产PVL金黄色葡萄球菌对奶牛乳腺上皮细胞内质网应激和自噬的影响

【目的】研究产PV-杀白细胞素（Panton Valentine leukocidin,PVL）金黄色葡萄球菌ATCC49775（产PVL标准菌株）、ΔPVL 49775（PVL基因缺失株）以及体外重组PVL（rPVL）对奶牛乳腺上皮细胞（bovine mammary epithelial cells,BMECs）内质网应激和自噬的影响,为系统阐述金黄色葡萄球菌及PVL对BMECs损伤的分子机制奠定基础。【方法】用感染复数（MOI）为30的金黄色葡萄球菌菌株ATCC49775和ΔPVL 49775感染BMECs,于感染后3和6 h取样;用100 ng/mL rPVL处理BMECs,于处理后1,3和6 h取样;以未处理的BMECs为对照（CK）。用免疫荧光法检测样品BMECs细胞的自噬体荧光强度;提取样品细胞的总蛋白,以GADPH为内参蛋白,采用Western blot法检测各处理组内质网应激相关蛋白（CHOP和GRP78）和自噬相关蛋白（LC3 Ⅱ、ATG5、Beclin1和p62）的相对表达量。【结果】ATCC49775、ΔPVL 49775感染后不同时间,BMECs自噬体荧光强度均极显著（P＜0.01）高于CK,内质网应激相关蛋白（CHOP和GRP78）和自噬相关蛋白（LC3-Ⅱ、ATG5、Beclin1和p62）的表达水平也大多显著(P<0.05)或极显著（P＜0.01）高于CK;同一处理时间下, ATCC49775感染组自噬体荧光强度和相关蛋白表达水平均显著(P<0.05)或极显著（P＜0.01）高于ΔPVL49775感染组。 rPVL处理后不同时间,BMECs的自噬体荧光强度均极显著（P＜0.01）高于CK,内质网应激和自噬相关蛋白的表达水平大多极显著（P＜0.01）高于CK。【结论】产PVL金黄色葡萄球菌ATCC49775、ΔPVL 49775以及rPVL均加剧了BMECs的内质网应激和自噬,说明PVL在金黄色葡萄球菌感染BMECs的过程中有重要作用。     

不同品种绵羊D-loop区遗传多样性研究

线粒体DNA（Mitochondria DNA,mtDNA）D-loop区的进化速度快且多态性丰富, 因此在生物的遗传多样性和起源进化研究中具有重要意义。采用PCR扩增和基因测序的方法分析甘肃高山细毛羊（G）、欧拉羊（O）、杜泊羊（D）、蒙古羊（M）、小尾寒羊（S）和湖羊（H）的线粒体DNA D-loop区遗传多样性和进化关系。结果显示,试验羊D-loop区中GC含量低于AT含量,共检测到171 个变异位点,单一多态位点58 个,简约信息位点113 个,共87 个单倍型,单倍型多样度（H_d）分别为 0.993、1.000、0.968、1.000、0.933和1.000,核苷酸多样度（P_i）分别为 0.022 37、0.014 63、0.011 93、0.017 47、0.021 40和0.023 48,湖羊的平均核苷酸差异度最大（K=31.622）,而杜泊羊最小（K=15.995）。蒙古羊和杜泊羊的核苷酸平均差异数K_xy最大,蒙古羊和欧拉羊的核苷酸平均差异数K_xy最小。核苷酸歧异度D_xy与核苷酸平均差异数K_xy结果一致。系统发育树结果显示,湖羊与小尾寒羊先聚集在一起,然后与杜泊羊聚为一类;欧拉羊与蒙古羊先聚为一类,然后与甘肃高山细毛羊聚为一大类,说明湖羊与小尾寒羊遗传差异小。     

