文冠果枝条韧皮部蛋白质双向电泳体系的建立

以文冠果当年生硬枝韧皮部为材料,通过TCA/丙酮法提取总蛋白,研究了不同的蛋白质裂解液组成对双向电泳的影响,并在胶条选择、蛋白质上样量和等电聚焦时间等方面进行了优化。结果表明,TCA/丙酮提取法适用于提取文冠果韧皮部组织总蛋白,得到的图谱背景低,蛋白质点清晰;样品溶解于含有尿素和硫脲的蛋白质裂解液Ⅱ中,可显著地提高蛋白质的溶解性,获得的总蛋白溶液浓度远大于裂解液Ⅰ提取的总蛋白溶液浓度。在适宜的时间范围用超声波破碎仪处理蛋白质粉溶液有助于大幅度提高裂解液中蛋白质的浓度。等电聚焦条件宜根据样品特性选择,80 000Vh能够使得文冠果韧皮部蛋白质双向凝胶碱性端的横条纹大大减少。     

梨叶片总蛋白提取及双向电泳体系的建立

【目的】探索建立有效的梨叶片蛋白质组双向电泳体系,为梨蛋白质组的后续研究提供参考。【方法】以早酥梨叶片为材料,比较蛋白质提取方法、蛋白质裂解时间、IPG胶条的pH梯度和长度、等电聚焦程序及SDSPAGE电泳参数对梨叶片蛋白双向电泳结果的影响。【结果】采用第2种改良的三氯乙酸（TCA）/丙酮沉淀法提取梨叶片总蛋白,蛋白质裂解1 h,选用长17 cm、pH 4～7的IPG 胶条及聚焦程序Ⅱ进行等电聚焦,于100 V 30 min、180 V 6 h条件下进行SDS-PAGE垂直电泳,可以获得背景清晰、重复性好的双向电泳图谱。【结论】建立并优化了适用于梨叶片蛋白质组分析的双向电泳体系。     

玉米叶绿体蛋白质提取及其双向电泳体系建立

为了获得纯化、完整的玉米叶绿体蛋白质,以玉米品种郑单958为试验材料,利用差速离心与蔗糖密度梯度法分离叶绿体,并对其纯度和完整度进行检测;通过光学显微镜直接观察叶绿体的形态结构并测定过氧化氢酶的活性及Hill反应速率,证明已分离出纯度较高、完整的叶绿体。随后采用2种不同的蛋白质提取方法分别提取玉米叶绿体总蛋白质,并用Bradford法进行蛋白质定量,SDS-PAGE电泳结果表明,TCA丙酮沉淀法对玉米叶绿体蛋白质的提取不充分,而TCA丙酮与酚抽提相结合法明显比TCA丙酮沉淀法效果好,提出的叶绿体蛋白质的条带数目多,丰度较高,并得到了较理想的玉米叶绿体双向电泳图。     

锥栗果实双向电泳体系的建立

通过对传统双向电泳技术进行改进和优化,包括对锥栗果实蛋白不同提取方法的优化和不同pH值范围IPG胶条的比较等,以建立适于锥栗果实蛋白质组分析的双向电泳方法.结果表明,使用裂解液直接提取蛋白的方法所获得的双向电泳图谱稳定性和重复性较好,分辨率较高,经银染后可分辨出400多个蛋白点,其等电点主要分布于pH 4-7.     

木本植物叶片蛋白质双向电泳技术体系的建立

以2种木本植物的成熟叶片为材料,对传统的双向电泳进行改进和优化,得到1种适合于木本植物叶片蛋白质电泳分析的方法,此方法大大降低了木本植物叶片中次生代谢物质对双向电泳结果的干扰,明显改善了分析效果。     

苹果树腐烂病菌菌丝蛋白双向电泳体系的建立

【目的】建立苹果树腐烂病菌菌丝蛋白双向电泳体系,鉴定不同致病力材料的差异表达蛋白,为从蛋白质组学角度揭示苹果树腐烂病菌致病机理奠定基础。【方法】以苹果树腐烂病菌野生型03-8菌丝为材料,从蛋白提取方法、IPG胶条长度及胶条的pH范围3个方面对双向电泳体系进行优化,并利用该优化体系对苹果树腐烂病菌野生型03-8和致病力丧失突变体X900的菌丝蛋白进行双向电泳分析和比较,对二者的差异表达蛋白进行鉴定和分析。【结果】采用TCA/丙酮法-SDS/酚蛋白抽提法及17cm pH 4.0~7.0IPG胶条,对苹果树腐烂病菌菌丝蛋白进行双向电泳可以得到理想的蛋白图谱。利用该体系对苹果树腐烂病菌野生型菌株03-8及其致病力丧失突变体菌株X900的菌丝总蛋白进行双向电泳分析发现,2个菌株共存在27个差异表达蛋白点,其中有15个显著差异表达蛋白点;质谱分析结果表明,突变体X900中缺失的2个蛋白点4633和8518分别为丝氨酸苏氨酸蛋白激酶和假想蛋白,其他13个显著差异表达蛋白点分别为1个微管蛋白、1个线粒体内膜转移酶亚基、1个丙酮酸脱羧氧化酶、1个腺苷高半胱氨酸激酶、2个压力诱导的磷蛋白、1个己糖磷酸肌醇激酶、1个热激蛋白和5个假想蛋白。GO分析表明,该差异蛋白主要参与能量代谢、胁迫应答、细胞结构组成和未知功能。【结论】建立了适合苹果树腐烂病菌菌丝蛋白的双向电泳体系,并通过该体系分析获得了不同致病力材料的一系列差异表达蛋白。     

