的引进及其应用于澳洲茄碱抗癌药效评价

为了引进自发性乳腺癌小鼠模型并应用于澳洲茄碱在体抗癌药效评价,试验自国家遗传改造小鼠资源库引入SPF级MMTV-Py MT雄雌种鼠并进行培育,培育成功后以0.8,1.6,3.2 mg/m L浓度的澳洲茄碱及其溶剂以按体重100μL/10 g腹腔注射MMTV-Py MT阳性小鼠,结合瘤块内加注100μL,每周一、周四各注射一次,连续注射6周,并以游标卡尺测量瘤块大小。结果表明:引进的MMTV-Py MT自发性乳腺癌小鼠模型能正常繁育并能再现其乳腺癌发病的经典病程,在药效评估上,与对照组相比,以0.8,1.6 mg/m L浓度的澳洲茄碱腹腔注射100μL/10 g结合瘤块内注射100μL,瘤块生长抑制率分别为14%~22%(P=0.06或P0.05)和38%~44%(P0.05),而腹腔注射3.2 mg/m L组6周死亡率为87.5%(7/8)。说明MMTV-Py MT自发性乳腺癌小鼠模型引进成功,并且可应用于抗癌药物澳洲茄碱在体药效评价研究。     

华兰生物取得H7N9流感疫苗临床试验批件

华兰生物(002007)28日晚间公告,2015年1月28日,公司控股子公司华兰生物疫苗有限公司申报的H7N9流感病毒裂解疫苗(15μg/0.5 mL/瓶、30μg/0.5 mL/瓶)、H7N9流感全病毒灭活疫苗(15μg/0.5 mL/瓶、7.5μg/0.5 mL/瓶)取得国家食品药品监督管理总局下发的药物临床试验批件,批件号:2015L00053、2015L00054、2015L00055、2015L00056。     

巴戟天多糖对口蹄疫疫苗免疫增强作用研究

为了研究巴戟天多糖对口蹄疫疫苗的免疫增强作用,试验将50只(4～7周龄)昆明小白鼠(体重18～22 g)随机分为5组,分别为空白(Naive)组、多糖(MOPS)组、疫苗(FMDV)组、疫苗+多糖(FMDV+MOPS)组、疫苗+铝佐剂(FMDV+alum)组,每组10只,Naive组小鼠注射生理盐水200μL,MOPS组小鼠注射巴戟天多糖溶液(2.5μg/μL)200μL,FMDV组小鼠注射猪口蹄疫O型灭活疫苗200μL,(FMDV+MOPS)组小鼠注射猪口蹄疫O型灭活疫苗200μL与巴戟天多糖200μL,(FMDV+alum)组小鼠注射猪口蹄疫O型灭活疫苗200μL与铝佐剂(1μg/μL)200μL,14 d之后进行二免。二免后第14天对小鼠进行眼眶采血,分离血清;无菌取脾脏,进行脾单细胞体外培养,收集上清液;采用小鼠间接ELISA试剂盒检测血清中特异性抗体IgG和血清中细胞因子IFN-γ、IL-4的含量。结果表明:与Naive组比,(FMDV+MOPS)组的IgG、IFN-γ和IL-4含量极显著升高(P0.01);(FMDV+alum)组的IgG、IFN-γ含量均极显著升高(P0.01),IL-4含量显著升高(P0.05);FMDV组的IgG、IFN-γ含量均显著升高(P0.05),IL-4含量差异不显著(P0.05);MOPS组的IgG、IFN-γ及IL-4含量差异不显著(P0.05)。说明MOPS作为口蹄疫疫苗免疫增强剂,可明显提高小鼠特异性抗体IgG和细胞因子IFN-γ、IL-4的含量,增强对小鼠的免疫应答。     

两株H9N2亚型禽流感病毒的全基因组序列测定及其对小鼠的感染性研究

为了解2015年广西地区活禽市场中的两株鸡源H9亚型禽流感病毒(AIV)A/chicken/GX/S30272/2015(H9N2)(简称GX/272/15株)和A/chicken/GX/S30825/2015(H9N2)(GX/825/15株)的生物学特性,本研究对其进行了全基因组序列测定和小鼠的感染性试验。核苷酸序列分析表明,两株病毒的HA基因发生了I~(155)T、H~(183)N、A~(190)T和Q~(226)L突变,这些突变与增强病毒的人源受体结合特性密切相关。遗传演化关系表明,两株病毒的HA基因均属于欧亚分支Beijing/1/94谱系。GX/272/15株的8个基因节段和GX/825/15株的HA节段来源于H9N2 AIV,GX/825/15株的其余7个基因节段分别来源于H4N2、H10N6、H7N9、H7N1、H9N2、H6N6和H3N2多种不同亚型的AIV。两株病毒均可感染小鼠,且均不需要经过适应即可在小鼠的鼻甲内进行复制。但仅GX/825/15可以在小鼠的肺脏内复制。两株病毒均未造成小鼠死亡,仅引起小鼠体重的轻微变化,对小鼠呈低致病力。本研究结果表明,H9N2亚型AIV能够感染哺乳动物,应加强后续分离病毒对人类健康危害性的评估。     