gga- miR-17-5p在鸡骨骼肌和脂肪沉积相关组织及细胞中的表达差异及其关键靶基因的筛选

为探究gga-miR-17-5p在鸡脂肪沉积和肌肉发育中的作用,本研究以矮小品系S3（DW）和隐性白羽鸡（RR）为试验素材,分析gga-miR-17-5p在不同时期腿肌、肝脏、腹脂组织及细胞中的表达差异,并通过KEGG及蛋白互作分析筛选关键靶基因。结果表明：1）gga-miR-17-5p在腹脂、肝脏和腿肌组织中均可表达。在腹脂中,gga-miR-17-5p在0周表达有品种差异（P<0.05）,且2个品种在0周时显著高于其他周龄（P<0.05）;在肝脏中,gga-miR-17-5p在16周有品种差异（P<0.05）,S3系在16周显著高于其他周龄（P<0.05）,隐性白羽肉鸡在16周显著高于0周和8周（P<0.05）;在腿肌中,gga-miR-17-5p在0周有品种差异（P<0.05）,S3系在0周和2周显著于其它周龄（P<0.05）,隐性白羽肉鸡在0周显著高于其他周龄（P<0.05）。2）在脂肪细胞中,gga-miR-17-5p在肌内脂肪细胞诱导分化6 d后的表达显著高于增殖期和分化1 d（P<0.05）;腹脂细胞分化1 d的表达最低,显著低于增殖期、分化4 d和分化6 d（P<0.05）。3）在成肌细胞中,gga-miR-17-5p的表达量随分化时间的延长而升高,且分化6 d的表达显著高于增殖期（P<0.05）。4）KEGG及蛋白互作分析表明,PTEN、MAPK3、PIK3R1、BECN1和PLCB4是gga-miR-17-5p重要的靶基因。RT-qPCR结果表明,PTEN和PIK3R1在成肌细胞增殖期的表达显著高于分化期（P<0.05）。综上,gga-miR-17-5p的表达存在显著的品种和组织差异性,miR-17-5p很可能通过PTEN、MAPK3、PIK3R1、BECN1和PLCB4来影响肌肉发育和脂肪沉积,其中PTEN和PIK3R1尤为关键。本研究为深入研究gga-miR-17-5p的功能和机制提供了坚实的理论基础和数据支撑。     

咳喘穴位敷贴对哮喘大鼠肺组织JAK1、STAT6表达的影响

目的 观察咳喘穴位敷贴对慢性支气管哮喘大鼠肺组织JAK1、STAT6表达的影响。方法 将40只SD大鼠随机分为对照组、哮喘模型组、咳喘穴位敷贴组、地塞米松组,每组10只。除对照组外,其余各组采用卵清蛋白致敏并激发的方法制备慢性支气管哮喘大鼠模型。造模成功后,咳喘穴位敷贴组大鼠相应穴位贴敷咳喘穴位敷贴进行干预治疗,地塞米松组大鼠腹腔注射地塞米松磷酸钠注射液0.5 mg/（kg·d）。治疗14 d后取大鼠肺组织,HE染色观察肺组织形态学变化,免疫组织化学、Real time PCR检测肺组织JAK1和STAT6蛋白及mRNA的表达水平。结果 与对照组相比,哮喘模型组大鼠肺组织可见大量炎性细胞浸润,气道内有大量分泌物,肺泡结构紊乱;与哮喘模型组相比,咳喘穴位敷贴组和地塞米松组大鼠肺组织炎性细胞浸润减少、气道分泌物减少、肺泡排列规则。与对照组相比,哮喘模型组大鼠气道上皮 JAK1、STAT6蛋白和mRNA表达明显升高（P<0.01）;与哮喘模型组相比,咳喘穴位敷贴组和地塞米松组大鼠气道上皮JAK1、STAT6蛋白表达下调（P<0.05或P<0.01）,JAK1、STAT6 mRNA表达下调（P<0.01）。结论 咳喘穴位敷贴能够改善支气管哮喘大鼠支气管及肺组织炎症,其机制可能与降低JAK1、STAT6 mRNA和蛋白表达有关。     

意大利蜜蜂AmMETTL3基因的分子克隆与表达模式

为克隆意大利蜜蜂（Apis mellifera ligustica）的AmMETTL3基因,解析AmMETTL3蛋白的分子特性,并测定AmMETTL3在工蜂不同组织及发育时期的表达谱。通过PCR扩增AmMETTL3的CDS并进行Sanger测序验证;使用相关生物信息学软件预测AmMETTL3的理化性质和分子特性,鉴定METTL3的结构域和保守基序,并构建系统进化树;采用RT-qPCR检测AmMETTL3在工蜂7个组织及5个不同发育时期的相对表达量。结果表明：成功克隆到AmMETTL3的CDS并发现AmMETTL3不含典型的跨膜结构域和信号肽;METTL3在各种昆虫中高度保守且含1个MT-A70结构域和3个相同的保守基序;AmMETTL3与东方蜜蜂METTL3的亲缘关系最近;相较于触角中的表达量,AmMETTL3的表达量在咽下腺中极显著上调（P<0.01）,在中肠中极显著下调（P<0.01）;AmMETTL3在3日龄幼虫中的表达量极显著（P<0.01）低于卵中的表达量,在12日龄蛹中的表达量极显著（P<0.01）高于卵中的表达量,在2、6、12、15和18日龄工蜂体内的表达量极显著（P<0.01）低于1日龄工蜂体内的表达量。研究结果为深入探究AmMETTL3的功能及其参与的表观调控机制提供了参考和依据。     

