拮抗放线菌RA-2所产抗生素的分离提纯及稳定性研究

拮抗放线菌RA-2发酵液经过乙酸乙酯萃取,浓缩,硅胶GF254薄层层析分离提纯到抗生素。对该抗生素进行不同温度、pH以及UV不同时间照射处理后,测定该抗生素的抑菌活性。试验结果表明：25℃水浴30min,该抗生素的抑菌活性为70.88%,在25-65℃之间,抗生素的抑菌活性与原液的抑菌活性在P〈0.05水平上无显著性差异。不同pH处理后,在pH5-9之间,抗生素具有较强的稳定性。不同UV照射时间的处理后,照射15、45min的抑菌活性与未照射原液的抑菌活性在P〈0.05水平上无显著性差异。拮抗放线菌RA-2所产的抗生素组分单一。硅胶GF薄层层析分离的组分2具有抑菌活性,为35.49%。     

海南省土壤拮抗放线菌的分离筛选及发酵液抑菌作用测定

从海南南部尖峰岭、海南省中部五指山林地,海口市郊土壤中分离了91个放线菌菌株。进行了放线菌与病原菌在培养皿内的对峙培养,筛选出3个对芒果炭疽菌、芒果褐色蒂腐病原菌拟茎点霉和芒果蒂腐病原菌链格孢菌有较强拮抗作用的菌株尖峰岭11、38、39。将3个拮抗放线菌株液体培养,发酵液对病菌孢子萌发和芽管生长均有抑制作用,尤其对芽管伸长有较好抑制作用。冷冻干燥法进一步将发酵液中抑菌活性物质粗提,发现10mg/l提取物对芒果炭疽菌和链格孢菌孢子萌发和菌丝生长有强烈的抑制作用。     

放线菌4-1的鉴定及其发酵液抑菌作用和稳定性探究

旨在挖掘盐碱地菌种资源并对其抑菌功能进行检测。以自行分离的放线菌4-1为候选菌株,利用形态学、生理生化以及分子生物学手段对其种属地位进行综合鉴定;采用琼脂扩散法和菌丝生长速率抑制法对其发酵液抑菌活性和稳定性进行评价。结果表明,菌株4-1与紫赤链霉菌(Streptomyces puniceus)最为相似,同源性高达99.93%,建立的系统发育树中二者亲缘关系最为相近;菌株4-1发酵液的抑菌谱比较广泛,对病原性细菌（6株）和病原性真菌（5株）都具有一定的抑制效果;酸碱、热、紫外线对发酵液稳定性影响较小,但当温度高于90℃或p H <4时,发酵液抑菌活性下降。该菌种资源的获得及功能评价,为进一步扩大根际促生细菌种类及应用奠定了菌种基础。     

一株放线菌代谢产物对桑种子萌发和幼苗生长的影响

为拓宽放线菌生物活性物质的功能应用,用不同浓度的蚯蚓内附生放线菌AEC 2代谢物处理桑种子,探讨其对桑种子萌发和幼苗生长的影响.结果表明:放线菌AEC 2代谢物能够提高桑种子的质量和品质,提高种子发芽率和发芽势,缩短发芽时间,提高胚轴／胚根长,且浓度越低效应越好,但差异不显著.AEC 2代谢物能够显著提高幼苗可溶性蛋白含量、促进种子中贮存物快速转化为可溶性糖类、提高氧化酶活性,平衡氧化和抗氧化水平,使幼苗的新陈代谢水平处于活跃状态.在试验浓度范围内以0.031 25 mg/ml效果最佳.     

黄瓜枯萎病的拮抗放线菌菌株的分离与鉴定

黄瓜枯萎病是严重影响黄瓜产量和品质的土传病害。从大棚土壤中分离出放线菌,对娄彻氏链霉菌（Streptomyces rochei）亲缘关系最近的G8菌株进行了黄瓜枯萎病菌的抑菌试验和大棚黄瓜枯萎病的防治试验。结果表明,从大棚黄瓜土壤中共分离出43个放线菌,其中31个属于链霉菌属;G8菌株可抑制黄瓜枯萎病菌丝生长,对大棚黄瓜枯萎病的防治效果达75.5%;基于16S rDNA和特异性引物PCR产物测序序列与NCBI-BLAST数据库比对,将G8菌株鉴定为娄彻氏链霉菌。     

