枣叶片离体再生体系研究进展

枣树高效、稳定离体叶片再生体系的建立是有关枣树细胞工程学和基因工程学研究的基础.枣叶片离体再生困难,再生频率低,这制约了枣树细胞工程学和基因工程学的发展.为建立高效离体叶片再生体系提供参考,对影响枣离体叶片再生植株的主要因素(如外植体、培养基、培养条件等因素)进行了分析,综述了已取得的研究成果,指出了今后研究的重点.     

葡萄柚品种哈路比叶片离体再生体系的优化

为给葡萄柚的大规模育苗提供方法,以葡萄柚品种哈路比的叶片为外植体,在MS培养基中添加不同浓度配比的激素,探索其离体再生的优化体系。试验结果如下:培养基为MS+0.6 mg/L 6-BA+1.0 mg/L 2,4-D愈伤组织诱导率最高为78.57%,愈伤组织呈黄绿色,结构疏松,长势良好;MS+3.0 mg/L 6-BA+1.5 mg/L NAA是诱导愈伤组织分化不定芽的最佳培养基激素浓度配比,分化率最高为48%,不定芽分化快,长势良好;培养基MS+2.0 mg/L IBA有利于诱导生根,生根率达60.74%。初步建立了葡萄柚哈路比的离体再生体系。     

中红杨离体叶片植株再生体系建立

以中红杨组培苗的叶片为试验材料,研究了基本培养基、植物生长调节物质浓度、外源添加物和光照条件对离体叶片不定芽再生的影响,并获得了完整的再生植株。结果表明:1)最适基本培养基为MS,最佳植物生长调节剂和外源添加物的组合为0.5 mg·L^-1 6-BA+0.2 mg·L^-1 NAA+30 g·L^-1蔗糖;2)暗培养有利于愈伤组织诱导,光照16 h·d^-1有利于不定芽的诱导,不定芽形成率可达83.3%;3)将叶片再生植株转接到MS+0.2 mg·L^-1 6-BA+0.1 mg·L^-1 NAA培养基中壮苗培养,在1/2 MS+0.2 mg·L^-1 IBA+20 g·L^-1蔗糖+6.5 g·L^-1琼脂培养基诱导生根,生根率96.4%,生根苗大田移栽成活率86.8%。     

长寿花叶片再生体系的研究

以长寿花红色品种“Rako”为试材,研究建立叶片的离体再生体系。结果表明：激素配比影响叶片的再生能力;叶片背面接触培养基比正面接触培养基更有利于分化再生;用新生幼叶作外植体,再生频率为70％以上,瓶苗生根率为95％,移栽成活率为98％。     

灯盏细辛离体叶片再生植株的研究

以灯盏细辛（Erigeron breiscapus）叶片为外植体,研究不同培养基配方对灯盏细辛离体培养过程中愈伤组织、不定芽形成,壮苗培养和离体植株生根等方面的影响。研究结果表明,低浓度的细胞分裂素与生长素配比可诱导灯盏细辛愈伤组织产生,其中MS＋BA1．00mg／L＋NAA0．50mg／L培养基配方,愈伤组织诱导率达到99．22％;不定芽诱导需要较高浓度的细胞分裂素,适宜培养基MS＋KT4．00mg／L＋IBA0．50mg／L的不定芽诱导率为38．51％,诱导系数为0．49;MS＋BA0．50mg／L＋NAA0．50mg／L＋水解酪蛋白1000．00mg／L＋PVP1000．00mg／L＋GA0．50mg／L培养基可促进不定芽分化生长,形成离体植株;离体植株生根需要高浓度生长素,适宜培养基为1／2MS＋BA0．50mg／L＋NAA3．00mg／L＋IBA3．00mg／L＋活性炭0．30％。     

影响聊红槐离体叶片再生因子的研究

蔗糖浓度对聊红槐试管苗的增殖倍数的影响较小,但影响试管苗的生长形态,在WPM培养基中蔗糖浓度由原来20 g·L-1增加到60 g·L-1时,叶片由皱褶变为正常,颜色变为深绿.经过以下培养程序可以建立叶片再生体:将聊红槐增殖分化苗接种于WPM(附加6-BA 2.0mg·L-1 NAA0.05 mg·L-1 蔗糖20～60 g·L-1琼脂7.0 g·L-1)上,继代培养20 d,获得分化型试管苗;剪取叶片投入1 mg·L-1Vc无菌水浸泡1～3 min,接入WPM(附加6-BA 2.0 mg·L-1 NAA 0.1 mg·L-1 蔗糖40 g·L-1 琼脂7.0g·L-1)上,光照培养30-40 d,获得剪切口组织脱分化;环境控制(光照时间12 h,暗培养12 h,光强2000 lx,温度25℃;黑暗温度15℃,pH值5.8)下培养20～30 d,诱导出绿色愈伤组织;转接WPM培养基(附加6-BA 4.0 mg·L-1 NAA 0.05 mg·L-1 GA 2 mg·L-1 蔗糖60 g·L-1 琼脂7.0 g·L-1)上,培养后由绿色愈伤组织萌发出不定芽,再生不定芽率为89%.     