不同繁殖状态下绵羊繁殖相关组织中CHGA基因的表达分析

为探究绵羊繁殖相关组织中CHGA基因在不同繁殖状态下的表达差异,选取不同光照条件下的成年苏尼特母羊（季节性发情品种）及不同繁殖时期的小尾寒羊母羊（常年发情品种）的下丘脑等10种组织,利用qPCR技术分析不同繁殖状态下各组织中CHGA基因的相对表达量。结果表明,CHGA基因在2个绵羊品种的不同组织中广泛表达且脑部组织中该基因的表达量高于其他组织;不同光照条件下苏尼特羊各组织中CHGA表达差异均不显著（P＞0.05）;黄体期小尾寒羊垂体中CHGA表达量显著高于卵泡期（P＜0.05）,子宫体中该基因的表达量极显著高于卵泡期（P＜0.01）。以上结果暗示CHGA基因可能参与小尾寒羊不同繁殖时期垂体和子宫生理变化的调控。     

甘加藏羊发情周期和乏情期血浆T3和T4浓度动态变化及HPOA轴 DIO2和 DIO3的表达

为探讨甲状腺激素（T3、T4）及其合成酶（ DIO2、 DIO3）对甘加藏羊生殖活动的调控,本研究以发情周期和乏情期甘加藏羊（Ovis arise）为研究对象,应用酶联免疫吸附法、实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹技术检测甘加藏羊发情周期和乏情期血浆中T3和T4的动态变化、下丘脑-垂体-卵巢轴（Hypothalamic-pituitary-ovarian axis, HPOA）及甲状腺组织中 DIO2、 DIO3 mRNA和蛋白的表达。结果显示：整个发情周期和乏情期血浆中T3和T4浓度均以脉冲式和波动式交替变化,T4的浓度均显著高于T3,T3的平均浓度在发情前期最高,T4的平均浓度在发情期最高,与其他各时期比较差异均显著。藏羊发情周期和乏情期HPOA和甲状腺组织中均有 DIO2 、 DIO3 mRNA及其蛋白的表达,且差异显著;垂体、卵巢、甲状腺 DIO2 mRNA及其蛋白的相对表达量均高于 DIO3 mRNA及其蛋白的相对表达量。甘加藏羊发情周期和乏情期血浆T3、T4的浓度和 DIO2、 DIO3在HPOA及甲状腺组织中的表达呈现动态变化,表明甲状腺激素及其合成酶参与调控甘加藏羊的生殖活动。     

Beclin1 mRNA在鼻咽癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨自噬相关基因Beclin1在鼻咽癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系。方法 RT-PCR检测50例鼻咽癌、20例癌旁黏膜和15例鼻咽黏膜慢性炎症组织中Beclin1表达,并分析其与临床分期、病理组织类型和转移的关系。结果鼻咽癌、癌旁黏膜、慢性炎症组织中,Beclin1阳性表达率分别为48.0%、85.0%、93.3%,mRNA相对表达量分别为（0.658±0.158）、（0.802±0.086）、（0.809±0.097）;鼻咽癌组织中Beclin1阳性表达率及mRNA相对表达量均显著低于癌旁黏膜及慢性炎症组织（P〈0.05或0.01）。Beclin1 mRNA表达与鼻咽癌临床分型、组织学分型、淋巴结转移有关（P〈0.01）。结论 Beclin1基因在鼻咽癌组织中表达下调,提示自噬活性的改变可能对鼻咽癌的发生、发展起一定作用。     

鸡源复合益生菌对肉仔鸡免疫球蛋白及Toll样受体通路的影响

目的 探究益生菌对肉仔鸡血清免疫球蛋白与肠道Toll样受体通路的影响。方法 选择90只1日龄白羽肉杂鸡,随机分为3组,即对照组、益生菌低剂量组和益生菌高剂量组。其中对照组饲喂基础日粮,益生菌低剂量组在每千克基础日粮中添加复合益生菌10⁹ cfu,益生菌高剂量组在每千克基础日粮中添加复合益生菌2×10⁹ cfu。第21天,每组随机选取10只鸡放血致死,并立即采集样本,进行ELISA、免疫组化、qPCR及Western blot检测。结果 在第21天,益生菌低剂量组和益生菌高剂量组鸡的料肉比分别比对照组降低9%和12% (P<0.05),血清IgG含量分别升高28%和40% (P<0.01),血清IgM含量分别升高44%和58% (P<0.01)。益生菌低剂量组TLR4蛋白表达和mRNA相对表达量比对照组分别升高33%和28%,AP-1蛋白表达和mRNA相对表达量分别比对照组升高106%和67% (P<0.01);益生菌高剂量组TLR4蛋白表达及mRNA相对表达量比对照组分别升高106%和69%,AP-1蛋白表达及mRNA相对表达量比对照组分别升高163%和98% (P<0.01)。结论 饲喂益生菌可降低肉仔鸡料肉比,提高血清中IgG、IgM的含量,并且通过调节Toll样受体通路蛋白表达可以提高机体免疫力。     