一株拮抗辣椒炭疽病菌的放线菌筛选及鉴定

辣椒炭疽病是辣椒生产的主要危害之一,为了更好地防治辣椒炭疽病,采用土壤稀释法从云南等地土壤中分离得到100多株菌放线菌。采用平板对峙实验以及抑菌谱检测,筛选对辣椒炭疽病菌具有较好的拮抗作用的放线菌。结果表明：分离得到的100多株放线菌中,有10株放线菌的发酵液对辣椒炭疽病菌有较强的拮抗作用,其中以18号菌株抑菌效果最好,发酵液稀释10倍抑菌率达到68.2%。通过培养形态特征、生理生化特征,以及16S rDNA序列分析,初步鉴定该放线菌为华丽黄链霉菌(Streptomyces flaveus),其16S rDNA在GenBank的注册号为JX293177。     

向日葵菌核病生防放线菌的分离筛选及拮抗作用的初探

根据微生物间的拮抗作用,试从病地土壤中分离拮抗放线菌,探索利用放线菌对向日葵菌核病进行生物防治的途径。从内蒙古呼和浩特市、巴彦淖尔、包头等地所采集的土壤中分离出38个放线菌菌株,经过平板拮抗作用初测,有8个菌株(F-1、F-3、F-6、F-8、F-11、F-15、F-21、F-25)对向日葵核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)有拮抗作用。选出其中2个作用最明显的菌株(F-6、F-8),观察其在平板对峙培养中对向日葵核盘菌的抑制作用及其代谢产物对向日葵核盘菌的作用。结果表明:F-6、F-8菌株及其代谢产物对向日葵核盘菌均有明显的抑菌作用。同时,对F-6、F-8两菌株的培养性状和形态特征进行了初步观察。     

拮抗放线菌111A202的种类鉴定及其16S rDNA序列分析

对分离自新疆棉花地土壤的一株拮抗放线菌菌株111A202进行了形态特征、培养特征、生理生化特征、细胞壁组分分析及16S rDNA序列分析。结果表明该菌基内菌丝无横隔、不断裂, 气生菌丝分枝、孢子丝波曲,孢子椭圆形,表面光滑。细胞壁化学组分Ⅰ型。以16S rDNA序列为基础构建了包括7株相关种属菌在内的系统发育树, 111A202与变铅青链霉菌(Streptomyces lividans)、微白黄链霉菌(S. albidoflavus)的16S rDNA序列的相似性达到99.5%和99.6%。根据以上多相分类结果,放线菌111A202的形态培养特征及其细胞组分与链霉菌一致,且与微白黄链霉菌近似性很高,因此,可以将放线菌111A202定名为微白黄链霉菌111A202(S. albidoflavus 111A202)。     

哈密瓜内生拮抗细菌的筛选及其抑菌物质研究初报

通过测定菌体及胞外分泌物抑菌活性,从378个哈密瓜内生细菌中筛选出了对瓜类细菌性叶斑病菌、疫霉病菌具有较强拮抗活性的菌株。对抗菌活性显著的197菌株的胞外抑菌活性物质进行了初步研究。研究显示:197菌株胞外分泌物的抗菌效价可达80倍;其抗菌活性物质为蛋白质类物质,可通过15%-90%饱和度的硫酸铵盐析,其中75%硫酸铵饱和度提取的粗蛋白的抗菌活性最强;该抗菌蛋白具有一定的耐热性,温度高于40℃后抑菌活性逐渐下降,100℃下仍能保持部分抑菌活性,120℃时全部丧失。     