葛枣猕猴桃叶片蛋白质双向电泳体系的研究

[目的]建立葛枣猕猴桃叶片蛋白质双向电泳体系。[方法]通过对不同的蛋白质提取方法、裂解液配方及IPG胶条的探索,建立适应于葛枣猕猴桃叶片双向电泳技术体系。[结果]TCA/丙酮法+配制裂解液较适用于葛枣猕猴桃叶片蛋白质组分析。最终可获得蛋白质点丰富、分辨率高的双向电泳图谱,可以检测出450个清晰的蛋白质点。[结论]该研究为在蛋白质组水平揭示叶片颜色变化的调控机制奠定基础。     

叶用莴苣叶片总蛋白质双向电泳影响因素的研究

以叶用莴苣叶片为试材,研究17cm固相pH梯度胶条(pH 4～7)体系下双向电泳不同的提取方法、上样体积、定量方法等影响因素,力求确定其理想的双向电泳条件。结果表明,酚-甲醇/醋酸铵沉淀法对蛋白质提取更彻底,效果更好。对于蛋白质定量的试验,相比于常规的Bradford方法,利用无干扰蛋白质定量试剂盒具有更好的准确性。考虑叶片总蛋白质中大量Rubisco的存在,应相对增加上样量,采用考马斯亮蓝染色时取800μg到1 100μg蛋白质进行双向电泳比较合理。     

果梅花芽蛋白质双向电泳优化体系的建立

以果梅花芽为材料,比较了TCA/丙酮法和酚抽法2种总蛋白质提取方法对蛋白质双向电泳(2-DE)的影响,同时对IPG胶条种类、凝胶浓度、蛋白质上样量及染色方法等环节进行了优化.结果表明:TCA/丙酮法比酚抽法在2-DE凝胶图谱上的蛋白质点数增多,图谱背景也比较清晰,没有明显的纵横条纹;采用17 cm pH 4～7的胶条、10％的凝胶浓度、1.5～1.8 mg的蛋白质上样量,经改良胶条考马斯亮蓝G-250染色后可获得背景清晰、重复性好、蛋白质分辨率高的2-DE图谱.高质量的果梅花芽蛋白质提取方法和蛋白质双向电泳体系的优化可为果梅蛋白质组学研究奠定技术基础.     

天女木兰种子蛋白双向电泳体系的建立

【目的】探索一套适用于天女木兰种子蛋白的双向电泳体系,为研究其种子萌发过程中的蛋白表达差异奠定基础。【方法】比较蛋白的不同提取方法(酚提取法、三氯乙酸-丙酮-酚提取法、三氯乙酸-丙酮法和Tris-HCl法)、IPG胶条pH梯度(pH3～11NL、pH3～10和pH4～7)、裂解液中的尿素浓度(6,7,8,9mol/L)和分离胶浓度(10%和12.5%)等条件,对天女木兰种子蛋白双向电泳结果的影响,筛选适宜的双向电泳条件。【结果】以Tris-HCl法提取种子蛋白,在IPG胶条pH为4～7、裂解液中尿素浓度为9mol/L、分离胶浓度为12.5%的条件下,可以获得分辨率高、背景清晰、重复性好的天女木兰种子蛋白双向电泳图谱。【结论】建立了适用于天女木兰种子蛋白的双向电泳体系。     

新生仓鼠肾细胞热激蛋白SDS凝胶电泳分析

对经继代培养后的新生仓鼠肾细胞(BHK)进行热冲击应答实验后,用SDS聚丙烯酰胺凝胺电泳技术分辨出热激蛋白,并测定了热激蛋白的分子量。本文还讨论了不同提取溶液,对热激蛋白SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳行为的影响。     