凉山半细毛羊与山谷型藏绵羊染色体核型的比较

以微量全血培养法制备染色体标本,对凉山半细毛羊和山谷型藏绵羊的染色体核型进行了比较。结果表明,凉山半细毛羊和山谷型藏绵羊二倍体细胞核型均为公羊2N=54,XY;母羊2N=54,XX。2品种羊6号、24号染色体相对长度差异显著(P<0.05),1号、15号、23号、25号染色体相对长度在P<0.10水平上存在差异,其余染色体相对长度差异均不显著(P>0.10)。第1号、2号、3号染色体的臂比指数差异不显著(P>0.10)。同源染色体不等长现象在凉山半细毛羊和山谷型藏绵羊中均存在,凉山半细毛羊条比值较山谷型藏绵羊高,其中1号染色体在P<0.10水平上显著高于山谷型藏绵羊。     

规模化养殖场的羊只智能称重分栏系统设计

为提高规模化养羊场的生产效率和精细化管理水平,设计开发应用于大型养殖场的羊只体重快速测量及分栏管理智能装备。设计的羊只智能称重分栏系统以可编程控制器为核心,通过气力驱动的智能化机电设备系统,利用光电传感器检测羊只行走位置,可实时读取羊只无线电子耳标身份数据,快速获取羊只体重数据并进行羊只分栏。现场试验结果表明,系统工作稳定可靠,当系统对15只不同羊进行试验时,羊只体重数据的实际值和测量值差异不显著(P>0.05),系统的称重数据最大相对误差为1.2%、平均相对误差为0.71%、称重分栏效率为3只/min,该羊只智能称重分栏系统可示范应用于规模化养殖场。     

杜泊羊和湖羊杂交F1代公羊能量及蛋白质的需要量

为解决目前在畜牧业中广泛存在的营养供给不能满足动物需要或者营养供给过剩造成的饲料资源浪费等问题,以20～35 kg杜泊羊和湖羊杂交F1代公羔为研究对象,将营养需要解析为维持需要和生产需要,由饲养试验、消化代谢试验和比较屠宰试验组成。在消化代谢试验中,将12只试验羊随机分为自由采食、70%采食量以及50%采食量3个组,采用全粪尿收集法得到3个采食量水平的ME值、蛋白质和能量消化率,并利用比较屠宰试验分3期进行屠宰测定,将得到的数据建立系列数据模型,最终推算出营养需要量。结果显示:维持净能(NEm)需要量为46.3 kcal/kg0.75、维持代谢能(MEm)需要量为112.0 kcal/kg0.75、维持净蛋白质(NPm)需要量为1 009±98 mg/kg0.75,20～35 kg日增重300 g的公羔生长净能需要量为2.58～5.42 MJ/d、日增重300 g的生长净蛋白质需要量为111～129 g/d。本研究结果确定了该品种肉羊育肥期前半阶段的能量和蛋白质需要量,为该品种肉羊营养的科学供给提供了理论依据。     

小尾寒羊与湖羊遗传检测的比较

以我国特有的两大优良绵羊品种小尾寒羊和湖羊为检测对象,采用中心产区典型群随机抽样法,从小尾寒羊中心产区山东省梁山县和湖羊中心产区浙江省湖州市分别抽取小尾寒羊60只和湖羊63只,用水平板淀粉凝胶电泳检测11个结构基因座的频率,观测9项相对形态学特征标记的表型频率,测定其体尺,记录当地生态环境特征,从结构基因座、形态学特征和生态特征3个方面对两者间的遗传差异进行定量分析。结果表明：小尾寒羊在Al、Es-D、Ly座位上是单态性的,而湖羊仅在Al、Es-D上是单态性的;小尾寒羊的基因平均纯合度高于湖羊;两者除在角的有无和色斑上存在差异外,其他表型特征基本相似;在生态特征方面,湖羊产区与小尾寒羊产区相比,海拔低、年平均气温高、降水量充沛。     