拮抗大豆斑疹病菌放线菌菌株的筛选和促生作用及防效研究

大豆斑疹病在全球范围内发生,严重影响大豆生产。为了避免化学杀菌剂的诸多缺点,添加生防菌逐渐成为防治大豆斑疹病的一种替代策略。然而,对大豆斑疹病生防菌剂开发和防效研究却鲜有报道。本试验采用梯度稀释涂布法从多种植物根际土壤样本中共分离出186株放线菌菌株。利用共培养法和牛津杯法筛选到8株拮抗大豆斑疹病菌(Xanthomonas axonopodis pv. glycines, Xag)的放线菌,其中拮抗能力最强的是Sl-3菌株,发酵滤液抑菌圈直径为(32.5±1.5)mm。根据形态特征、生理生化试验、16SrDNA序列和系统发育分析,鉴定Sl-3菌株为丁香链霉菌(Streptromyceslilacinus)。丁香链霉菌Sl-3菌株乙酸乙酯粗提物具有良好的抑制Xag生长的效果。采用96孔板法测定粗提物最低抑菌浓度为64μg mL–1。扫描电镜观察结果显示Sl-3菌株的粗提物对Xag细胞有一定的损伤作用,影响细胞分裂、细胞膜合成,从而抑制细菌生长。粗提物还能抑制Xag胞外多糖的产生,影响生物膜形成,降低Xag的侵染毒力。傅里叶红外光谱法测定结果显示,粗提物处理会对Xag细胞表面的脂质、蛋白质...     

影响放线菌H菌株抗菌活性发酵条件的研究

采用单因素试验及正交试验,对放线菌H菌株的发酵条件进行了初步研究,确定了其最佳发酵培养基的组成及基本培养条件。以玉米粉、蛋白胨、K2HPO4,MgSO4,NaCl,CaCO3为基本培养基,3.6%玉米粉为碳源,0.5%蛋白胨为氮源,起始pH值为7.5,最佳装瓶量为50mL/500mL,在28℃,转速为200r/min下,摇床培养120h,所获得的发酵滤液的抑菌作用最强,滤纸片法测定其对金黄色葡萄球菌抗菌活性,抑菌圈直径达24.6mm。     

土壤放线菌X1的筛选及其抑菌活性初探

筛选具有抑菌活性的放线菌是开发农用活性抗生素的基础。本文采用生长速率法和孢子萌发法,测定了从土壤中分离出的6株拮抗放线菌的抑菌活性,并对抑菌活性较好的放线菌X1菌株进行初步研究。生长速率法试验表明,放线菌X1菌株发酵液对供试12种植物病原菌菌丝生长均有不同程度的抑制作用,发酵液对苹果腐烂病菌、苹果轮纹病菌和葡萄白腐病菌菌丝的抑制率均为100%。孢子萌发试验表明,放线菌X1菌株发酵液对黄瓜枯萎病菌孢子萌发的抑制率为100%。在浓度为1 mg/mL时,放线菌X1菌株发酵液乙酸乙酯萃取物对苹果腐烂病菌、苹果轮纹病菌和葡萄白腐病菌菌丝的抑菌率均大于90%。放线菌X1菌株抑菌谱较广,对植物病菌的防治有很大的研究开发潜力。     

放线菌菌株97发酵液中活性代谢产物的抑菌作用及稳定性测定

本实验室从采自山东临沂和日照的烟田土样中分离得到一株对烟草黑胫病菌(Phytophthora parasitica var. nicotianae)具有拮抗作用的放线菌菌株97,为了明确该生防菌的抑菌作用和抑菌因子的理化性质,采用菌丝生长速率法,对菌株97发酵液中活性代谢产物的抑菌作用及稳定性进行了研究。结果表明,发酵液中活性代谢产物对多种植物病原真菌均表现较好的抑制作用。此外,发酵液中活性代谢产物在低温贮藏下仍有很好的抑菌效果,在偏酸性或中性条件下稳定,有较强的热稳定性和抗紫外线照射能力,对蛋白酶K稳定性较好。     

深绿木霉生物学特性研究

从灰树花染病时分离出一株具生防潜力的木霉菌,为了明确其生物学特性,对该菌株进行了形态学鉴定,并对其生长培养基、温度、pH、碳源、氮源和维生素等生物学特性进行了研究。结果表明：该菌为深绿木霉;该菌株在PDA、MEA、基本培养基和查彼培养基上均能生长,但在PDA培养基上生长最快,2天即能长满平皿。在10~37℃范围内,菌丝均能生长,以25℃时菌丝生长最快,30℃时产孢量最大。在pH 2~10范围内,菌丝菌均能生长,pH 5~7时菌丝生长最快。牛肉膏为菌丝生长的最佳氮源,葡萄糖为最佳的碳源,维生素B6对菌丝生长最有利。     