花烛的离体培养及再生体系的建立

对花烛进行离体培养和再生体系的研究。以MS作为基本培养基,离体培养花烛的叶柄,结果表明,诱导愈伤组织6-BA4mg/L时诱导效率最高,诱导丛生芽时KT与6-BA的搭配优于2,4-D与NAA的组合。组培苗在MS减半并附加0.5mg/L NAA的培养基上诱导生根最适宜,生根率达100%。     

沙田柚不同外植体离体培养再生体系建立研究

以沙田柚实生苗不同外植体为对象，进行了离体培养再生体系建立研究，结果表明：在以MT为基础附加不同浓度BA的培养基上，下胚轴与子叶均再生出不定芽，二者达最大不定芽分化率所需的BA浓度不同，其中下胚轴BA3mg/L，子叶为BA4mg/L NAA0.5mg/L。添加0.5mg/L的KT可明显地提高不定芽发生率。下胚轴、子叶丛芽继代所需的激素浓度分别是：BA2.0mg/l IAA0.5、BA3.0mg/L IAA0.25mg/L。组培养所需的生根条件为1/2MS IBA（0.5-1.0）mg/L或ABT2.0mg/L。以卡那霉素作选择剂时，下胚轴与子叶的选择浓度分别为70mg/L、50mg/L。     

都百凤桃树离体植株再生培养的研究

以从日本引进的桃树品种都百凤为试材,采用正交设计,研究了6-BA,NAA,接种芽数,活性炭对不定芽增殖与壮苗的影响,探讨了激素、培养基盐浓度、活性炭对都百凤组培苗生根的影响。结果表明,都百风桃树离体植株再生继代增殖培养基为MS＋6BA3mg／L～5mg／L＋NAA0．1mg／L～0．2mg／L＋蔗糖30g／L,培养基pH值为5.9,以3芽为1个转接单位,培养温度为25℃,光照强度2000Lx,光照时间16h／d;生根培养基为1／2MS＋IBA0.2mg／L＋蔗糖20g／L＋琼脂7g／L＋活性炭0．4g／L,培养基pH值为6．0,培养温度为22℃,光照强度1600Lx,光照时间16h／d;组培苗转入生根培养基舌暗处理2d,再转到光照下培养有利于生根。     

油茶离体培养诱导再生植株的研究

采用普通油茶Camelliaoleifera优良无性系湘林4号为实验材料,研究了离体条件下带芽的茎段、幼胚、子叶的愈伤组织的形成和植株再生技术。茎段离体培养以MS为基本培养基,附加6-BA3.0mg·L-1+NAA1.0mg·L-1对芽进行诱导,诱导率达到83.33%;继续在此培养基上继代得到丛生芽,增殖比例为1∶20。对于幼胚和子叶,附加2,4-D2.0mg·L-1+KT1.0mg·L-1诱导愈伤组织得到很好的效果,将愈伤组织转到附加6-BA3.0mg·L-1+NAA0.05mg·L-1和6-BA2.5mg·L-1+IAA1.5mg·L-1的培养基上诱导出不定芽,诱导率达到90%以上。芽苗增殖以MS+6-BA2.5mg·L-1+IAA1.5mg·L-1的培养基为好。将无菌苗在MS培养基(附加NAA7mg·L-1)上诱导生根,生根率达93%。     

红富士苹果叶片主要矿质元素含量变化规律研究

为了给苹果叶片营养诊断提供依据,在河北省太行山南段片麻岩山地,连续3 a定位研究了不同产量水平红富士苹果叶片N、P、K、Ca、Mg、Mn、Zn等主要矿质元素含量的变化规律.结果表明:红富士叶片N、P、K、Ca含量均为6月中下旬最低;叶片全年含N量为0.774%~1.726%,含P量为0.036%~0.184%,含K量为1.483%~2.403%,含Ca量为0.427%~2.020%;高产树含量高,低产树含量低;叶片含Mg量为0.24%~1.31%,6月下旬最高,7月中旬最低;叶片含Mn量为29~203 mg/kg,5月中旬最高,8月中旬最低;叶片含Zn量为32.667~83.667 mg/kg,8月中旬最低,高产树低,低产树高。     

群众杨组培体系的研究

以群众杨(Populus popularis 35-44)为材料建立组织培养再生系统。研究表明，外植体取材部位对不定芽的分化率有非常明显的影响，叶片的再生能力较弱，而幼茎的再生能力很强，叶柄的再生能力介于叶片及幼茎之间。因此，无菌苗幼茎是快繁和基因转化的理想外植体。在组培体系建立过程中发现再生不定芽中存在生长优于对照的个体，是否为体细胞无性系变异有待进一步研究。     

苹果叶片再生体系建立研究

以乔纳金苹果试管苗叶片为外植体诱导不定芽再生，在培养基中添加不同浓度TDZ与NAA或IAA配合，使用琼脂或Polygel作为固化剂。结果表明，较适宜的叶片再生不定芽的培养基为TDZ 2．0mg／L和NAA 1．0mg／L，或TDZ 2．0mg／L与IAA 4．0mg／L。较适宜的组培固化剂为5．0g／L的Polygel。在不同的组培固化剂中，卡那霉素均能抑制不定芽的发生数量，但琼脂和Polygel效果不同。     