鸡端脑向旁嗅叶投射的起始核——DiI顺逆行追踪研究

为观察鸡旁嗅叶(LPO)的传入神经纤维联系,采用DiI示踪法追踪投射到LPO的起始核。首先将50 g/L DiI乙醇溶液注射到鸡端脑的LPO,进行逆行追踪,寻找投射到LPO的起始核,初步判断投射至LPO的端脑内起始核为副高纹状体(HA)和古纹状体(AS)后,再将DiI颗粒植入离体固定脑的这两个核团,进行顺行追踪。逆行追踪的结果发现,在HA和AS有神经元被标记。顺行追踪结果发现在LPO有终末出现。结果表明端脑内的两个核团HA和AS,直接投射到LPO。     

侧脑室注射Leptin对大鼠下丘脑前阿黑皮素mRNA表达的影响

给体重 180～ 2 0 0 g的雌性 SD大鼠侧脑室中注射重组瘦素 (L eptin) 1μg,采用 RT- PCR测定了其下丘脑前阿黑皮素 (POMC) m RNA和 L eptin受体 (OB- R) m RNA的表达水平。结果表明 ,注射重组 L eptin后 ,OB- R基因和 POMC基因表达量均上升 ,与生理盐水注射组、空白对照组相比差异显著 (P<0 .0 5 ,P<0 .0 1)。由此认为 ,L eptin在大鼠下丘脑 POMC的调控功能中起着重要作用     

猪小肠抗菌肽对小鼠迟发型变态反应的影响试验

本研究旨在探索不同质量浓度的猪小肠抗菌肽对小鼠迟发型变态反应的影响和猪小肠抗菌肽的药理活性。选取36只体重在20 g左右的健康昆明小鼠,随机分成6组,分别为试验组1、试验组2、试验组3、试验组4、对照组和空白组,每组6只。试验组1、试验组2、试验组3、试验组4小鼠皮下注射多肽含量为0.1 mg/mL、0.3 mg/mL、0.5 mg/mL和原液0.7 mg/mL的猪小肠抗菌肽,注射剂量为0.01 mL/g;对照组及空白组分别皮下注射生理盐水,注射剂量为0.01 m L/g,连续注射7 d,之后将试验组和对照组采用二硝基氟苯(DNFB)致敏,剂量50μL/只,致敏5 d后,采用DNFB以剂量10μL/只进行二次攻击(空白组未致敏但有攻击),24 h后,以小鼠左右耳片重量之差(肿胀度)代表迟发型变态反应剧烈程度。结果显示,试验组1、2、3及4小鼠的肿胀度均值分别为9.4 mg、9.6 mg、10.1 mg和10.1 mg,均显著(P0.05)高于对照组(7.8 mg)和空白组(0.7 mg)。结果表明,猪小肠抗菌肽对小鼠的迟发型变态反应具有增强作用,猪小肠抗菌液能够提高机体免疫水平。     

外源褪黑素对鸡胚发育的影响研究

为了探讨胚蛋注射褪黑素对AA肉鸡胚胎发育的影响,将540个种蛋在孵化第2.5天随机分成6组(每组9个重复,每个重复10个),对照组正常孵化,开孔组不进行注射,其余四组分别开孔注射生理盐水、0.17μmol/L、1.7μmol/L和17μmol/L的褪黑素,注射标准为10μL/蛋,出雏后检测胚蛋存活率、胚蛋重、出雏时间、出雏雏鸡重、雏鸡性别、雏鸡生殖器官长度和内脏器官重等指标。结果表明：(1)注射1.7μmol/L (P<0.01)或17μmol/L (P<0.001)褪黑素显著延迟雏鸡出雏时间;(2)注射17μmol/L褪黑素显著降低雏鸡胰脏重(P<0.05)。研究为深入探讨褪黑素影响动物胚胎发育的机理提供了一个模型。     

2种家蚕蛋白酶抑制剂的重组表达及产物对胰岛素口服吸收的影响

口服胰岛素(INS)治疗糖尿病存在因胃肠道的蛋白酶而发生药物降解的问题。从家蚕蛹中分离了Bm Kazal、Bm CP82种蛋白酶抑制剂,设计其编码基因引物序列克隆2个目的基因,构建重组表达载体p ET28a-Bm Kazal和p ET32a-Bm CP8在大肠埃希菌(Escherichia coli)中表达并纯化了重组Bm Kazal和Bm CP8蛋白。将这2种蛋白酶抑制剂与INS混匀制成INS口服悬液给小鼠灌胃,研究其对INS口服吸收的影响。试验结果表明:按1.5 IU/kg剂量皮下注射INS的对照组小鼠,血药达峰浓度C_(max)为(7.56±1.40)m IU/L,达峰时间T_(max)为1 h;口服0.5μg/μL Bm CP8+15 IU/kg INS组、0.5μg/μL Bm Kazal+15 IU/kg INS组、0.5μg/μL Bm CP8+0.5μg/μL Bm Kazal+15 IU/kg INS组小鼠的血药达峰浓度C_(max)分别为(6.07±0.51)、(7.12±0.89)、(9.20±2.00)m IU/L,达峰时间T_(max)均为3 h;而按15 IU/kg剂量单纯口服INS对照组小鼠的血药浓度一直维持在4.32 m IU/L左右。以上结果说明Bm CP8、Bm Kazal能够协同INS经小鼠胃肠道口服吸收入血液,而且二者联合使用效果更好,使小鼠体内对INS的口服生物利用度由1.51%提高至4.17%,有促进小鼠对胰岛素口服吸收的作用。