绿色木霉菌株Tv04-2固体发酵条件研究

以产孢量为测定指标,通过单因子和正交试验对人参根部病害拮抗绿色木霉菌株Tv04-2固体发酵条件进行了筛选,获得了以玉米粉、麦麸等廉价农产品及其副产物为碳、氮源的最佳固体发酵培养基,其配方为:在250 mL三角瓶中装入20 g固体基质,其中玉米粉∶麦麸按1∶1比例混合,FeSO4含量0.1 g,水7 mL,接种量4 mL;最佳发酵条件为:25,20和28℃下依次发酵2 d。利用优化培养基及发酵条件进行发酵试验,可以获得高达4×109cfu/g的产孢量,为人参根部病害高拮抗活性木霉菌剂的生产和应用奠定了基础。     

杀虫蛋白基因cry8Fa2的克隆及在Bt无晶体突变株中的表达

以本实验室分离的Bt菌株B-DLL质粒DNA为模板,利用cry8类基因特异性引物JJX5和JJX3扩增出3.5kb的片段,将该片段插入克隆载体pMD 18-T中,筛选获得一个含新基因的克隆pMD-cry8new.序列测定表明,该基因编码区为3 525 bp,编码的蛋白质由1 174个氨基酸残基组成,理论分子量为133....     

Bt杀虫蛋白基因cry8Ea2的克隆、表达和活性

根据已知Bt cry8类基因的全长序列设计一对特异性引物JJX5和JJX3,以Bt菌株B-DLL的质粒DNA为模板扩增出3.5 kb大小的片段;将该片段插入大肠杆菌表达载体pET-21b中,并完成了该片段的全序列测定.该基因编码区为3 495 bp,编码的蛋白质由1 164个氨基酸残基组成,相对分子质量为131.8 kDa,等电点为pH 4.71,为弱酸性蛋白.该基因(GenBank:EU047597)编码的氨基酸序列与Cry8Ea1的氨基酸序列同源性高达99.31%,被国际Bt基因命名委员会正式命名为cry8Ea2.经1PTG诱导后该基因在大肠杆菌BL21(DE3)中能够正常表达130 kDa的蛋白.表达产物对暗黑鳃金龟.琉璃弧丽金龟和柳蓝叶甲具有活性,在浓度为8.98ug/s时对暗黑鳃金龟、琉璃弧丽金龟一龄幼虫14 d的校正死亡率分别为46.67%和55.56%;在浓度为89.8 ug/mL时对柳蓝叶甲三龄幼虫96 h的校正死亡率为33.33%.     

热研8-79旺产期开割树生理特性研究初报

以中国中规模推广级早熟高产品种热研8-79旺产期开割树为材料,测定了产量、干含、蔗糖、无机磷、硫醇和镁离子等指标变化,以期研究该品种的生理特性和对s/2d/3+ET1%刺激割胶制度的适应性.结果表明,无刺激条件下,相对于生理基本平衡的RRIM600品种,热研8-79具有高糖、高硫醇和高产的特性;刺激后产量增加不明显,胶乳的稳定性增强,但耱和干胶含量有所下降,显示出部分生理疲劳效应.根据该品种产量很高、较易死皮的特点,生产中刺激割胶应遵循低浓度低频率原则,同时必须加强施肥,提高管理水平.     

热研8-79旺产期开割树产胶生理特性研究初报

以我国中规模推广级早熟高产品种热研8-79旺产期开割树为材料,测定了产量、干含、蔗糖、无机磷、硫醇和镁离子等指标变化,以期研究该品种的生理特性和对s/2d/3+ET1%刺激割胶制度的适应性。结果表明,无刺激条件下,相对于生理基本平衡的RRIM600品种,热研8-79具有高糖、高硫醇和高产的特性;刺激后产量增加不明显,胶乳的稳定性增强,但糖和干胶含量有所下降,显示出部分疲劳生理效应。根据该品种产量很高、较易死皮的特点,生产中刺激割胶应遵循低浓度低频率原则,同时必须加强施肥,提高管理水平。