核桃试管苗生根培养的研究

以新疆绵核桃为试材,对继代培养无根试管苗的生根进行了研究.结果表明：生根诱导方法、外源IBA水平及IBA处理时间、光周期以及试管苗发育状态等均对不定根发生具有明显影响.选取生长旺盛、节间较长,叶片嫩绿的幼态苗,采用间接诱导生根法,即用50～80 mg/L IBA浸渍处理试管苗基部60～90 min,然后转至不含生长调节物质的1/2 DKW培养基,先黑暗诱导14 d,再在16 h/d光照下培养,可诱导试管苗生根率达60%以上.     

‘优雅’薰衣草茎段再生体系的建立

以‘优雅’薰衣草带腋芽茎段为外植体,探讨外植体的最佳消毒时间和不同植物生长调节剂种类与水平等因素对其腋芽增殖与不定根形成的影响。结果表明:利用0.1%的HgCl2消毒,外植体的最佳消毒时间以6min为宜;继代增殖培养基以MS+BA 1.0mg/L+IBA 0.15mg/L为宜;生根培养基以1/2MS+IBA 0.5mg/L为宜。     

Plant regeneration by somatic embryogenesis in Eucalyptus spp.: current status and future perspectives

Forest tree improvement programs benefit from the emergence of new biotechnological strategies that complement plant developmental biology and discovery of genes associated with complex multigenic traits. Recently, significant progress has been made in the area of plant regeneration via somatic embryogenesis (SE) for economically important tree species (e.g. pines). These advances have opened up new scenarios for deployment of new high-performance clonally replicated planting stock to forest plantations and may also be a valuable tool for the development of efficient gene transfer techniques. Although high rates of plant propagation from axillary shoot proliferation can be achieved easily in many Eucalyptus species, even higher multiplication rates through SE have been recorded in other tree species. If the clonal propagation of Eucalyptus through SE proves to be an effective propagation method, it has the potential to meet the increasing industrial demands for high-quality uniform materials and to rapidly capture the benefits of breeding programs. Since 2002 a reproducible protocol for SE induction from mature zygotic embryos of E. globulus has been available. However, for SE to be useful in E. globulus improvement programs, the frequency of SE initiation, maturation, germination and acclimatisation needs to be improved and controlled. If this technology could be extended to elite germplasm, it would become an economically feasible tool for large-scale production and delivery of improved planting stock. This is one of the greatest current challenges in Eucalyptus tissue culture. In this review we update the most important aspects of SE in Eucalyptus with particular emphasis on E. globulus. We highlight both genetic control and the influence of different environmental factors in the SE process (e.g. medium composition, antioxidants, light and plant growth regulators), from induction to plant acclimatisation in both primary and secondary SE.     

枣树叶片愈伤组织培养与再生植株的研究

为探讨枣树组织培养育种及快繁技术,以木枣、骏枣和狗头枣组培苗叶片为外植体,通过诱导愈伤组织形成再分化出不定芽,从而建立高效的再生系统。试验结果表明,不同基因型或同一基因型的不同部位的材料其培养效果间有差异;试管枣苗茎尖倒数1～3片叶是合适的外植体材料;6-BA与2,4-D在枣树叶片愈伤组织诱导中有极显著的交互作用,二者的配比浓度水平影响愈伤组织的诱导增殖和质量;枣树叶片愈伤组织诱导和继代增殖培养适宜的培养基是3/4MS+6-BA0.2 mg.L-1+2,4-D 2.0 mg.L-1+琼脂0.55%+蔗糖3%。6-BAI、BA与TDZ在枣树愈伤组织分化培养中有显著的协同作用,不定芽诱导的适宜培养基是CYI+6-BA 1.0 mg.L-1+IBA 0.2 mg.L-1+TDZ 0.015 mg.L-1。     

4个芦荟品种离体快繁技术研究

该文对库拉索、中华、木立和高尚4个芦荟品种离体快繁技术进行了研究。结果表明，库拉索和木立芦荟不定芽间接分化，库拉索主要是丛生芽＋愈伤组织方式，木立芦荟主要是愈伤组织的形式；中华芦荟和高尚芦荟主要是丛生芽方式直接分化。4个芦荟品种的最适继代增殖培养基库拉索为MS＋6-BA2．0mg／L＋NAA0．1mg／L，繁殖系数为7．29；中华芦荟为MS＋6-BA1．0mg／L＋NAA1．5mg／L，繁殖系数达6．64；木立芦荟为MS＋6-BA2．0mg／L＋NAA0．1mg／L，繁殖系数达14．0；高尚芦荟为MS＋6-BA1．0mg／L＋NAA0．1mg／L，繁殖系数达8．10。库拉索和中华芦荟的最适生根培养基为MS＋NAA0．5mg／L，生根率分别为86．5％和100％；木立和高尚芦荟为MS，生根率分别为99％和79％。最适移栽基质为珍珠岩：河沙：草炭土=1：1：1，成活率达92％。