应用盐溶蛋白凝胶电泳法鉴别玉米杂交种丹玉39和铁单10号

玉米杂交种丹玉39和铁单10号具有相同的母本C8605,两者形态特征差异较小,用种子形态鉴定法较难区分。采用盐溶蛋白凝胶电泳技术能比较准确地鉴别这2个品种,为防止假冒销售提供一种有力手段。     

马铃薯醇溶蛋白电泳分析方法的建立

[目的]探索并建立马铃薯醇溶蛋白酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳（A-PAGE）方法和谱带分析技术。[方法]用25%2-氯乙醇提取马铃薯醇溶蛋白,借助酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳方法对马铃薯醇溶蛋白进行分析,电泳采用浓度12.4%聚丙烯酰胺凝胶,考马斯亮蓝染色。[结果]不同品种都显示出各自特有的醇溶蛋白带谱组合,且清晰可辨。[结论]酸性凝胶电泳技术可用于马铃薯醇溶蛋白分析,具有快速、分辨率高、重复性好等特点,可为马铃薯品种（系）选育提供一种十分有效的方法。     

用X射线衍射法测定棉纤维次生胞壁的平均螺旋角

本文阐述应用X射线(002)面衍射弧测定棉纤维次生胞壁平均螺旋角(又称微纤丝角)的方法。该方法以X射线衍射强度分布为基础,而与分布曲线的峥值无关。     

应用单细胞凝胶电泳技术评价复合微生态制剂的遗传毒性

采用DNA损伤检测技术———单细胞凝胶电泳技术(SCGE,又名彗星试验)来检测复合微生态制剂对鱼类DNA的损伤,尝试利用鱼类的单细胞凝胶电泳技术来评价外来化学物质对水生生态环境的影响。试验结果表明,复合微生态制剂对鱼类的DNA没有明显的损伤作用,各试验浓度组与对照组相比没有显著性差异(P>0.05),复合微生态制剂对水体生态环境具有安全性。试验同时表明,鱼类肾细胞的DNA损伤可作为评价外来化学物质遗传毒性的生物标志物。     

棉花蛋白提取方法及其蛋白质组学研究进展

棉花是一种重要的纤维作物。综述了棉花蛋白的提取方法、棉纤维发育和棉花抗逆性蛋白质组学研究进展,并对蛋白质组学研究在棉花中的应用进行了展望。     

陆地棉SSR分子标记优化体系的建立

针对陆地棉富含酚类、多糖等次生产物的特点,建立了一种简便、快速的提取高纯度DNA的方法.同时建立了适合陆地棉SSR标记的优化体系和试验方案,并对所构建的QTL定位群体进行了SSRPCR检测,得到了清晰的多态性SSR标记,为SSR分子标记技术在棉花育种中的应用打下了基础.     

用偏振荧光法研究棉纤维细胞壁非晶区物质的分子取向

将荧光分子导入棉纤维细胞壁的非晶区,用偏振荧光分光光度计测量其荧光强度偏振分量的角分布,据此求出细胞壁非晶区物质的取向度.结果表明:非晶区物质中的分子取向不是随意的.用偏振荧光法测定陆地棉纤维中非晶区物质的取向度f为0.2左右.在荧光剂浓度为0.01％条件下,浸渍时间至少需要48h.     

低酚棉品种资源纤维品质的研究

本文对国内外120份低酚棉品种资源和91份高酚棉品种资源的纤维长度、比强度、麦克隆值、纤维整齐度比和纤维伸长率5项主要纤维品质指标进行了分析,其目的在于了解我国所掌握的低酚棉纤维品质现状和水平。结果表明,低酚棉品种(系)的2.5%跨距长度总体平均为27.9mm,属27mm 级别。但最大值为30.8mm,可达31mm 优质级别。纤维比强度总体平均为20.8g/t(?)x,属低强力范围,而最大值达到了高强力的标准。麦克隆值总体平均值超出正常范围,最小值为4.0,属于成熟度良好、细度中等范围。本文对上述5项指标全部进行了变异范围、标准差、变异系数等参数的分析。比较国内与国外的低酚棉及高酚棉品种(系)各项纤维品质指标,国内育成的低酚棉品种(系)纤维长度较国外育成的品种(系)略长。比强度低于国外育成的品种(系)。对我国各省份(或育种单位)育成的低酚棉品种(系)的5项纤维品质指标进行比较,结果为纤维长度和比强度以中棉所育成的品种(系)较优。     

综合气象条件对棉纤维比强的影响试验研究

吐絮前 30d平均气温 <15℃ ,使棉花比强明显下降。弱光及弱光下加紫外灯照射比强明显下降。吐絮前 30d内有 >30mm降水时 :没有紫外灯照射的棉花比强增大 ;有紫外灯照射的棉花比强减小。吐絮前 30d内没有 >30mm降水时 :没有紫外灯照射的棉花比强变小 ;有紫外灯照射的棉花比强变大