不同日龄小尾寒羊和滩羊小肠pH及其主要消化酶活性的变化

【目的】研究断奶后不同日龄绵羊(小尾寒羊和滩羊羔羊)小肠pH及其主要消化酶活性的变化规律,为酶制剂和代乳料研制提供依据。【方法】选用健康无病的小尾寒羊和滩羊各36只,在相同条件下饲养,45日龄断奶,分别于80,120,160和200日龄屠宰取样,测定十二指肠、空肠和回肠内容物的pH值及其主要消化酶活性。【结果】绵羊小肠内容物pH值随日龄增长缓慢上升,从偏酸性转变为中性;小尾寒羊和滩羊小肠内容物pH值差异极显著(P<0.05);十二指肠、空肠和回肠3部位内容物pH值间分别存在极显著差异(P<0.01)。随着日龄增长,绵羊小肠内容物中乳糖酶活性逐渐降低(P<0.01),并存在品种(P<0.05)和部位(P<0.01)间的差异。绵羊小肠内容物中淀粉酶活性随日龄增长逐渐上升(P<0.01),没有表现出品种之间的差异,但部位间差异极显著(P<0.01)。【结论】绵羊内容物中淀粉酶、乳糖酶活性随日龄变化而变化,但pH值较稳定;小肠内容物中pH值和乳糖酶在品种间存在显著差异(P<0.01);十二指肠、空肠和回肠内容物中pH值、乳糖酶和淀粉酶活性在部位间存在极显著差异(P<0.01)。     

几个绵羊品种染色体Ag-NORs的研究

利用外周血淋巴细胞培养法研究了 4个绵羊品种的 Ag- NORs,结果表明 ,绵羊 Ag- NORs定位于 1 ,2 ,3,4和未判定的 2对小型染色体上。同羊、汉中绵羊、兰州大尾羊及罗姆尼羊的 Ag- NORs均数分别为 5.41± 1 .1 9,4.50± 1 .2 9,5.2 9± 1 .2 1和 5.60±1 .2 4 ,并且在品种间有显著或极显著差异 (P<0 .0 5,P<0 .0 1 )     

阿勒泰羊的染色体分析

应用外周血淋巴细胞培养及染色体制备技术对阿勒泰大尾羊染色体核型进行了研究,并测量了各染色体所相对长度和着丝点指数;并进行了G一分带分析,为准确配对和分组提供了依据;对四倍体和非整倍体的出现进行了讨论。     

羊传染性胸膜肺炎的病理学诊断

采用常规的病理学诊断方法,对一例羊传染性胸膜肺炎进行了确诊。结果发现该病例具有胸膜肺炎的典型病理变化,呈现纤维素性肺炎和淋巴细胞性间质肺炎,纤维素性物质的渗出和炎性细胞的浸润很明显,肺胸膜增厚,同时在肺间质还可见水肿、出血、血栓和淋巴栓的形成;另外心、肝、肾也均有不同程度的变性,淋巴结呈反应性增生。同时还检验出其病原为支原体。     

乙酰甲喹在绵羊体内的药物动力学研究

【目的】分析乙酰甲喹(Mequindox)在成年绵羊体内的药物动力学过程,为兽医临床合理用药提供理论依据。【方法】绵羊单剂量快速静脉注射乙酰甲喹7 mg/kg,7 h内不同时间12次颈静脉采血,用高效液相色谱法测定血药浓度。【结果】乙酰甲喹在绵羊体内的药物动力学配置符合无吸收因素一室开放模型,其药-时曲线最佳方程为:C=10.833e-0.340 4t;主要药物动力学参数:半衰期(t(1/2))为(2.062 2±0.264 5)h,药-时曲线下面积(AUC)为(32.367 6±2.921 6)μg/mL.h,表观分布容积(Vd)为(0.642 7±0.042 9)L/kg,体清除率(CLB)为(0.217 7±0.019 3)L/(kg.h)。【结论】乙酰甲喹在绵羊体内分布广泛,消除较快。     

绵羊染色体Ag-NORs分布位置初探

以凉山半细毛羊、山谷型藏绵羊为研究对象,以微量全血培养法制备染色体标本,采用Howell和Black(1980)的方法获得染色体Ag-NORs带,并对其进行比较。结果表明:在存在分歧的4、6号染色体间,依据染色体相对长度对染色体进行排序,将染色体NOR位点定位于4号染色体上;两品种羊NORs位点除分布在已报道的1p、2q、3q和4、25号染色体末端外,还分布在1、2号中着丝粒染色体的染色体臂上以及另外1或3条端着丝粒染色体臂上;并就Ag- NORs数目的多态性与生产性能相关性进行了探讨。